Оператор должен работать в лаборатории в белом халате, колпаке или косынке, а в неблагополучных хозяйствах – в фартуке и резиновых сапогах; спецодежду используют только на пункте.
4.2. Для предупреждения распространения заразных болезней оператор обязан выполнять следующие правила:
- до и после осеменения или обследования каждой коровы на пункте необходимо мыть руки с мылом, а затем обтирать их ватным тампоном, смоченным 70°-ным спиртом;
- для осеменения использовать стерильные инструменты;
- мыть и дезинфицировать резиновые сапоги, фартуки после работы, а также перед выездом на каждую ферму;
- при переезде с фермы на ферму в одном хозяйстве, а при маршрутнокольцевом обслуживании нескольких пунктов (в ряде хозяйств) оператор должен переносить (перевозить) с собой только сосуд Дьюара (емкостью 5-20 л) со спермой в жидком азоте. Инструменты и материалы для осеменения коров должны быть на каждом пункте.
4.3. Инструменты следует стерилизовать кипячением, сухим жаром, фламбированием и химическими средствами:
стерилизацию кипячением стеклянных шприц-катетеров и посуды осуществляют в следующем порядке: тщательно промытые шприц-катетеры разбирают, цилиндр шприца обертывают бинтом и прикрепляют к нему поршень. Инструменты помещают в стерилизатор, заливают на 2/3 объема дистиллированной водой, закрывают крышкой и кипятят 20 мин;
- канал шприца освобождают от остатков воды стерильным 1% раствором хлористого натрия (40°С) или 2,9 % раствором лимоннокислого натрия. После этого в шприц набирают сперму (если шприц-катетер ложится на хранение, то он заполняется 70% спиртом из баночки № 2);
- стерилизация сухим жаром в условиях пункта может быть проведена в сушильном шкафу; чистые стеклянные инструменты, посуду и шприц-катетеры в разобранном виде помещают в шкаф, доводят температуру до 180°С и выдерживают 1 ч, затем дают остыть, вынимают и используют. Металлические инструменты стерилизуют в кипящей воде в течение 20 мин. Остатки воды с обеззараженных инструментов удаляют стерильными салфетками, сохраняемыми в стерильной банке с притертой пробкой;
- полимерные шприцы для осеменения в облицованных гранулах после использования моют и стерилизуют путем их погружения (до 10 раз) в 0,5%ный раствор хлорамина Б не менее чем на 24 ч или путем облучения с двух сторон с помощью бактерицидных ламп в течение 40 мин. на расстоянии 20 см от источника ультрафиолетовых лучей;
- прибор для осеменения соломинкой КвикЛок 2000 стерилизуют кипячением в стерилизаторе в течении 20 минут или в автоклаве при температуре 1200 С. Использованные предметные и покровные стекла моют в теплой воде и протирают стерильной марлевой салфеткой.
4.4. Стерильные инструменты хранят в застекленных шкафах или в настольной витрине-ящике, оборудованной бактерицидной и электрической лампами. В
полевых условиях влагалищное зеркало, корнцанг, стеклянные палочки, ножницы и другие инструменты, можно обеззараживать обжиганием их поверхности не коптящим пламенем походной газовой плитки, примуса, спиртовки или тампона, смоченного 960 -ным спиртом.
4.5. Растворы хлористого и лимоннокислого натрия приготавливают ежедневно. В 100 мл дистиллированной или кипяченой профильтрованной воды растворяют 1 г хлористого натрия. Раствор лимоннокислого натрия (трехзамещенного пятиводного) готовят путем растворения в 100 мл дистиллированной воды 3 г лимоннокислого натрия, подогревают до 90-95°С и разливают в стерильные пронумерованные банки.
Для приготовления раствора фурацилина берут 1 л кипящей воды, вносят 10 г хлористого натрия и 0,2 г фурацилина, охлаждают и фильтруют. Раствор хранят не более 2 дней в затемненном месте или в банке из темного стекла с притертой пробкой.
Применяемый 70°-ный раствор спирта готовят путем добавления к 73 мл 96°"ного спирта-ректификата 27 мл прокипяченной дистиллированной воды. Правильность приготовления раствора проверяют спиртометром.
4.6. Во время каждой 12-й заправки из сосуда Дьюара полностью удаляют жидкий азот и заправляют его свежим жидким азотом, при этом семя на период замены азота помещают в другой сосуд с азотом.
