Пробы вагинальной слизи и сыворотки крови у кобыл отбирали в следующие стадии (на основании изменений, происходящих в яичниках):
-
начальный период охоты (фолликул на 1-Й и 2-й стадиях развития
-
1.2);s2);
-
предовуляторныйs2); ; период (cp3-4);( 3
; ( 3
- период овуляции; (OB)
У коров состояние половой охоты определяли визуальным контролем по степени выраженности «рефлекса неподвижности». Стадии развития фолликула в яичнике устанавливали ректальной пальпацией. Пробы слизи и крови у коров в периол эструса отбирали по тем же стадиям. Искусственное осеменение корови проводили мано-цервикальным способом.= На кобылах применяли «ручную случку» с жеребцом. Содержание эстрадиола-17В и прогестерона в сыворотке крови коров и кобыл, а также эстрадиола-17В в вагинальной слизи кобыл изучали методами PHA и ИФА. Метод ИФА на автоматизированном иммунохимическом анализаторе "АМХ" (модуль системы версии 6.0 и модуль “Репродуктивная эндокринология”). с использованием реактивов фирмы "Эббот лабораториз"
Т- и В- лимфоциты определяли методами Е-РОК и EAC-POK («Иммунологические методы исследования в животноводстве», Метод. рекомендации, 1987). Определение числа Т-лимфоцитов общих у животных проводили методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК - эритроциты розеткообразующие). Субпопуляции Т-лимфоцитов с помощью нагрузочного теста с теофиллином. В- лимфоциты определяли методом ЕАС-РОК - розеткообразование с эритроцитами барана в системе EAC Определение общей окислительно-восстановительной активности нейтрофилов в тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТтест). Реакцию спонтанного НСТ-теста проводили на основе готового реактива нитро-синего тетразолия (фирмы «Лахема» - Чехия). Стимулированный НСТ-тест определяли с взвесью зимозана. Иммуноглобулины в крови коров анализировали рефрактометрическим методом (Методические указания по лечению и профилактике гипогаммаглобулинемии, 1985). Концентрацию лизоцима и бактерицидную активность определяли по методуи О.В.veБухарина (1972). . Активность о-амилазы, шелочной фосфатазы и лактатдегидрогеназы (ЛДГ) изучали кинетическим фотометрическим методом с помощью наборов реактивов фирмы «Диаком» (Россия). Использовали фотометр
Нозриех diagnostics Clin Check Plus LIHD 102. р Калий и натрий в сыворотке крови и вагинальной слизи определяли методом пламенной фотометрии (Меньшиков B.B., 1987). Хлор в сыворотке крови и вагинальной слизи у кобыл - колоримегрическим методом без депротеинизации с использованием реактивов фирмы «Ольвекс Диагностикум»рическим методом(Санкт-Петербург).с индикаторомХлордифенилкарбозоном.у коров определялиКальциймеркуримет-K в крови и вагинальной слизи коров и кобыл - унифицированным колориметрическим методом (Колб В.Г., Камышников B.C., 1982, Меньшиков B.B., 1987). . р Содержание общего белка в сыворотке крови и в вагинальной слизи определяли биуретовымА ye методом.' Белковые фракции (альбумины.й а @-. В- - ‚ууглобулины) - нефелометрическимс методом (Антонов Б.И..1991.« Клетки крови анализировали общепринятыми методами, лейкограмму определяли в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Гемоглобин определяли унифицированным гемоглобинцианидным методом с использованием гемоглобинометра Минигем-540, реактивами фирмы «Ренам». . Электрическую проводимость вагинальной слизи в неоднородном электрическом поле определяли на приборе «Репротест». Кристаллизацию вагинальной слизи у коров и кобыл оценивали при помощи светового микроскопа. Использовали только биоматериал без применения базисного кристаллообразующего вещества. Пенетрационный тест (слизь+сперма). На предметное стекло нано" сили каплю вагинальной слизи и каплю размороженной спермы быка. Смешивали стекля ННОЙ палочкой и сразуза затем: через 3 минуты определяли жизнеспособность и подвижность спермиев в среде. Результат оценивали в баллах. При взятии проб вагинальной слизи фиксировали ее количество. Растяжимость вагинальной слизи определяли по длине ниТиз Которая тянется между пальцев, в сантиметрах. Проводили учет реакции среды вагинальной слизи (рН) при помощи экспресс-метода индикатором оромтимоловым синим. 2 этап. Разработка прибора «Репротест» и методики определения оптимального времени осеменения коров и случки кобыл _
На основе многолетних физиологических исследований по биохимическим. физико-химическим свойствам вагинальной слизи животных в соавторствеа ca разработан6 прибор5 «Репротест»- (рис.2). Принцип работы прибора. Прибор основан на проводимости вагинальной слизи в неоднородном электрическом поле, что связано с изменением тонкой структуры белковых молекул. Данные «Репротеста»
C—O
2
i И | соответствуют степени зрелости фолликула в i | и В, яичнике. Цифровое значение на мониторе ih | ‘i i i | считали единицами (ед.). ek | Е Небольшое количество слизи наносили на Гони | | `a датчикисследованиеи занимаетснимали несколькопоказания.секунд. Все ue aa 3 этап. Производственная проверка — " ae прибора и методики в хозяйствах а.ак "| РязанскойВ Старожиловскомобласти конном заводе, в iS aha aoa ООО «Авангард», учебном — хозяйстве ip co > «Стенькино», ОПХ «Подвязье», СПК , "oR «Новоселки» была проведена производственная проверка по Рис 2. Фото прибора «Репоотест» эффективности разработанной нами методики определения оптимального времени осеменения коров и кобыл.
Она заключалась в том, что в обычных производственных условиях В хозяйстве техник искусственного осеменения коров или специалист по воспроизводству в конном заводе определял время осеменения по нашим рекомендациям, действовал согласно алгоритму и проводил осемснение коров и случку кобыл с жеребцом в пик показателей прибора. У кобыл половую охоту выявляли на 5-9 день после выжеребки с помощью «пробы» в манеже утром и вечером, с последующим установлением степени зрелости фолликула ректальной пальпацией и времени покрытия прибором «Репротест». Статистическую обработку полученных данных проводили на персональном компьютере по программе “Биометрическая обработка”, основанной на методах, изложенных Е.К. Меркурьевой (1983).
- РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Содержание овариальных гормонов у коров и кобыл в период эструса в связи со степенью зрелости фолликула в яичнике Эстрадиол-17В в сыворотке крови коров и кобыл в начале эструса был относительно низким 7,59 пг/мл у кобыл и 4,54 пг/мл- у коров. Затем по мере роста и созревания фолликула до ф3-4 возрастал в несколько раз и достигал у кобыл 62,3 пг/мл, у коров 21,42 пг/мл (рис.3). Такой повышенный эстрогенный фон определяет спенифическое поведение самок в этот перйод- «половая охота», рефлекс неподвижносйв», что указывает на готовность к спариванию. Овуляция проходила при низких значениях эстрадиола-17В.
