Эстральная цикличность у домашних и диких жвачных животных в лактационный период

текста, включая 13 рисунков, 35 таблиц. Библиографический раздел включает 506 источников, в том числе 263 – зарубежных авторов.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в ГУ Институт физиологии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии наук. Эксперименты проводили на клинически здоровых животных фермы Выльгордской научно-экспериментальной биологической станции Коми научного центра с декабря по июнь-месяц в течение 1981-1998 гг. Использовали коров холмогорской породы 3-11-летнего возраста с живой массой 500-750 кг со среднегодовой молочной продуктивностью 4000 кг и выше.

Исследования состояния репродуктивной функции и суточной молокопродукции у лосих проводили на лосеферме Печоро-Илычского государственного природного заповедника. В течение четырех лет обследовали семь лосих в предродовый период в мае – начале июня, 17 лактационных периодов у пяти животных в возрасте от трех до 13 лет и девять животных – после родов в июне, августе и октябре.

Опытные и контрольные группы формировали животными-аналогами по возрасту, продуктивности, характеру изменений течения послеродового периода, сроков после родов и т.д. Общее число животных составило 546, из них коров - 525 и лосих - 21. В ходе экспериментальных исследований проводили ежедневные (до трех-пяти раз в сутки) наблюдения индивидуально за каждым животным. Всего проведено 148500 обследований.

Методика исследования воспроизводительной функции коров и лосих заключалась в клиническом обследовании животных в определенные сроки после родов и беременности, биохимическом анализе крови и влагалищного содержимого.

Взятие образцов крови из яремной вены коров и лосих осуществляли через три часа после утреннего кормления в предродовой период, сразу после родов, каждые 15 дней лактационного периода и на первых месяцах беременности. Исследовали пробы крови на содержание общего белка и белковых фракций крови по Лебедеву, Усовичу (1976); холестерина - методом Илька (Методические указания…, 1973); каротина унифицированным способом; витамина А - по Сурай и др. (1987).

Эксперименты по изучению эстральной цикличности у коров выполняли в течение ряда лет на одних и тех же животных методом периодов при соблюдении времени и последовательности использования различных приемов, предусмотренных постановкой экспериментов.

Функциональное состояние яичников определяли по исследованию зависимым от гормонального фона морфофункциональным изменениям покровного эпителия

краниального отдела влагалища самок животных в послеродовом периоде. Метод был разработан нами для коров и лосих (Василенко, Борисенков, 1987; Василенко, 2000 а, б).

Метод определения функционального состояния яичников у коров включает взятие мазка из верхнебокового свода влагалища на уровне шейки матки путем снятия клеточной массы со стенок пипеткой для искусственного осеменения с обработанным шероховатым концом (5-7 см). Пипетку вводили через вагинальное зеркало с подсветкой под визуальным контролем. Материал, взятый со стенки влагалища, равномерно распределяли по предметному стеклу. Сразу после взятия высушенные мазки фиксировали в 70° спирте в течение 10 минут. Окраску мазков проводили по методу Романовского-Гимза. С помощью клавишного счетчика подсчитывали 200 клеток в разных участках на мазках, используя микроскоп Biolar (увеличение 12х10).

На мазках, взятых у коров, отмечали наличие четырех типов десквамированных клеток:

1. Клетки собственно поверхностного слоя влагалищного эпителия - самые крупные клетки со слабо ацидофильной или слабо базофильной окраской, иногда вакуолизированные. Ядро большое, круглое или овальное, интенсивно окрашенное.

2. Большие промежуточные клетки влагалищного эпителия, прилегающие к клеткам собственно поверхностного слоя, отличаются от базальных клеток интенсивной ацидофильной окраской цитоплазмы.

3. Малые промежуточные клетки круглой, овальной или треугольной формы с цитоплазмой, чаще окрашенной в слабые базофильные поля.

4. Единичные клетки парабазального слоя. Ядро большое, круглое, окружено ободком цитоплазмы. Клетки по величине не больше лимфоцита.

Определение принадлежности клеток к определенному типу осуществляли с использованием классификации клеток влагалищного эпителия для женщин (Арсеньева, 1977) и собак (Dore, 1978, 1978 а). В группу поверхностных клеток влагалищного эпителия включали также безъядерные или с чуть заметными контурами ядра прозрачные чешуйчатые клетки со слегка базофильной или бесцветной цитоплазмой, так называемые “тени”, по аналогии с “тенями” эритроцитов. Такие клетки часто располагаются отдельно, имеют закрученные края. В эту группу клеток включали дополнительно обособленные ядра и “тени” ядер при цитолизе.

Учитывали следующие характеристики клеточного состава влагалищных мазков у коров в послеродовом периоде: изменения в содержании отдельных типов поверхностных клеток, цитолиз или наличие ядер без цитоплазмы и их "теней" и появление лейкоцитов. Каждый тип клеток представляли в процентах от суммы. Лейкоциты и другие клетки

крови отмечали отдельно. При обследовании одного животного осуществляли взятие двухтрех мазков.

Для диагностирования яичников у животных определяли процентное содержание собственно поверхностных клеток с четким ядром и ядер без цитоплазмы и их «теней». При содержании собственно поверхностных клеток не более 7,5% и ядер без цитоплазмы и их «теней» не более 1,3% диагностировали предовуляторный период полового цикла и делали заключение о наличии благоприятных условий для оплодотворения коров. При содержании собственно поверхностных клеток не более 7,5% и обособленных ядер и их «теней» в пределах 3,1 – 8,5% диагностировали беременность и судили о благоприятных условиях для развития плода.

Влагалищные мазки были взяты у 143 коров в определенные периоды после родов и у 56 животных – на разных сроках беременности. Забор мазков осуществляли у семи лосих: в июне-августе у пяти лактирующих лосих и в период гона у двух самок в возрасте 16 месяцев в специально оборудованном станке на лосеферме.

Для характеристики возобновления эстральных циклов у коров определяли длительность временного промежутка в днях от родов до появления признаков проявления половой охоты – отказ от корма, беспокойство, снижение удоя, изменение двигательной активности и поведенческих реакций у животных (проявление рефлекса вспрыгивания на других животных стада или состояния неподвижности в конце истинной половой охоты). Исследовали возрастные особенности возобновления эстральных циклов у 45 коров трехшестилетнего возраста в течение 5 лет. Учитывали периоды выделения цервиковагинального секрета, осуществляли отбор проб секрета и исследовали концентрацию водородных ионов (рН), показатель преломления цервико-вагинального секрета в отраженном свете на рефрактометре ИРФ-22. Проводили забор мазков и осуществляли подсчет количества разных типов клеток эпителия, выстилающего краниальный отдел влагалища.

Определяли длительность циклов и половой охоты (эструса) в цикле у 73 животных. Отмечали особенности проявления циклов - овуляторный (нормальный) заканчивается овуляцией и оплодотворением; ановуляторный - без овуляции; ареактивный цикл - без стадии возбуждения; нерегулярный цикл - с изменением длительности и т.д.

Проводили эксперименты по изучению влияния на функциональное состояние яичников и возобновление эстральных циклов у коров в послеродовой период дополнительного использования в рационе экспериментальных препаратов с включением калиевой соли уксусной кислоты или животных тканей и растений, содержащих биологически активные вещества: