Продолжение · 5
В связи с этим, в эпидермисе наиболее характерные изменения наблюдали в кератиноцитах, которые определялись различным их морфофункциональным состоянием.
В исследованных кератиноцитах отмечали наличие крупных ядер с сильно измененной формой, у некоторых по периферии образуются выступы в виде лопастей. Ядра обычно светлые, состоящие преимущественно из эухроматина, в кариоплазме много мелкозернистого материала из рибосом. Эти изменения отражают очень высокий уровень синтеза РНК (рис.23). Вокруг ядра образуются светлые зоны. Наблюдается расширение перинуклеарных пространств. Выявляются органеллы общего значения, пучки тонофибрилл, обилие свободных рибосом. В таких клетках ярко выражены регенеративные процессы, однако сохраняются и изменения реактивного характера – расширение перинуклеарных пространств и наличие бесструктурных участков.
Некоторые кератиноциты имели крупные ядра, в которых располагаются различной величины ядрышки, количество их может быть от одного до четырех, с обилием РНП гранул, что свидетельствует об активизации синтеза РНК (рис. 38). Количество эухроматина различно, может быть его преобладание, в этом случае гетерохроматин располагается в виде тонкой линии вдоль кариолеммы. Иногда в кератиноцитах находятся элементы комплекса Гольджи, в метахондриях матрикс просветлен.
В некоторых кератиноцитах, расположенных в зернистом слое, большая часть цитоплазмы заполнена тонофибриллами, часть расположена, рассеяно, часть образует пучки различного диаметра, имеет зерна кератогеалина, при этом встречаются участки деструкции цитоплазмы.
В центре некоторых клеток содержатся остаточные тельца – третичные лизосомы, заполненные пузырьками гранулами и мембранами. Имеются участки цитоплазмы, где структура нарушается и содержится гомогенный материал средней электронной плотности, кроме того, имеются вакуоли разных размеров, в митохондриях хорошо представлены кристы, что является признаком интенсивности синтеза АТФ (рис.24). Некоторые кератиноциты заполнены свободными рибосомами, в митохондрии имеют плотный матрикс, видимы кристы, размеры рибосом укрупняются, что является свидетельством активного синтеза белка.
Последовательное исследование кератиноцитов позволило отследить стадии формирования цитоскелета, что определяется характером свободных рибосом, пучков тонофибрилл и митохондрий. Наличие пучков тонофибрилл и их тонкое строение свидетельствует об интактном состоянии исследованных участков. Активное состояние митохондрий выявляет содержание зернистого материала и крист.
На некоторых микрофотографиях выявляются контакты кератиноцитов с другими клетками, при этом в кератиноците отмечается наличие тонофибрилл, расположенных в различных направлениях, в митохондриях имеются рибосомы с кристами. В контактируемой клетке содержится большое количество волокнистого материала, между филаментами располагается большие скопления рибосом. Митохондрии гипертрофированы и осмиофильны, с повышенной плотностью, имеются рибосомы и кристы. В некоторых кератиноцитах особенно привлекает внимание митохондрии с большим количеством крист, внутри митохондрии имеются рибосомы. В отдельных митохондриях имеются просветленные участки, которые образуются в результате вакуолизации матрикса. Полисомы располагаются свободно, тонофибрилллы образуют небольшие пучки на периферии клетки.
Иногда отмечаются контакты кератиноцитов с группой клеток - макрофагом и тучной клеткой (рис.25). В этом случае в кератиноците тонофиламенты объединяются в тонофибриллы, в цитоплазме имеется несколько вакуолей и множество свободных рибосом. В макрофаге гетерохроматин в небольшом количестве, располагается у кариолеммы, в кариоплазме имеются РНП гранулы. В цитоплазме много митохондрий с хорошо развитыми кристами и расширенные цистерны ГЭР. Рядом с ядром располагаются мембраны, микропузырьки комплекса Гольджи. Кроме этого в клетке выявляются осьмиефильные образования похожие на микробы. В ядре тучной клетки больше эухроматеина, чем гетерохроматина. Гранулы располагаются относительно свободно, на периферии их меньше, форма гранул неправильная, имеются светлые полосы, пузырьки образовавшиеся в результате дегрануляции. В тоже время надо отметить, что наряду с клетками находящимися в относительно удовлетворительным морфофункциональном состоянии, встречаются кератиноциты, в которых отмечается кариопикноз, кариолизис, фрагментация, в цитоплазме наблюдается состояние некроза, плазмолемма отсутствует. В некоторых подобных клетках содержатся гранулы различной электронной плотности, вакуоли, количество цистерн ГЭР и свободных рибосом незначительное.
Ув. 100. Мм. х 50. 39мм
Ув. 28000.
хорошо выражены кристы.
Ув. 20000.
Ув.28000
Деструктивные изменения в кератиноците характеризуются тем, что клетка имеет ядро с очень сильно измененной формой, по периферии которого образуются выступы в виде лопастей. Ядрышко располагается эксцентрично, перинуклеарные пространства расширены, в кариоплазме находятся РНП гранулы. Цитоплазма также характеризуется значительными деструктивными изменениями, имеется группа остаточных телец, гранулы рибосом находятся на расстоянии друг от друга, в этой связи клетка имеет светлый вид. После кератиноцита другой клеткой наиболее часто встречающейся на периферии язвы в области пальцев у крупного рогатого скота является фибробласт.
Фибробласты на периферии язвы находятся в различном морфофункциональном состоянии, в микрофотографиях они встречаются, единично, группами, а также в контакте с другими клетками
При их исследовании некоторых микрофотографий отмечается, что фибробласты имеют сложную поверхность, из-за отростков различной длины и формы. Ядра активны морфофункционально, гетерохроматина мало, ядрышки приобретают различную форму и размеры. В кариоплазме имеются РНП гранулы, отмечаются изгибы кариолеммы и выросты в связи с углублением цитоплазмы в ядро.