5. ПОДГОТОВКА ИНСТРУМЕНТОВ, ОТТАИВАНИЕ СПЕРМЫ
5.1. Подготовка инструментов к работе Техник надевает белый халат, колпак или косынку. Моет стол и руки. Оператор снимает с микроскопа чехол, по необходимости протирает, подключает электроосветитель, регулирует освещенность в микроскопе, делая её неяркоматовой; предметные и покровные стекла кладет на обогревательный столик микроскопа.
Готовит термостатированную водяную баню температурой 38о С, опускает в неё термометр.
На чистый стол ставит тампонницу с тампонами, пропитанными 96%-ным спиртом.
На край стола кладет перчатки, канцелярские скрепки, пипетки, ампулы, салфетки и другие необходимые для осеменения инструменты согласно технологии.
Пинцетом достает первый спиртовой тампон, обрабатывает пальцы рук от кончиков пальцев к ладони, свободную часть стола и выбрасывает тампон. Пинцетом берет второй тампон, обрабатывает подставку для инструментов, протирая сначала среднюю часть, а затем боковые и нижнюю (всё в одном направлении), ставит на стол, тампон выбрасывает. Третьим тампоном обрабатывает стеклянную палочку, пинцет, корнцанг, ножницы, осеменительный инструмент, ампулу с цитратом (всё по направлению сверху вниз), выбрасывает его.
Обработанные инструменты кладет на подставку, а ампулу цитрата вскрывает резаком, так, чтобы в отверстие свободно входила гранула. Помещает её в водяную баню или на столик Морозова для подогрева на 2-3 мин. Нельзя вскрывать ампулы, разбивая их по наружной стенке, так как стекло, попавшее в циртат, может травмировать слизистую оболочку матки. 5.2. Оттаивание спермы в открытых гранулах. Четвертым тампоном оператор обрабатывает пакет с пипетками (чехлами). Угол пакета надрезают стерильными ножницами или прорывают концом пипетки.
Выдвигает пипетку на 1/3 длины, соединяет её со стерильным шприцем (или с полиэтиленовой ампулой) с помощью муфты.
Техник надевает защитные очки и перчатки, открывает сосуд Дьюара, быстро подтягивает к верхней третьи горловины (не более 5 с.) канистру с тубой и вскрывает её. Извлекает стерильным, предварительно охлажденным в азоте, пинцетом(корнцангом) гранулу и переносит её в подготовленную ампулу или флакон с раствором цитрата. Тубу с оставшимся семенем сразу закрывает и опускает с сосуд Дьюара в положение хранения. Закрывает сосуд крышкой. Эти манипуляции должны занимать не более 5 с.
Оттаивать гранулу необходимо при температуре +38о С в течении 8-10 с, осторожным вращательным движением перемещая ампулу со спермой в водяной бане до тонкого ледяного стерженька. После оттаивания ампулу со спермой насухо вытирают стерильной салфеткой, ставят в штатив из теплоизолирующего материала и определяют качество спермы. Категорически запрещается оттаивать в одной ампуле более одной гранулы, а так же оставлять оттаянную сперму в водяной бане. При заправке пипетки поршень шприца, соединенного с ней, следует отвести на 1/3, создав тем самым достаточный запас воздуха для выталкивания всей спермы из пипетки. Только после этого набирают сперму, не допуская её попадания в шприц. Для проверки герметичности инструмент располагается вертикально: столбик семени должен остаться на месте.
Для осеменения коров спермой, замороженной в открытых гранула, используют стерильные одноразовые полистироловые пипетки, соединенные полиэтиленовым переходником или эластичной трубкой длиной 30-50 мм со шприцом на 2-5 мл. 5.3. Оттаивание спермы в облицованных гранулах Гранулы объемом 0,25-0,33 мл осуществляют без разбавления в 2,9%-ном растворе цитрата натрия. Техник надевает защитные очки и перчатки, открывает сосуд Дьюара, быстро подтягивает к верхней третьи горловины (не более 5 с) канистру с тубой и вскрывает её. Извлекает стерильным, предварительно охлажденным в азоте пинцетом (корнцангом) облицованную гранулу и быстро переносит её пинцетом с широкими браншами в водяную баню температурой 38-40о С, оттаивает до появления тонкого стерженька льда. Через 8-10 с гранулу извлекает, насухо вытирает стерильной салфеткой, проверяет на герметичность путем легкого сжатия между двумя пальцами:
