Мазки из каждого кусочка-среза или кусочка органа окрашивают по Граму и микроскопируют под иммерсией большим увеличением микроскопа (7х1,5х90).
В мазках из биологического материала возбудитель имеет вид грамотрицательных, часто бледных, тонких, зернисто-окрашенных нитей различной длины, в старых очагах — коротких палочек и даже кокков. Для дальнейших исследований отбирают кусочки-срезы, в которых обнаруживаются наиболее типичные по морфологии микроорганизмы (рис.1).
` Хх 574 (7 WV
277“ if = у
KN A ee
МА“ ЗА
iy / и Я
Рис. 1. Чистая культура Fusobacterium necrophorum
Из биологического материала делают суспензию 1:10 в стерильном физиологическом растворе или мясопептонном бульоне, которой заражают кроликов или белых мышей. При отсутствии в мазках характерной микрофлоры из материала от одного животного составляют одну общую пробу.
Кролику суспензию исходного материала 1 мл вводят под кожу в наружную поверхность нижней трети уха.
Биологическое исследование можно успешно проводитьи на белых мышах. Для этого девять белых мышей массой 18-20 г заражают дробными дозами (по три мыши на дозу) суспензией исходного 12
материала (вводят подкожно в область крестца в объеме 0,2; 0,4 и 0,6 мл).
При наличии в биологическом материале патогенного штамма Е necrophorum у зараженных животных на месте инъекции через четыре-семь суток образуется некроз. Обычно болезнь протекает остро и в зависимости от патогенности штамма и количества микробных клеток возбудителя в введенном биологическом материале животные погибают — кролики на 10-20, белые мыши — на 5-10 сутки.
Во всех случаях при микроскопии мазков кляч-препаратов и суспензии биоматериала из пораженных конечностей, а также из первичных посевов обнаруживают смешанную микрофлору. В связи с этим основным условием для первичного получения чистой культуры Е. necrophorum является биологическая проба на кроликах (рис. 2) и (или) белых мышах.
\
Oe Fr.
] Ve, = Mf, к № Г
La, | “9 f
уС". | 9
Рис. 2. Изоляция культуры биопробой на кролике
Из очага некроза с места введения суспензии и паренхиматозных органов (при наличии очагов некроза) делают посевы в среды Китта-Тароцци, МПБ и кляч-препарат на обезжиренном предметном стекле. Мазки окрашивают по Граму.
В пробах биологического материала из паренхиматозных органов, как правило, получают чистую культуру возбудителя некробактериоза.
При обнаружении в мазках зернисто-окрашенных нитей, характерных для возбудителя некробактериоза, биопробу считают положительной (установлен диагноз «некробактериоз»).
На среде Китта-Тароцци Е. песгорпогит через 18-24 4 образует интенсивную муть сначала в нижних слоях среды, а позднее - в верхних, газообразование очень слабое. На вторые-пятые сутки в зависимости от интенсивности роста и биотипа возбудителя наступает просветление бульона, при этом на дно пробирки выпадает крошковатый осадок или отмечается рыхлый роств виде ваты, распространяющийся до двух третей высоты среды в пробирке.
Диагноз на некробактериоз считают установленным, когда из биологического материала выделена культура со свойствами, характерными для возбудителя некробактериоза, и у лабораторных животных в месте введения суспензии исходного материала или культуры развивается некротический очаг с последующим обнаружением в мазках из этого очага типичных микроорганизмов, даже в случае отсутствия роста возбудителя в посевах. Во всех остальных случаях, несмотря значительное число животных с болезнями копытец, характерное для инфекции, считают, что имеет место БПК незаразной или иной этиологии.
Таким образом, некробактериоз крупного рогатого скота необходимо постоянно дифференцировать от болезни Мортелларо (пальцевого дерматита), других смешанных инфекций и БПК незаразной этиологии: колото-резаных и ушибленных ран, ламинита, пододерматита, болезни белой линии, язвы Рустерхольца, лимакса и др.
2.3. Лечебные мероприятия
Лечение должно быть комплексными начато как можно раньше, чтобы предотвратить необратимые изменения в копытцах, приводящие к выбраковке животных. Все способы индивидуального лечения должны быть направлены на радикальное иссечение некротизированной ткани и использование эффективных лечебных препаратов, обладающих антисептическими и регенерирующими свойствами.
