Эстральная цикличность у домашних и диких жвачных животных в лактационный период

созревании яйцеклеток в доминантных фолликулах яичников и создании определенных условий в организме и органах репродуктивной системы (крови и влагалищной среде).

1. Достоверное увеличение содержания общего холестерина в сыворотке крови коров в послеродовой период является критерием успешности трансформации метаболических потоков при смене физиологического состояния беременности на послеродовой период и способствует восстановлению результативных эстральных циклов.

2. На основании исследования клеток различной морфологии на мазках, взятых с поверхностного эпителия краниального отдела влагалища, проявляющийся у диких жвачных животных в период лактации эструс отражает изменение поведенческой реакции и не связан с активацией функционального состояния яичников.

3. Дополнительное включение в корма препаратов, содержащих биологически активные вещества, способствует восстановлению полноценных эстральных циклов и оплодотворению коров в ранние сроки лактации.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены автором устно и обсуждены на III и IV Международных симпозиумах по лосю (Сыктывкар,1990; Фэрбенкс, Аляска, 1997); VII, VIII и IX Международных симпозиумах по новым кормовым растениям “Эколого-популяционный анализ кормовых растений естественной флоры, интродукция и использование“ (Сыктывкар, 1990, 1996, 1999); Международной конференции: “Актуальные проблемы биологии в животноводстве“ (Боровск, 2000); Международном совещании по фитоэкдистероидам (Сыктывкар, 1996); XIX и ХХ съездах Физиологического общества им. И.П.Павлова (Екатеринбург, 2004; Москва, 2007); I Съезде физиологов СНГ (Сочи, Дагомыс, 2005); III Съезде физиологов Урала (Екатеринбург, 2006); 2-й Российской научно-практической конференции: “Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными растительными ресурсами и создания функциональных продуктов» (Москва, 2003); Республиканской научно-практической конференции “Рыночные отношения в агропромышленном комплексе Республики Коми: современное состояние и перспективы” (Сыктывкар, 1998); на семинарах научной школы академика М.П.Рощевского (Сыктывкар, 2005, 2006).

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 67 научных работ. Список основных публикаций содержит 17 статей (в том числе 5 в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ), 10 патентов, 34 -материалы и тезисы докладов, 5 публикаций информационных материалов.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, методов и материалов исследования, результатов и их обсуждения, заключения, выводов, списка литературы и приложения. Работа изложена на 260 страницах машинописного

текста, включая 13 рисунков, 35 таблиц. Библиографический раздел включает 506 источников, в том числе 263 – зарубежных авторов.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в ГУ Институт физиологии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии наук. Эксперименты проводили на клинически здоровых животных фермы Выльгордской научно-экспериментальной биологической станции Коми научного центра с декабря по июнь-месяц в течение 1981-1998 гг. Использовали коров холмогорской породы 3-11-летнего возраста с живой массой 500-750 кг со среднегодовой молочной продуктивностью 4000 кг и выше.

Исследования состояния репродуктивной функции и суточной молокопродукции у лосих проводили на лосеферме Печоро-Илычского государственного природного заповедника. В течение четырех лет обследовали семь лосих в предродовый период в мае – начале июня, 17 лактационных периодов у пяти животных в возрасте от трех до 13 лет и девять животных – после родов в июне, августе и октябре.

Опытные и контрольные группы формировали животными-аналогами по возрасту, продуктивности, характеру изменений течения послеродового периода, сроков после родов и т.д. Общее число животных составило 546, из них коров - 525 и лосих - 21. В ходе экспериментальных исследований проводили ежедневные (до трех-пяти раз в сутки) наблюдения индивидуально за каждым животным. Всего проведено 148500 обследований.

Методика исследования воспроизводительной функции коров и лосих заключалась в клиническом обследовании животных в определенные сроки после родов и беременности, биохимическом анализе крови и влагалищного содержимого.

Взятие образцов крови из яремной вены коров и лосих осуществляли через три часа после утреннего кормления в предродовой период, сразу после родов, каждые 15 дней лактационного периода и на первых месяцах беременности. Исследовали пробы крови на содержание общего белка и белковых фракций крови по Лебедеву, Усовичу (1976); холестерина - методом Илька (Методические указания…, 1973); каротина унифицированным способом; витамина А - по Сурай и др. (1987).

Эксперименты по изучению эстральной цикличности у коров выполняли в течение ряда лет на одних и тех же животных методом периодов при соблюдении времени и последовательности использования различных приемов, предусмотренных постановкой экспериментов.

Функциональное состояние яичников определяли по исследованию зависимым от гормонального фона морфофункциональным изменениям покровного эпителия

краниального отдела влагалища самок животных в послеродовом периоде. Метод был разработан нами для коров и лосих (Василенко, Борисенков, 1987; Василенко, 2000 а, б).

Метод определения функционального состояния яичников у коров включает взятие мазка из верхнебокового свода влагалища на уровне шейки матки путем снятия клеточной массы со стенок пипеткой для искусственного осеменения с обработанным шероховатым концом (5-7 см). Пипетку вводили через вагинальное зеркало с подсветкой под визуальным контролем. Материал, взятый со стенки влагалища, равномерно распределяли по предметному стеклу. Сразу после взятия высушенные мазки фиксировали в 70° спирте в течение 10 минут. Окраску мазков проводили по методу Романовского-Гимза. С помощью клавишного счетчика подсчитывали 200 клеток в разных участках на мазках, используя микроскоп Biolar (увеличение 12х10).

На мазках, взятых у коров, отмечали наличие четырех типов десквамированных клеток:

1. Клетки собственно поверхностного слоя влагалищного эпителия - самые крупные клетки со слабо ацидофильной или слабо базофильной окраской, иногда вакуолизированные. Ядро большое, круглое или овальное, интенсивно окрашенное.

2. Большие промежуточные клетки влагалищного эпителия, прилегающие к клеткам собственно поверхностного слоя, отличаются от базальных клеток интенсивной ацидофильной окраской цитоплазмы.

3. Малые промежуточные клетки круглой, овальной или треугольной формы с цитоплазмой, чаще окрашенной в слабые базофильные поля.

4. Единичные клетки парабазального слоя. Ядро большое, круглое, окружено ободком цитоплазмы. Клетки по величине не больше лимфоцита.

Определение принадлежности клеток к определенному типу осуществляли с использованием классификации клеток влагалищного эпителия для женщин (Арсеньева, 1977) и собак (Dore, 1978, 1978 а). В группу поверхностных клеток влагалищного эпителия включали также безъядерные или с чуть заметными контурами ядра прозрачные чешуйчатые клетки со слегка базофильной или бесцветной цитоплазмой, так называемые “тени”, по аналогии с “тенями” эритроцитов. Такие клетки часто располагаются отдельно, имеют закрученные края. В эту группу клеток включали дополнительно обособленные ядра и “тени” ядер при цитолизе.

Учитывали следующие характеристики клеточного состава влагалищных мазков у коров в послеродовом периоде: изменения в содержании отдельных типов поверхностных клеток, цитолиз или наличие ядер без цитоплазмы и их "теней" и появление лейкоцитов. Каждый тип клеток представляли в процентах от суммы. Лейкоциты и другие клетки