В некоторых фибробластах отмечается содержание свободных рибосом, цистерн ГЭР, митохондрий, при этом цистерны ГЭР сильно расширены, содержат материал средней электронной плотности, митохондрии набухшие, с укороченными кристами, эти изменения свидетельствуют о функциональном напряжении клетки (рис.27).
При исследовании двух рядом расположенных фибробластов, выявляется, что от цитоплазмы образуются отростки различной длины. В осмиофильном фибробласте комплекс Гольджи с значительной плотностью, в митохондриях имеются хорошо развитые кристы, что свидетельствует о хорошем, энергетическом обмене. В клетке низкой электронной плотности большое число цистерн гранулярного эндоплазматического ретикулума, с материалом средней электронной плотности. В межклеточном пространстве располагается хлопьевидный материал, коллагеновые волокна отсутствуют.
В других случаях, при контактах двух фибробластов отмечается, что у одного из них поверхность сложной формы, оно содержит большое количество гетерохроматина. В цитоплазме имеются полисомы, цистерны ГЭР, митохондрии, комплекс Гольджи, но плазмолемма слабо различима, в части цитоплазмы число органелл уменьшается. В другом фибробласте цистерны ГЭР сильно расширены, между ними наблюдается обилие полисом. В цитоплазме имеется участок, содержащий фрагменты коллагеновых волокон.
В некоторых случаях при контакте двух фибробластов, отмечается обилие рибосом, что свидетельствует об интенсивном синтезе белка. В митохондриях наблюдается укорочение крист, что определяет напряженную функциональную деятельность. В тоже время в отдельных клетках наблюдаются очаги некроза, которые отделяются от клетки, поэтому в межклеточном пространстве находятся фрагменты цитоплазматических отростков с деструктивным материалом. Полученные данные показывают, что в данном участке преобладают компесаторно-приспособительные процессы (рис. 28).
Кроме этого при исследовании некоторых групп фибробластов установили, что увеличение количества гетерохроматина указывает на снижение синтетической активности. У некоторых клетки имеют небольшой объем цитоплазмы, с цистернами ГЭР, рибосомами и фрагментами иммунных комплексов с четкими контурами, с расширенными перинуклеарными пространствами, что свидетельствует о напряжении функциональной деятельности. Здесь же в поле зрения наблюдаются фиброциты с узким ободком цитоплазмы, окруженные пучками коллагеновых волокон. В некоторых случаях рядом с фибробластами находились макрофаги, с большим количеством митохондрий, вакуолей, рибосом. Полученные данные свидетельствуют о том, что на периферии язвы формируются элементы клеточного и иммунного барьера, но в тоже время некротические и дистрофические процессы активно проявляются.
В ряде случаев отмечали контакты фибробластов с другими клетками, в частности при контакте с тучной клеткой у фибробласта выявляли ядро неправильной формы, образовавшееся в результате впячивания цитоплазмы, хорошо видимы ядерные поры, больше эухроматина, перинуклеарные пространства расширены. В цитоплазме имеются свободные рибросомы, цистрерны ГЭР умеренно расширены, в митохондриях кристы отсутствуют, имеется комплекс Гольджи. В данной клетке наблюдаются изменения реактивного характера. В тучной клетке наблюдается фрагментация ядра. В цитоплазме множество гранул плотно расположенных друг к другу, большинство гранул низкой электронной плотности. Место контакта имеет повышенную электронную плотность.
При исследовании фибробластов с периферии язвы установили, что они находятся в различной степени дифференциации.
В юных фибробластах хорошо развиты цистерны ГЭР и аппарат Гольджи (рис. 29).
Кроме этого при гнойно-некротических процессах встречаются миофибробласты, по нашим данным эти клетки характеризуются наличием свободных рибосом, митохондрий, цистерн ГЭР, протофиламенты располагаются преимущественно по периферии. В митохондриях кристы развиты хорошо, полисомы образуют скопления и имеют высокую электронную плотность. Цитоплазма, таким образом, разделена на зоны с высоким уровнем синтеза белка и зоны с протофиламентами.
Наряду с этим, в данной зоне встречались миофибробласты с значительными деструктивными изменениями, при этом наиболее сильные изменения отмечались в ядре, изменения касались и кариолеммы, внутренний листок его различим, отмечается наличие широкой бесструктурной зоны между гетерохроматином и наружным листком кариолеммы, наблюдается кариолизис отдельных участков ядра (рис.30). В цитоплазме содержатся полисомы, миофиламенты, митохондрии. Таким образом, мы наблюдаем последовательность некробиотических изменений в клетке.
На периферии язвы, кроме кератиноцитов и фибробласт, выявляли макрофаги, тучные клетки, нейтрофилы, сосудистые клетки, клетки крови.
Исследованные макрофаги находились в различном морфофункциональном состоянии. В некоторых макрофагах отмечали, что ядро изменено и утолщено, с большим количеством гетерохроматина и в состоянии кариопикноза, в цитоплазме содержится много свободных рибосом, имеется небольшое количество цистерн ГЭР, в околоядерной области располагается группа остаточных телец. Наличие этих структур, можно рассматривать, как макрофаг – коллагеннокласт, в межклеточных пространствах находятся коллагеновые волокна. Клетка имеет удлиненную форму, в цитоплазме находятся фибриллярные структуры в продольных и поперечных разрезах.
Эндотелиоциты интенсивно осуществляющие синтез РНК, содержат очень крупное ядрышко, с большим количеством гранулярного материала, РНП гранулы равномерно размещены по кариоплазме. В ядре гетерохроматина очень мало, он располагается у внутреннего листка кариолеммы в виде узкой линии, перинуклеарные пространства расширены.
