2.1. Контроль качества спермы

Сперму быков, сохраняемую в жидком азоте, тестируют по следующим показателям:

• подвижность спермиев в дозе;

• выживаемость спермиев при 38°С;

• наличие возбудителей инфекционных заболеваний, коли-титр. Согласно стандарту СЭВ 5155-85 «Замороженная сперма быков» после

оттаивания она должна отвечать следующим требованиям (табл. 2).

Таблица 2 – Характеристика замороженной спермы быков

после оттаивания

Примечание: Допускается к использованию сперма высокоценных быков-производителей с подвижностью не ниже 3,0 баллов и количеством спермиев с ППД не менее 1 млн.

Работу по оценке качества спермы проводят в лабораторном помещении пункта при температуре не ниже 18°С.

Для определения подвижности спермиев необходимо иметь биологический микроскоп, электрообогревательный столик Пакенаса или Морозова, предметные и покровные стекла, стеклянную палочку.

Перед началом работы включают в электрическую сеть электрообогревательный столик, переносят его на предметный столик микроскопа так, чтобы отверстия столика и микроскопа совпадали. На обогревательный столик кладут предметные и покровные стекла, палочку. Теплой стеклянной палочкой наносят на чистое предметное стекло каплю оттаявшей спермы, к ней добавляют каплю подогретого 2,9%-ного раствора цитрата натрия. Если сперма расфасована в гранулы, раствор цитрата натрия не добавляют. Каплю спермы накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом в проходящем свете при малом увеличении (180 раз). Исследования проводят при опущенном конденсоре и прикрытой диафрагме. При этом центр покровного стекла должен находиться против линзы объектива микроскопа.

Различают следующие виды движения спермиев:

• прямолинейно-поступательное – по направлению продольной

• оси спермия;

• манежное – по кругу;

• колебательное – спермии не перемещаются, а производят дви-

• жение хвостом.

Подвижность спермиев представляет собой отношение числа спермиев с прямолинейно-поступательным движением к общему числу спермиев. Этот показатель выражают в баллах. Принята 10-балльная система оценки, при которой каждый балл соответствует 10 % спермиев с прямолинейно-поступательным движением.

Так, если в поле зрения микроскопа находится 50% спермиев с ППД, то сперму оценивают 5 баллами;

• если 60% спермиев с ППД – 6 баллов;

• если 70% спермиев с ППД – 7 баллов;

• если 80% спермиев с ППД – 8 баллов; - если 90% спермиев с ППД – 9 баллов;

• если 100% спермиев с ППД – 10 баллов;

При подсчете общего числа спермиев в 1 см³ после оттаивания (без применения буферной физиологической среды) сперму разбавляют в 20 раз, для этого ее набирают в лейкоцитарный меланжер до метки 0,5, а затем до метки 11 досасывают 3%-ный раствор натрия хлорида. Концы меланжера зажимают большим и указательным пальцами и переворачивают его не менее 60 раз, что обеспечивает равномерное распределение спермиев в растворе. Первые 3 капли выпускают из меланжера, следующую каплю подносят к краю покровного стекла, притертого к камере Горяева. Под действием сил поверхностного натяжения жидкость заполняет пространство между покровным стеклом и сеткой камеры Горяева. Под микроскопом подсчитывают спермии в пяти больших квадратах, расположенных по диагонали. Найденная цифра соответствует количеству спермиев в 1 см³ , выраженному в миллионах.

• Количество спермиев с ППД в дозе (КСппд) вычисляют по формуле: КСппд = КСобППСД /100;

• где КСоб – общее число подсчитанных спермиев; ППС – процент (%) подвижных спермиев; Д – доза спермы, см³ .

Основным биологическим свойством спермы является ее оплодотворяющая способность. С целью прогнозирования оплодотворяющей способности спермы быков-производителей, закрепленных за хозяйством, проводят определение выживаемости спермиев по ускоренной методике.

3. Технология и гигиена искусственного осеменения животных Важнейшими звеньями технологии искусственного осеменения

самок в условиях хозяйства (фермы) являются:

• хранение спермы и контроль ее качества;

• подготовка спермы к использованию;

• отбор самок для осеменения;

• введение спермы в половые пути самок.

Все технологические звенья должны находиться под постоянным контролем со стороны зооветспециалистов хозяйства. Отсутствие должного контроля – наиболее частая причина низкой оплодотворяемости и бесплодия самок.

Сперма быков, замороженная в облицованных и необлицованных гранулах, пайетах в криобиологических сосудах (сосудах Дьюара), в сосуде «Харьков-34Б», по эксплуатационным характеристикам приближается к лучшим зарубежным образцам.

В процессе эксплуатации криобиологических сосудов необходимо соблюдать следующие правила:

• сосуды должны находиться в отдельном, хорошо вентилируе-

• мом помещении пункта;

• очередную дозаправку проводить при наличии не менее 1/4 жид-

• кого азота от рабочей емкости;

• при перемещении сосуда избегать сильной тряски и ударов;

• не пользоваться открытым огнем над горловиной сосуда, чтобы

• предупредить взрыв;

• категорически запрещается закрывать горловину герметично, так как это может привести к опасному повышению давления паров жидкого азота.

