ти и концентрации спермы. После чего сперму разбавляют лактозо-хелато-цитратно-желточной средой (ЛХЦЖ) в соотношении 1:3 с добавлением 3,5 мл глицерина на 100 мл разбавителя. Разбавленную сперму охлаждают до +2—5 °С втечение 2 часов, после чего замораживаютв виде гранул на поверхности сухого льда либо в алюминиевых пакетах в холодном газе над жидким азотом. При замораживании в виде гранул сперму наносят каплями по 0,2 мл влунки на поверхности сухого льда. Через 5 минут после замораживания гранулы собирают и упаковывают валюминиевые пакеты по 125—130 гранул, что соответствует 25 мл, и помещают на хранение в жидкий азот.
При замораживании спермы в охлажденном Газе над жидким азотом ее предварительно разливают в охлажденные алюминиевые пакеты по 25 мл. Для изготовления пакета у стандартной трубы №16 (алюминий A-7) отрезают торцовую часть с пробкой и один конец полученной таким образом трубки закатывают дважды. Заполненный спермой пакет закрывают, дважды закатывая другой конец трубки. После упаковки пакет должен иметь размеры, мм: длина 120—125, ширина 45, толщина 4—5. При заполнении пакета спермой и его упаковке необходимо строго следить за тем, чтобы в нем не остался воздух, иначе при оттаивании неизбежны разрывы пакета. Алюминиевые пакеты должны быть маркированы кличкой жеребца и датой замораживания. Пакеты, заполненные подготовленной к замораживанию спермой, помещают в держатели, которые вместе с поплавком переносят на поверхность жидкого азота. Испаритель опускают в жидкий азот, и контейнер закрывают крышкой, расстояние от пакетов до жидкого азота |—2 см. Через 5 минут пакеты с замороженной спермой переносят вбиохранилище с жидким азотом на хранение.
Через 24 часа после замораживания оттаивают несколько гранул или один пакет из каждого эякулята и проверяют подвижность спермиев. Для дальнейшего хранения и использования допускают сперму подвижностью не ниже двух баллов.
Покрытие и искусственное осеменение кобыл... scree Er rr об ан винить Европейская технология замораживания спермы жеребца включает в себя:
-
Разведение эякулята.
-
Центрифугирование.
-
Извлечение супернатанта и добавление специального разбавителя, содержащего криопротектанты. 4. Упаковка, замораживание и оценка качества спермы после оттаивания. Для каждого из этих этапов существует значительное количество модификаций, которые также используются.
Цельный свежеполученный эякулят разбавляется 1:] разбавителем Kenny, Tak его можно транспортировать до лаборатории для замораживания несколько часов. После чего все содержимое разделяют на две равные части и центрифугируют 10 минут со скоростью 1600—1800 об/мин. Как только центрифугирование завершено, супернатант извлекается, а осадок разбавляется разбавителем такой пропорции:
-
Лактоза 11% 50 мл.
-
Раствор глюкозы/ЕОТА* 25 мл.
-
Желток 20 мл.
-
Паста EQUEX (детергент) 0,5 мл.
*Раствор глюкозы/ЕОТА готовят на стерильной дистиллированной воде. До 100 мл такой воды добавляют нижеперечисленные компоненты. Воду осторожно нагревают, помешивая для лучшего растворения солей. После растворения солей и остывания добавляют 0,08 г пенициллинаи 0,08 г стрептомицина сульфата. Хранят этот раствор при температуре +4°С. Изымают изобрашения, если не использовали втечение7 дней.
Глюкоза 6 г
Ма цитрат дегидрированный 0,37 г
Na EDTA 0.37 г Na бикарбонат 0,12 г
Центрифугируют при 1700 оборотах 20 минут, добавляют 5млглицерина. Хранят при +4 °С, если не используют втечение 6 часов — изымают. Если глицерин не добавлен, разбавитель должен храниться в морозилке при -18 °С. В таких случаях глицерин должен добавляться после оттаивания разбавителя.
Скрипка
В. Применение УЗИ-диагностики... ______
Сперма, разбавленная таким составом, не нуждается вуравновешивании рН и немедленно упаковывается при комнатной температуре. Обычно используют 0,5 мл поливинилхлоридные капилляры — соломинки. Они замораживаются в парах жидкого азота в специальном фиксаторе, поддерживающемся на расстоянии 3—7 см выше поверхности жидкого азота, при температуре около -165 °С. Оставляют капилляры на держателе на 5 минут. Затем погружают в жидкий азот. Это пропись для 0,5 мл капилляров, содержаших 200 млн сперматозоидов в капилляре. Четыре капилляра используются на 1 дозу осеменения, если после оттаивания имеют 30% подвижных сперматозоидов.
Предсказание овуляции
Во многих случаях кобылы, предназначенные для программы ИО, содержатся в условиях конюшен, где нетопытного специалиста, который Mor бы правильно предсказать овуляцию. Предсказание овуляции He так-то просто и требует принять BO внимание наличие УЗИ. Комбинируя каждодневную ректальную и вагинальную пальпацию с применением УЗИ, опытный специалист, как правило, проводит довольно точное предсказание срока наступления овуляции. Размер фолликула, его преовуляторное смягчение, изменение формы и уголшение фолликулярной стенки, и направление отечности матки — все это нужно для предсказания овуляции. Однакоу некоторых кобыл фолликулярная фаза начинается с размером фолликула около 3 см и занимает 5—6 дней до овуляции. Другие кобылы овулируют, когда фолликулы достигают 3 см. Каждая кобыла — это индивидуальность. Бывают случаи, что кобыла в начале случного сезона, когда холодно, овулирует с одним размером фолликула, а в жаркую пору размер фолликула при овуляции увеличивается. Знание преовуляторного диаметра каждой конкретной кобылы — большое преимущество в предсказании овуляции, т. к. каждая кобыла обычно овулирует при известном диаметре фолликула в определенную пору года. Следует
50