В других случаях выявляются молодые формы макрофагов, у которых отмечается обилие митохондрий с развитыми кристами, имеются умеренно расширенные цистерны ГЭР, от поверхности образуются небольшие цитоплазматические выросты, наблюдаются процессы фагоцитоза (рис.31).
При электронно-микроскопических исследованиях кровеносных капилляров, на периферии язвы установлено, что эндотелиальные клетки находятся в состоянии различного морфофункционального напряжения, в некоторых ядрах выявляется реактивное состояние, они образуют изгибы, ядрышки также неправильной формы, окружены большим количеством РНП гранул. Цитоплазма высокой электронной плотности, с большим количеством рибосом, обеспечивающих синтез белка. Митохондрии с уменьшенным содержанием крист. На люминальной и базальной поверхности стенки кровеносного капилляра образуются микроворсинки (рис. 32, 33). В других эндотелиоцитах ядра в активном морфофункциональном состоянии, гетерохроматин располагается на периферии, в кариоплазме много РНП гранул. Цитоплазма характеризуется высокой морфофункциональной активностью, содержит митохондрии, цистерны ГЭР, рибосомы, фагосомы, лизосомы и микропиноцитозные везикулы, тонофибриллярный материал находится на периферии.
Из клеток крови встречаются эритроциты, находящиеся как в сосудах, так и вне их, различной электронной плотности, иногда образуются их скопления, контактирующие с другими клетками, в которых хорошо развит белоксинтезирующий аппарат (рис.34).
При исследовании эритроцитов находящихся вне сосудов, вокруг них обнаруживается фибриллярный материал, образовавшийся в результате деструкции коллагеновых волокон, фибробласты, содержащие умеренное количество цистерн ГЭР и свободные полисомы, фрагменты фибробластов.
В межклеточном веществе различных участков дермы на периферии язвы обнаруживается деструктивный хлопьевидный материал, различной электронной плотности, с полным отсутствием коллагеновых волокон, на этом фоне в некоторых участках обнаруживаются микробы различной формы и размеров. У некоторых микробов центр более плотный, между плазмолеммой и центром образуется светлый ободок, на поверхности микроба имеются прикрепленные частицы (рис. 35). В некоторых участках выявляются коллагеновые с хорошо сохранившейся структурой и поперечной исчерченностью.
Деструктивные изменения на периферии язвы характеризуются развитием зернистой дистрофии, о чем свидетельствуют скопления осмиофильных зерен в цитоплазматических отростках, эти отростки располагаются в материале средней и высокой электронной плотности, что указывает на фибриноидное набухание. Плотные структуры образуются при пикнозе ядра, окруженные расширенными перинуклеарными пространствами (рис.36).
В исследованных участках обнаруживается значительное количество клеток в состоянии кариопикноза и фрагментации, некротизированным участками цитоплазмы, и отсутствием плазмолеммы, но с сохранившимися вокруг коллагеновыми волокнами (рис.37).
Наряду с этим на периферии язвы выявляется значительное количество клеток сохраняющих активное морфофункциональное состояние, выполняющих функцию фагоцитоза деструктивного материала и микробов.
Таким образом, морфологические изменения на периферии язвы характеризуются некротическими и деструктивными изменениям клеточных элементов, волокнистых структур и внеклеточного матрикса. В тоже время в некоторых участках сохраняется относительно высокая активность этих структур, в перифериических участках формируются элементы клеточного и иммунного барьера.
Ув. 48000
Ув. 28000
Ув. 28000.
митохондрий, умеренно расширенными цистернами ГЭР, образующая цитоплазматические отростки, с признаками фагоцитоза.
Ув.48000
Ув.16000.
10Мм. Х900. 39мм.
У.20000.
Продолжение · 6
Ув. 28000.
Электронно-микроскопические изменения в центре язвы.
Дистрофические и некротические изменения в центре язвы выражены более значительно.
Количество клеток находящихся в состоянии некроза в центре язвы встречается более часто, в них отмечается наличие остаточных телец, расширение перинуклеарных пространств и цистерн ГЭР, в цитоплазме обнаруживаются различных размеров фагосомы, содержащие миэлиновые образования, являющиеся результатом деструкции мембранных органелл. Остальные органеллы имеют едва различимые контуры. Количество митохондрий незначительно. В некоторых клетках ядра фрагментированы, состоят из гетерохроматина, кариолемма и плазмолемма разрушены, в цитоплазме отмечается почкование и бесструктурные зоны, хлопьевидный материал. В клетках отмечается наличие микробов расположенных группами, отдельные контактируют с плазмолеммой клетки, в образовавшихся отростках клетки иногда содержится по несколько микробов, которые затем отторгаются от нее. Это, по нашему мнению, является отражением локального некроза (рис. 38).
В ряде клеток отмечается зернистая дистрофия. Отдельные клетки образуют причудливые выросты, с протофиламетами, фагосомами, рибосомами, характеризующиеся низкой электронной плотностью (рис. 39).
Ув. 36000.
Ув. 36000
Количество эпителиальных клеток в центре язвы, практически вследствие полного разрушения эпидермиса, значительно уменьшено, они также большей частью представлены кератиноцитами.
В сохранившемся эпидермисе встречаются кератиноциты с сильно развитым белок синтезирующим аппаратом, в митохондриях кристы небольшой длины, расположены в продольном и поперечном направлениях (рис. 40).
В некоторых участках между кератиноцитами хорошо выражены десмосомы, зерна кератогеалина, по периферии располагаются тонофибриллы, группы плотно расположенного мелкозернистого материала,другие органеллы отсутствуют. В некоторых кератиноцитах микробы располагаются в цитоплазме, в некоторых случаях микробы находятся в межклеточном пространстве, выявляются электронно плотные кокки и микробы удлиненной формы, некоторые лежат попарно, происходит размножение микробов (рис.41).
Выявляются контакты плотного типа между отдельными кератиноцитами, в этих участках вдоль плазмолеммы клеток располагаются микропиноцитозные везикулы, что свидетельствует об активном обмене с окружающим межклеточным веществом и клетками.
В этой зоне наиболее часто регистрируемыми клетками являются фибробласты и макрофаги.
Исследованные фибробласты, как правило, содержат крупное ядро, с небольшим количеством гетерохроматина и выраженными ядерными порами. В цитоплазме цистерны ГЭР расширены, между ними множество свободных полисом, в митохондриях отмечается небольшое количество крист и просветление матрикса, имеются фагосомы. За пределами клетки располагаются коллагеновые волокна.
В некоторых исследованных фибробластах, выявляется множество свободных полисом и протофиламентов, матрикс средней электронной плотности, кроме них располагаются цистерны причудливой формы и небольшое число лизосом. Рядом с фибробластом располагается тканевой базофил с осьмиофильными гранулами.
Имеются участки, где наблюдается активизация в ядрах фибробластов. Из-за фрагментации ядра оно приобретает причудливую форму, перинуклеарные пространства расширены, в цитоплазме, в цитоплазме обилие свободных полисом, другие органеллы отсутствуют. В некоторых фибробластах ядра имеют очень крупные ядрышки и обилие РНП гранулы, в цитоплазме содержатся цистерны ГЭР (рис.42). Среди исследованных фибробластов выявляются зрелые активно функционирующие формы, в их ядре содержатся крупные ядрышки, РНП гранулы, в цитоплазме отмечается обилие цистерн ГЭР и свободных рибосом.
Особый интерес представляют контакты фибробластов с другими клеточными элементами, чаще всего они происходят с макрофагами.
При этом в макрофаге отмечается обилие органелл – вакуоли, фагосомы, первичные лизосомы, на периферии располагаются гранулы различных размеров и электронной плотности, по нашему мнению образовавшиеся в результате зернистой дистрофии. В контактируемом фибробласте наблюдается обилие свободных полисом, обеспечивающих синтез белка и элементы комплекса Гольджи, митохондрии, набухшие с просветленным матриксом. В межклеточном пространстве находятся пучки коллагеновых волокон.
Кроме этого выявляются контакты фибробластов с тучными клетками. При этом в тучной клетке гранулы располагаются на расстоянии друг от друга, ядро представлено двумя фрагментами. В митохондриях отмечается образование мелких вакуолей, а цитоплазма образует небольшие отростки. В фибробласте, контактирующем, с тучной клеткой отмечаются диструктивные изменения – сильно расширены цистерны, митохондрии набухшие и вакуолизированы.
В свободно встречаемых тучных клетках, выявляются гранулы различных размеров и электронной плотности, плотно расположенные друг к другу, по периферии гранулы отсутствуют, в некоторых клетках начинается фрагментация ядра, кариолемма в отдельных участках отсутствует. Отмечается увеличение объема гетерохроматина, заканчивающегося, как правило, кариопикнозом. Вокруг тучной клетки находятся фибробласты, с хорошо развитым белок синтезирующим аппаратом.
В межклеточном веществе коллагеновые волокна располагаются на расстоянии друг от друга, вокруг них располагается большое количество мелкозернистого, иногда хлопьевидного материала, в некоторых участках коллагеновые волокна отсутствуют.
Кроме этого в межклеточном пространстве располагаются микробы: кокковые, палочковидные, неправильной формы, в некоторых отмечается снижение электронной плотности.
Электронно-микроскопическими исследованиями в центре язвы установлено активное состояние сосудистой системы капиллярного типа. Встречаются капилляры закрытого типа. Ядра эндотелиальной клетки в активном морфофункциональном состоянии, округлой формы, содержание эухроматина больше, множество РНП гранул. В кариолемме видны ядерные поры, поверхность ее имеет небольшие изгибы, перинуклеарные пространства расширены. В цитоплазме содержатся протофиламенты и свободные рибосомы и полисомы, отдельные из них располагаются на кариолемме. Благодаря наличию этих рибосом обеспечивается синтез белка и дальнейший рост капилляра. К стенке эндотелиоцита иногда прилегают осмиофильные цитоплазматические отростки, некоторые отростки отделены базальной мембраной и расположены на некотором расстоянии (рис. 43).
Таким образом, в центре язв в области пальцев у крупного рогатого скота отмечаются значительные некротические и дистрофические изменения в клеточных элементах, волокнистых структурах и аморфном веществе соединительной ткани.
В тоже время, в глубоких слоях дермы выявляются клеточные структуры и сосудистая система капилляров, находящиеся в активном морфофункциональном состоянии, выявляются элементы формирования клеточного барьера.
Ув 28000.
Ув. 36000
Ув. 28000
Морфологическая характеристика состояния кожи вокруг язв.
Морфологию кожи, изучали в кусочках тканей взятых отступя от края язвы на 2см.
В исследованном участке кожи определялись все виды клеточных элементов эпидермиса и дермы, в различном функциональном состоянии и дифференциации.
Прежде всего, выявлялись фибробласты, различной степени дифференциации. В малодифференцированных фибробластах, отмечали ядра в активном состоянии, в кариоплазме множество РНП гранул, цистерн ГЭР незначительное количество, различной степени расширения, содержание в цитоплазме рибосом и полисом, определялось степенью активности клеток, между которыми выявлялся тонковолокнистый материал, в митохондриях содержатся большое количество хорошо развитых крист.
Другие малодифференцированные фибробласты содержат обильное количество полисом и рибосом, между которыми располагается тонковолокнистый материал. В митохондриях содержится большое количество хорошо развитых крист, имеются остаточные тельца, цистерны ГЭР в небольшом количестве, они умеренно расширены.
В фибробластах отмечали крупные ядра и ядрышки, большое количество эухроматина и РНП гранул, в узком ободке цитоплазмы располагаются митохондрии с небольшим количеством цистерн ГЭР и аппарата Гольджи. Цистерны аппарата Гольджи сближены, что характеризует их низкую функциональную активность.
В некоторых фибробластах в ядрах отмечали большее содержание эухроматина, гетерохроматин располагался по периферии, кариолемма образует множество изгибов, перинуклеарные пространства расширены. Органеллы представлены множество свободных полисом, протофиламентами. Наблюдается, что в плазмолемме образуются небольшие впячивания с фагоцитированным материалом. Кроме того, наблюдается крупное, хорошо очерченное осмиофильное плотное образование, что по нашему мнению является иммунным комплексом (рис.44).
Некоторые фибробласты наблюдали в состоянии амитоза, ядра которых находятся в активном морфофункциональном состоянии, с противоположных сторон наблюдаются углубления цитоплазмы. В ядре имеются несколько ядрышек, преобладает эухроматин, хорошо видны ядерные поры, расширенные перинуклеарные пространства. Вследствие перетяжки ядра образуются два фрагмента. В цитоплазме органелл мало, встречаются редкие полисомы и митохондрии, с небольшим количеством крист (рис. 45).
Выявленные фиброциты имели удлиненную форму, с узким ободком цитоплазмы, ядра содержат в основном геторохроматин, в кариоплазме содержатся РНП гранулы. В цитоплазме наблюдаются редкие полисомы, короткие цистерны ГЭР и микропиноцитозные везикулы, характеризующие экзоцитоз (рис.46).
В некоторых случаях отмечаются контакты двух фибробластов, в одном из них в кариоплазме имеются РНП гранулы, происходит расширение перинуклеарного пространства. В части цитоплазмы содержится много свободных полисом, кроме того в цитоплазме имеется большое электронно плотное тельце округлой формы оно не окружено мембраной, по нашему мнению происходит накопление иммунных комплексов. Так же в цитоплазме имеются мелкие гранулы, они образуют не большие скопления, вокруг отдельных из них располагаются рибосомы. В плазмолемме имеются небольшие углубления, по нашему мнению, это является отражением процессов эндоцитоза. У другого фибробласта лучше развиты волокнистые элементы, имеются митохондрии, остаточные миелиновые тельца, полисомы, в отдельных участках электронная плотность повышена, в некоторых понижена (рис. 47).
В исследованных макрофагах ядра имеют сложную поверхность, крупные ядрышки, наблюдается расширение перинуклеарных пространств, иногда вблизи ядра обнаруживаются крупные вакуоли, в цитоплазме много митохондрий, полисом и протофиламентов. От плазмолеммы образуется множество коротких отростков. Такие изменения в макрофаге отражают начало функциональной активности клетки (рис.48).
Также встречаются молодые формы макрофагов, такие клетки имеют круглую форму, крупное ядро, в кариоплазме много эухроматина, в цитоплазме содержатся полисомы и везикулы, наблюдаются прикрепленные тельца средней электронной плотности к поверхности плазмолеммы (рис. 49).
В некоторых исследованных клетках отмечали значительные деструктивные изменения – кариолемма лизирована, материал ядер сгруппирован в плотные массы, между которыми располагается зерна средней электронной плотности, указанные признаки показывают на развитие апатоза (рис.50).
Встречаются клетки с значительными деструктивными изменениями в ядре, оно сжатое, уменьшенное, гетерохроматин располагается у кариолеммы, имеются вакуоли, перинуклеарные пространства расширены, однако на наружном листке кариолеммы обнаруживаются небольшое количество рибосом. В тоже время клетка имеет большой объем цитоплазмы, в котором интенсивно протекает синтез белка. Следует отметить, что цистерны ГЭР и рибосомы представлены в равном количестве, в митохондриях уменьшено количество крист в некоторых имеются небольшие вакуоли.
В исследованных участках кожи обнаруживаются кровеносные капилляры закрытого типа, которые имеют пикнотичные ядра, кариолемма в некоторых участках отсутствует. В цитоплазме имеется множество свободных рибосом и хлопьевидный материал. В межклеточном пространстве располагаются коллагеновые волокна с хорошо выраженной поперечной исчерченностью, образуют пучки идущие в различных направлениях, длина и диаметр волокон неравномерны по всей протяженности (рис.51).
Ув. 28000.
Ув. 28000
Ув. 36000.
Ув. 16000.
Ув. 28000
Таким образом, проведенные исследования показывают, что в коже вокруг язвы, в условиях сохранения целостности эпидермиса и дермы, наряду с активно функционирующими клеточными элементами и волокнистыми структурами, отмечаются некротические и деструктивные изменения структуры соединительной ткани, способствующие в последующем распространению развития язвенных процессов. Клеточные элементы находятся в различной степени дифференциации, выявляются как юные формы, так и зрелые. В приграничной области наряду с элементами формирования клеточного барьера формируются иммунные комплексы.
Морфологические показатели кожи интактной области здоровой конечности.
В коже в области венчика пальца у крупного рогатого скота здоровой конечности клеточные элементы и волокнистые структуры находятся в активном функциональном состоянии.
Исследованные фибробласты выявляются в различной степени дифференциации.
В малодифференцированных фибробластах, ядра в активном состоянии, в кариоплазме много РНП гранул. В цитоплазме рибосомы рассеяны, цистерн ГЭР мало, они сильно расширены, имеется в небольшом количестве тонковолокнистый материал (рис. 52).
