Перед взятием материала пораженную конечность нельзя мыть и обрабатывать дезинфицирующими растворами.
Если биоматериал не может быть доставлен в свежем виде в течение 24 u, то его замораживают или консервируют 30%-ным раствором глицерина или помещают в питательную среду для анаэробов под вазелиновым маслом.
Биоматериал помещают в контейнер в целлофановом пакете (в летнее время его обкладывают льдом, а в зимнее — транспортируют в охлажденном виде), доставляют в лабораторию с сопроводительными документами не позднее суток после отбора проб.
Для послеубойного исследования в лабораторию направляют пораженную фалангу крупного рогатого скота по путовый сустав. Материал должен быть взят от нелеченного животного и доставлен в лабораторию не позднее суток после убоя. При наличии изменений во внутренних органах (легкие, сердце, печень и др.) посылают их части с некротическими очагами.
Серологические и другие иммунохимические методы, применяемые для диагностики многих инфекционных заболеваний, ввиду иммунологической толерантности, чрезвычайной вариабельности и многообразия эпизоотических изолятов возбудителя некробактериоза до настоящего времени не вышли за рамки лабораторных исследований.
Основанием для постановки окончательного диагноза являются результаты лабораторных исследований по обнаружению культуры возбудителя в биологическом материале и результатам биопробы на лабораторных животных.
В лаборатории биологический материал (копытца) очищают от грязи, удаляют гной и некротизированную ткань, слегка обжигают поверхность дефекта, отбирают стерильным инструментом кусочкисрезы послойно на границе здоровой и пораженной тканей, из которых делают мазки, после чего пробы помещают в чашку Петри с пронумерованными секторами.
Исследование на некробактериоз включает в себя микроскопию мазков из биологического материала, заражение лабораторных животных и посевы на питательные среды.
Мазки из каждого кусочка-среза или кусочка органа окрашивают по Граму и микроскопируют под иммерсией большим увеличением микроскопа (7х1,5х90).
В мазках из биологического материала возбудитель имеет вид грамотрицательных, часто бледных, тонких, зернисто-окрашенных нитей различной длины, в старых очагах — коротких палочек и даже кокков. Для дальнейших исследований отбирают кусочки-срезы, в которых обнаруживаются наиболее типичные по морфологии микроорганизмы (рис.1).
` Хх 574 (7 WV
277“ if = у
KN A ee
МА“ ЗА
iy / и Я
Рис. 1. Чистая культура Fusobacterium necrophorum
Из биологического материала делают суспензию 1:10 в стерильном физиологическом растворе или мясопептонном бульоне, которой заражают кроликов или белых мышей. При отсутствии в мазках характерной микрофлоры из материала от одного животного составляют одну общую пробу.
Кролику суспензию исходного материала 1 мл вводят под кожу в наружную поверхность нижней трети уха.
Биологическое исследование можно успешно проводитьи на белых мышах. Для этого девять белых мышей массой 18-20 г заражают дробными дозами (по три мыши на дозу) суспензией исходного 12
материала (вводят подкожно в область крестца в объеме 0,2; 0,4 и 0,6 мл).
При наличии в биологическом материале патогенного штамма Е necrophorum у зараженных животных на месте инъекции через четыре-семь суток образуется некроз. Обычно болезнь протекает остро и в зависимости от патогенности штамма и количества микробных клеток возбудителя в введенном биологическом материале животные погибают — кролики на 10-20, белые мыши — на 5-10 сутки.
Во всех случаях при микроскопии мазков кляч-препаратов и суспензии биоматериала из пораженных конечностей, а также из первичных посевов обнаруживают смешанную микрофлору. В связи с этим основным условием для первичного получения чистой культуры Е. necrophorum является биологическая проба на кроликах (рис. 2) и (или) белых мышах.
\
Oe Fr.
] Ve, = Mf, к № Г
La, | “9 f
уС". | 9
Рис. 2. Изоляция культуры биопробой на кролике
Из очага некроза с места введения суспензии и паренхиматозных органов (при наличии очагов некроза) делают посевы в среды Китта-Тароцци, МПБ и кляч-препарат на обезжиренном предметном стекле. Мазки окрашивают по Граму.
В пробах биологического материала из паренхиматозных органов, как правило, получают чистую культуру возбудителя некробактериоза.