Если из-за неправильного обращения с криобиологическим сосудом произошла разгерметизация (на что указывает появление инея или снеговой «шубы» на горловине сосуда), его следует немедленно разгрузить от запасов спермы, жидкий азот вылить, а сосуд поставить

на отогрев в течение суток. Эти меры направлены на предупреждение возможного взрыва сосуда.

Сперма, сохраняемая в жидком азоте, подлежит оценке по подвижности спермиев не реже одного раза в 5 суток; сперма, сохраняемая при плюсовых температурах – ежедневно. Оценку по остальным показателям качества проводят в случаях снижения оплодотворяемости самок либо при возникновении арбитражных споров между хозяйством и племпредприятием, продавшим сперму.

Необлицованные гранулы спермы оттаивают в 2,9%-ном стабилизированном растворе цитрата натрия, выпускаемом в стеклянных ампулах. Ампулу вскрывают, помещают на 4–5 минут в гнездо биологического термостата, чтобы раствор прогрелся до 39–40°С. Открыв криобиологический сосуд, за крючок приподнимают канистру со спермой до верхнего края горловины сосуда. Конец пинцета охлаждают, погрузив на несколько секунд в жидкий азот, затем захватывают пинцетом гранулу и переносят в ампулу с раствором цитрата натрия. Опускают контейнер со спермой поглубже в жидкий азот. После этого ампулу со спермой вынимают из термостата, вытирают марлевой салфеткой и помещают в штатив из термоизоляционного материала (поролон, пенопласт). Следует оттаивать не более трех гранул спермы одновременно, чтобы иметь возможность использовать их в течение 10–15 минут, так как более продолжительное хранение оттаянной спермы заметно снижает оплодотворяющую способность спермиев. По данным ведущих ученых, оптимальная температура хранения оттаянной спермы быков – 16–20°С. Для поддержания такой температуры можно воспользоваться пищевым термосом или термосом-пеналом.

Следует отметить, что с повышением температуры оттаивания достоверно увеличивается % подвижных спермиев и возрастает их оплодотворяющая способность. Так, Стоянов (1986) установил, что оттаивание гранул спермы при температуре 55°С повышает оплодотворяемость коров на 5,39% по сравнению с температурой 38–40°С.

В НИИ Украины разработали и внедрили способ сверхбыстрого оттаивания спермы путем погружения их на 7 секунд в кипящую воду с использованием специального устройства. При таком режиме оттаивания спермы оплодотворяемость коров была выше на 13%. Пайету со спермой погружают на 15 секунд в воду с температурой до 38°С. После оттаивания ее протирают стерильной салфеткой и используют по назначению.

3.1. Способы искусственного осеменения коров и телок

Коров и телок искусственно осеменяют цервикальным методом,

применяемым в трех вариантах:

1) ректоцервикальный (глубокоцервикальный с ректальным контролем);

2) маноцервикальный;

3) визоцервикальный.

В последнее время все большее распространение получает ректоцервикальный способ искусственного осеменения коров и телок. Он обеспечивает наиболее высокую оплодотворяемость коров и телок, что объясняется рядом факторов:

• проводимый в процессе осеменения массаж половых органов снижает оборонительную реакцию самок на введение инструментов в половые пути, а также усиливает моторику матки, что способствует хорошему продвижению спермиев к яйцепроводам и стимулирует овуляцию;

• применение одноразовых стерильных инструментов из полимерных материалов;

• глубокое введение спермы в половые пути, исключающее ее обратное вытекание;

• исследование внутренних половых органов перед осеменением, дающее возможность диагностики больных животных и своевременного назначения им лечения.

Кроме того, при этом способе возможно проведение искусственного осеменения животных непосредственно в местах их содержания, что устраняет стресс-реакции.

Коров и телок осеменяют с помощью пластмассовых инструментов одноразового употребления или спермой в пластмассовых капиллярах (рис.2).

Техник-осеменатор в начале проводит санитарную обработку половых органов коровы. Вскрывает пакет с осеменительными пипетками, выдвигает пипетку и соединяет ее с нейлоновым 2-граммовым шприцем или полиэтиленовой ампулой. Осеменительную пипетку заполняют спермой на 2/3 объема.

Одной рукой, одетой в перчатку, раскрывает половые губы; другой рукой через образовавшуюся половую щель вводит пипетку по верхнему своду во влагалище, чтобы исключить ее попадание в отверстие мочеиспускательного канала. Техник-осеменатор сначала пипетку продвигает на 10–15 см снизу вверх и вперед под углом 20– 30°С, далее горизонтально до упора в свод. Затем руку в перчатке вводит в прямую кишку. Пипетку свободной рукой отодвигает несколько в сторону, освобождает полость прямой кишки от фекалий. Вслед за этим определяет состояние матки и яичников и одновременно делает массаж тела и рогов матки. Шейку матки захватывает рукой и оттягивает несколько вперед (к голове коровы) для устранения складок влагалища (рис.3.).

При этом влагалищная часть шейки матки сближается со стенками влагалища по всей окружности и пипетку намного легче ввести в ее канал. Через стенку прямой кишки и влагалища нащупывает мизинцем конец пипетки и, зафиксировав шейку матки всей кистью, направляет пипетку в канал шейки матки (рис.4.).