Исследованные фиброциты имеют ядро и узкий ободок цитоплазмы. Вокруг клеток располагаются коллагеновые волокна (рис. 53).
Фибробласты обычно имеют крупные ядра и ядрышки, содержащие большое количество эухроматина и РНП гранул. В узком ободке цитоплазмы располагаются митохондрии с небольшим количеством цистерн ГЭР и аппарата Гольджи. В некоторых клетках цистерны аппарата Гольджи сближены, что характеризует их низкую функциональную активность.
Встречаются клетки с двумя ядрами, образовавшиеся, по нашему мнению, в результате амитоза, ядра с сильно измененной формой. В цитоплазме имеются рибосомы, много митохондрий разных размеров, с развитыми кристами. Наблюдается кооперация клеток (рис.54).
В исследованных капиллярах эндотелиоциты имеют ядра в активном состоянии, гетерохроматин расположен по периферии, эухроматин содержится в большем количестве. В кариоплазме имеются РНП гранулы, поверхность ядер неровная, образуются углубления цитоплазмы. В цитоплазме содержатся митохондрии, единичное количество цистерн ГЭР и много тонковолокнистого материала. Вдоль плазмолеммы хорошо видимы микропиноцитозные везикулы, что отражает активный обмен веществ.
Продолжение · 7
Встречаются эндотелиоциты из стенки капилляра, образующие плотный контакт с другим эндотелиоцитом. При этом эндотелиоцит имеет крупное активное ядро, гетерохроматин образует узкую полоску вдоль кариолеммы. В цитоплазме хорошо выражен аппарат Гольджи, который участвует в образовании везикул, везикулы располагаются вдоль плазмолеммы в 1-2 ряда, таким образом, по нашему мнению, обеспечиваются процессы секреции. Цитоплазма содержит митохондрии, мелкой и средней величины, хорошо видимы кристы. В поле зрения располагаются цитоплазматические отростки, содержащие рибосомы, митохондрии, протофиламенты (рис.55).
В исследованных участках встречаются миофибробласты, имеющие ядро с сильно измененной поверхностью, гетерохроматин в которых локализуется периферически, большую часть кариоплазмы занимает эухроматин и РНП гранулы. В цитоплазме содержится много митохондрий, свободных рибосом и миофиламентов. Вдоль плазмолеммы наблюдаются везикулы, отмечается уплотнение отдельных участков цитоплазмы в области плазмолеммы. По нашему мнению, возможно, данная клетка находится в стенке кровеносного сосуда (рис.56).
В межклеточном веществе здоровой кожи наблюдали различной степени дифференциации коллагеновые волокна – это молодые формы коллагеновых фибрилл, образующие тонкие пучки, и более зрелые коллагеновые волокна, образующие крупные пучки, идущие в параллельном направлении. Подобные коллагеновые волокна характерны для сетчатого слоя дермы, а тонкие пучки сосочковому слою дермы.
Таким образом, клеточные элементы и волокнистые структуры здорового участка кожи области пальцев у крупного рогатого скота, характеризуются активными обменными процессами, стабильным морфофункциональным состоянием.
Ув. 36000
Ув. 36000
Ув. 32000.
Ув. 36000.
Морфологические показатели при пододерматитах.
При пододерматитах изменения характерны изменениям структуры формирующейся грануляционной ткани.
Встречается большое количество юных форм фибробластов. В ядрах содержание гетерохроматина уменьшено, который глыбками располагается у кариолеммы, в кариоплазме много РНП гранул. В клетке выделяется большой объем цитоплазмы и обилие свободных рибосом, имеются мелкие митохондрии с небольшим количеством крист. Отмечается наличие небольшого количества цистерн ГЭР и лизосом (рис.57).
В цитоплазме клеток при сильном увеличении наблюдается наличие небольшого количества тонковолокнистого материала. В межклеточном веществе находятся коллагеновые фибриллы с хорошо выраженной поперечной исчерченностью. В одной из исследованных клеток повышается электронная плотность, плазмолемма отсутствует, эти показатели свидетельствуют о начале некроза клетки (рис.58).
В некоторых клетках наблюдается кариопикноз и повышение осмиофилии цитоплазмы (рис.59). Кроме этого в них же отмечается отсутствие кариолеммы, очень высокая плотность гетерохроматина, между которыми располагается большое количество зерен, вокруг клеток располагаются достаточно плотно друг к другу коллагеновые волокна, с извилистым ходом волокон (рис.60). В межклеточном веществе находится материал средней электронной плотности, в большом количестве встречаются микробы различной формы: круглые, удлинные, с изменой формой, рядом располагаются продукты распады.
Таким образом, при пододерматитах основа кожи копытец, представлена структурой формирующейся грануляционной ткани, со всеми элементами рыхлой соединительной ткани. Наряду с этим, при активно формирующихся и дифференцирующихся клеточных элементах и волокнистых структурах, отмечаются деструктивные и некротические процессы.
Ув. 28000.
Ув. 20000.
Ув. 20000.
4.1 Особенности клинико-морфологических изменений в организме крупного рогатого скота в условиях экспериментального моделирования гнойно-некротических поражений в области копытец.
4.1.1 Клинико-морфологические характеристики ран, физиологические и биохимические показатели крови крупного рогатого скота, в условиях применения мази левомеколь и гелевой мази (МАОП-гель) при моделировании экспериментальных гнойно-некротических поражений копытец.
В данной серии опытов в сравнительном плане изучали влияние пиримидиновых производных - мази левомеколь (контроль) и МАОП-гели на клинико-гемтологические, гистологические и гистохимические показатели экспериментальных ран в области пальцев у крупного рогатого скота.
Через сутки после нанесения ран у животных отмечалось угнетение общего состояния, снижение аппетита, по данным таблицы 3, отмечалось повышение температуры тела на 0,6° (Р>0,05), учащение пульса на 10,4 удара (Р>0,05), дыхания на 14,7 движений (Р<0,05).
При движении животных отмечается скованность, хромота смешанного типа второй степени. Вокруг ран развивался разлитой тестоватой консистенции, болезненный краевой отек. Тампон, расположенный в ране, пропитан фибринозным сгустком и прочно фиксирован в ней. После удаления его все неровности дна и стенок раны покрыты сгустками крови и фибринозного экссудата.
Через сутки после первого применения пиримидиновых производных угнетение несколько уменьшилось, хромота и скованность движений сохраняется, прием воды и корма активный. Общая температура тела, по сравнению с исходным показателем, возросла на 1,0° (Р<0,05), по сравнению с предыдущим сроком на 0,3°, пульс участился соответственно на 17,2 удара (Р>0,05), по сравнекнию с предыдущим сроком на 6,3 удара. Дыхание участилось на 14,5 (таблица 3) движений (Р>0,05), а по сравнению с предыдущим сроком осталось почти без изменений.
По сравнению с исходными данными, в гематологических показателях не произошло значительных сдвигов: по гемоглобину, эритроцитам, лейкоцитам - по данным таблицы 2 (Р>0,05), количество же сегментоядерных увеличилось на 7,0% (Р<0,05) при снижении лимфоцитов на 8,4% (Р<0,05).
На этом общем клинико-гематологическом фоне площади ран (таблица 4) при однократом применении МАОП-гели и контрольных, не имели существенных отличий (Р>0,05).
В сравнении с контрольными ранами, при применении МАОП-гели, отмечаются следующие отличия: более выраженная эмиграция лейкоцитов и пролиферация клеточных элементов; наличие слабо выраженной реакции по Ван-Гизону в рыхлой клетчатке, а также вокруг крупных сосудов; положительная реакция на ДНК и РНК в ядрах клеточных элементов, при более выраженной реакции на ДНК.
Через трое суток после первого применения пиримидиновых производных наблюдалось некоторое улучшение общего состояния животных, они более активно принимали корм и воду, но хромота и скованность движений сохранялась.
В сравнении с предыдущим сроком исследования, сколько-нибудь значительных отклонений, как это следует из таблицы 3, в показателях общей температуры, пульса и дыхания не установлено (Р>0,05). В периферической крови (таблица 2), наблюдалась тенденция к увеличению процентного содержания палочкоядерных и сегментоядерных лейкоцитов, при снижении количества лимфоцитов на 7,0%, для упомянутых показателей Р>0,05.
На этом общем клинико-гематологическом фоне, после двух кратного применения МАОП-гели, местная температура увеличилась на 0,39° (Р<0,01) (таблица 5), площадь ран уменьшилась на 1,69см.кв. (Р<0,05). Стенки и дно ран, по сравнению с предыдущим сроком, не во всех участках покрыты рыхлой фибринозной массой, в таких местах выявляются бледно-розовые мелкозернистые грануляции.
При гистологических и гистохимических исследованиях, при применении МАОП-гели, установлено, что поверхность ран покрыта фибрином, инфильтрированным незначительным количеством лимфоцитов и нейтрофилами, под ним располагается слой дегенеративных клеточных элементов, представленный преимущественно нейтрофилами и полибластами, далее следует сосудистый слой с пролиферирующими клеточными элементами, в основном, полибластами с крупными круглыми ядрами и незначительным слоем цитоплазмы. Гистохимически выявляется положительная реакция по ван-Гизон в местах скопления клеточных элементов, в основном вокруг мелких и крупных сосудов. Содержание гликогена повышено в местах формирования юной соединительной ткани, стенках сосудов. Выявляется выраженная положительная реакция на ДНК и РНК, в ядрах клеточных элементов, при более положительной реакции на ДНК. По сравнению с предыдущим сроком исследования, интенсивность реакций на нуклеиновые кислоты усиливается.
В контрольных ранах, к этому сроку, по сравнению с использованием МАОП-гели, показатели местной температуры, площадь ран, существенных различий не имели (Р>0,05). Ткани дна и стенок покрыты плотной фибринозной массой, структура его равномерная.
Гистологически и гистохимически в контрольных ранах, имеются следующие отличия: рыхлая клетчатка в состоянии сильного отека, содержит большое количество лейкоцитов, явления экссудации, преобладают над процессами пролиферации клеточных элементов, сосудистый слой с пролиферирующими клеточными элементами менее развит, реакция по ван-Гизон отмечается незначительно, только по ходу крупных сосудов. Реакция Шабадаша отрицательная, реакции на РНК и ДНК выражены слабо.
Через семь суток общее состояние животных удовлетворительное, прием воды и корма активный, сохраняется некоторая скованность движений. Общая температура, по сравнению с предыдущим сроком, незначительно понизилась на 0,3° (Р>0,05), отмечается незначительная тенденция к урежению пульса и понижению частоты дыхания ( таблица 3).
В периферической крови, как видно из таблицы 2, произошло некоторое снижение количества гемоглобина на 0,3 г/%, эритроцитов на 0,1 млн., лейкоцитов на 2800 клеток, в лейкоцитарной формуле понизилось процентное содержание палочкоядерных лейкоцитов на 3,6%, сегментоядерных на 9,0%, при увеличении количества лимфоцитов на 15,6%, для всех показателей крови Р<0,05.
На этом общем клинико-гематологическом фоне к этому сроку при применении МАОП-гели, по сравнению с предыдущим сроком местная температура достоверно уменьшилась на 0,65° (Р<0,001), уменьшение площади ран оказалось недостоверным.
Поверхность ран покрыта незначительным количеством серо-белого цвета сметанообразной консистенции гноем, покрывающим мелкозернистые розово-красного цвета грануляции, по периферии хорошо выражен эпителиальный ободок.
Гистологически и гистохимически поверхность раны покрыта рыхлой массой, состоящей из фибрина, склеившихся эритроцитов и большого количества лейкоцитов. Под ней располагается большое количество клеток с дегенеративными изменениями ядер. Далее следует сосудистый слой, преимущественно капилляров, расширенных и переполненных кровью, колдичество их в глубоких слоях раны уменьшается, увеличивается приэтом их диаметр. Вокруг них клеточные элементы образуют муфтообразные скопления, у самой поверхности их сплошную массу их, с большим содержанием РНК и ДНК, наибольшим, по сравнению с предыдущим сроком исследований. В глубоких слоях четко дифференцируются фибробласты с веретенообразной цитоплазмой и РНК – положительной зернистостью в ней. Полибласты и фибробласты располагаются между раздвинутыми коллагеновыми волокнами, при положительной реакции по ван-Гизон, с тенденцией нарастания в глубоких слоях. Интенсивность реакции по Шабадашу выражена преимущественно в стенках кровеносных сосудов. В краевых участках раны омечается регенерация эпителия.
Сопоставляя приведенные показатели ран при применении МАОП-гели, с контрольными установлено, что местная температура, площадь ран не имели существенных различий. При этом, поверхность контрольных ран покрыта незначительным количеством серо-грязного цвета гноем, жидкой консистенции с неприятным запахом. После удаления гноя обнаруживаются бледно-розовые крупнозернистые грануляции.
Гистологическое и гистохимическое строение грануляционной ткани контрольных ран отличается от ран при использовании МАОП-гели: слабым развитием сосудистого слоя с пролифирирующими клеточными элементами, наличием кровоизлияний в поверхностных его слоях, менее интенсивной реакцией по Браше и Фельгену.
Как отмечалось в разделе материал и методика исследований, на 14 сутки после первого применения пиримидиновых производных, опытные раны последний раз обрабатывались МАОП-гелью, а контрольные мазью левомеколь, в последующем обработка ран не производилась, на поверхности ран образовывались корочки, и дальнейшее заживление протекало под струпом.
На 14 сутки после трехкратного применения пиримидиновых производных, общее состояние не отличалось от исходных данных. По данным таблиц 3 и 2 показатели общей температуры, пульса, дыхания и периферической крови, не выходили за пределы верхних и нижних границ физиологической нормы.
К этому сроку на фоне применения МАОП-гели произошло снижение местной температуры на 1,1º, а площадь ран на 3,48 см², для эти показателей степень достоверности определяется по третьему порогу вероятности (Р<0,001), при этом ежедневное уменьшение площади ран составило 6,12%.
На поверхности ран отмечается незначительное количество раневого экссудата серого цвета, покрывающего бледно-розовые мелкозернистые грануляции, с хорошо выраженным эпителиальным ободком шириной 2-3мм.
На гистологических препаратах под тонким слоем серо-фибринозного экссудата отмечается хорошо сформировавшаяся грануляционная ткань, с многочисленными капилляров и обилием полибластов, особенно в поверхностном ее слое, при более выраженной реакции на РНК и ДНК, по сравнению с предыдущим сроком исследования. В глубоких частях грануляционного слоя преобладают фибробласты и плотно расположенные коллагеновые волокна, с РНК – положительной реакцией в цитоплазме фибробластов и нарастанием реакции по ванг-Гизон в соединительной ткани. Реакция по Шабадашу положительная в ороговевающих слоях регененрирующего эпителия, стенках артерий, но слабее выражена в коллагеновых волокнах.
В контрольных ранах, где применяли мазь левомеколь, раны покрыты крупнозернистыми бледно-розовыми грануляциями. Гистологически и гистохимически в контрольных ранах эксудативно-некротический слой более выражен, с кровоизлияниями, гнойной инфильтрацией и участками некроза обильным скоплением лейкоцитов и полибластов при менее выраженной реакции на РНК и ДНК и слабо положительной реакцией по ван-Гизон в глубоких слоях соединительно тканых элементов грануляционной ткани.
Через 21 сутки после начала применения пиримидиновых производных общее состояние животных хорошее.
К этому сроку, по данным таблиц 2,3 показатели общей температуры, пульса, дыхания и периферической крови близки к показателям физиологической нормы.
На этом фоне при применении МАОП-гели, поверхность ран покрыта сухой бурого цвета прочно фиксированной корочкой, с хорошо выраженным эпителиальным валиком шириной 2-3мм. Температура кожи вокруг ран остается практически прежней, площадь ран уменьшилась на 3,15см² (Р<0,001), ежедневное уменьшение площади ран с 14-х по 21-е сутки составило 10,78%.
Гистологически и гистохимически с краевых участков раны, под отторгающийся струп врастает многослойный ороговевающий эпителий, истончающийся по направлению к центральным участкам, где он состоит из клеток мальпигиевого слоя. Под струпом – подлежащая соединительная ткань, зрелая, фуксинофильная, с беспорядочным расположением пучков коллагеновых волокон и большим количеством сосудов. Содержание ДНК в ядрах, РНК в ядрах и цитоплазме понижено. Содержание гликогена увеличено в эпителиальных клетках и клетках соединительной ткани.
В контрольных ранах, по сравнению с ранами, где использовали МАОП-гель, различия местной температуры, площади ран – несущественны.
Гистологически и гистохимически установлены следующие отличия: сосудистый слой с круглоклеточными элементами контрольных ран охватывает большую глубину, содержит участки с кровоизлияниями, под ним слой рыхлой ткани менее развит. Реакция Шабадаша слабо выражена и выявляется только в поверхностном слое эпидермиса и коллагеновых волокнах.
