Методические рекомендации по технологии искусственного осеменения коров и телок

Обработанные инструменты кладет на подставку, а ампулу цитрата вскрывает резаком, так, чтобы в отверстие свободно входила гранула. Помещает её в водяную баню или на столик Морозова для подогрева на 2-3 мин. Нельзя вскрывать ампулы, разбивая их по наружной стенке, так как стекло, попавшее в циртат, может травмировать слизистую оболочку матки. 5.2. Оттаивание спермы в открытых гранулах. Четвертым тампоном оператор обрабатывает пакет с пипетками (чехлами). Угол пакета надрезают стерильными ножницами или прорывают концом пипетки.

Выдвигает пипетку на 1/3 длины, соединяет её со стерильным шприцем (или с полиэтиленовой ампулой) с помощью муфты.

Техник надевает защитные очки и перчатки, открывает сосуд Дьюара, быстро подтягивает к верхней третьи горловины (не более 5 с.) канистру с тубой и вскрывает её. Извлекает стерильным, предварительно охлажденным в азоте, пинцетом(корнцангом) гранулу и переносит её в подготовленную ампулу или флакон с раствором цитрата. Тубу с оставшимся семенем сразу закрывает и опускает с сосуд Дьюара в положение хранения. Закрывает сосуд крышкой. Эти манипуляции должны занимать не более 5 с.

Оттаивать гранулу необходимо при температуре +38^о С в течении 8-10 с, осторожным вращательным движением перемещая ампулу со спермой в водяной бане до тонкого ледяного стерженька. После оттаивания ампулу со спермой насухо вытирают стерильной салфеткой, ставят в штатив из теплоизолирующего материала и определяют качество спермы. Категорически запрещается оттаивать в одной ампуле более одной гранулы, а так же оставлять оттаянную сперму в водяной бане. При заправке пипетки поршень шприца, соединенного с ней, следует отвести на 1/3, создав тем самым достаточный запас воздуха для выталкивания всей спермы из пипетки. Только после этого набирают сперму, не допуская её попадания в шприц. Для проверки герметичности инструмент располагается вертикально: столбик семени должен остаться на месте.

Для осеменения коров спермой, замороженной в открытых гранула, используют стерильные одноразовые полистироловые пипетки, соединенные полиэтиленовым переходником или эластичной трубкой длиной 30-50 мм со шприцом на 2-5 мл. 5.3. Оттаивание спермы в облицованных гранулах Гранулы объемом 0,25-0,33 мл осуществляют без разбавления в 2,9%-ном растворе цитрата натрия. Техник надевает защитные очки и перчатки, открывает сосуд Дьюара, быстро подтягивает к верхней третьи горловины (не более 5 с) канистру с тубой и вскрывает её. Извлекает стерильным, предварительно охлажденным в азоте пинцетом (корнцангом) облицованную гранулу и быстро переносит её пинцетом с широкими браншами в водяную баню температурой 38-40^о С, оттаивает до появления тонкого стерженька льда. Через 8-10 с гранулу извлекает, насухо вытирает стерильной салфеткой, проверяет на герметичность путем легкого сжатия между двумя пальцами:

герметичной считается спермодоза, у которой не обнаружена утечка содержимого. После этого оценивает качество спермы на подвижность. 5.4. Оттаивание спермы в соломинках, укупоренных стеклянными шариками (литовская технология).

Техник надевает защитные очки, перчатки, подтягивает к верхней трети горловины сосуда Дьюара (не более 5 с) канистру с тубой, быстро извлекает стерильным, предварительно охлажденным в азоте, пинцетом (корнцангом) соломинку, встряхивает её 2-3 с и погружает в воду термостата для оттаивания. Встряхивание способствует испарению жидкого азота и предупреждает возможное растрескивание соломинок и выдавливание укупорочных шариков. Канистру с семенем опускает в азот. Сосуд закрывает крышкой. Оттаивать соломинку необходимо в течении 10 с при температуре 38^о С, перемещая её круговыми движениями в воде.

Затем соломинку извлекают из термостата и, тщательно осушая стерильной марлевой или бумажной салфеткой, проверяют запись клички и номера быка на соломинке, энергично встряхивают, чтобы воздушный пузырек переместился в конец соломинки. Поршень осеменительного шприца оттягивают примерно на 90 мм, в трубку до упора вставляют соломинку, чтобы кончик её с воздушным пузырьком был снаружи. Конец соломинки обрезают стерильными ножницами строго перпендикулярно через воздушный пузырек на расстоянии около 7 мм от конца соломинки. Ножницы должны быть острыми и использоваться только для обрезания соломинок. Тупые ножницы деформируют соломинку, при этом может нарушаться плотность соединения её с внутренней частью конусного конца (адаптера) защитного чехла. На шприц с соломинкой надевают защитный чехол, который тщательно закрепляют фиксатором. Надежность закрепления проверяют слабым надавливанием большого пальца на поршень: чехол не должен сдвигаться. При этом удаляется воздушный пузырек и появляется капелька спермы, которую можно исследовать под микроскопом. 5.5. Оттаивание спермы в пайетах (французская технология).

Техник надевает защитные очки, перчатки, подтягивает к верхней трети горловины сосуда Дьюара (не более 5 с) канистру с тубой, быстро извлекает стерильным, предварительно охлажденным в азоте, пинцетом (корнцангом) соломинку за запаянный конец, встряхивает 2 раза, чтобы удалить остатки азота в текстильной пробке, и быстро погружает в термостат для оттаивания. Встряхивание способствует испарению жидкого азота из текстильной пробки и предупреждает возможное выдавливание пробки из соломинки. Канистру с семенем опускают в азот. Сосуд закрывает крышкой. Оттаивать соломинку необходимо в течении 10 с при температуре 38^о С, перемещая круговыми движениями в воде.

Затем соломинку извлекают из термостата, тщательно осушают стерильной марлевой или бумажной салфеткой. Проверяют запись клички, номер быка местонахождение пузырька воздуха (должен находиться с той стороны соломинки, которая запаяна в лаборатории). Поршень шприца оттягивают на 12 см (стержень поршня слегка искривлен, что удерживает его в одном положении). С помощью фильтровальной бумаги или стерильной марлевой

салфетки необходимо согреть полость (камеру) шприца, установить соломинку со стороны текстильной пробки в полость (камеру) шприца. Конец соломинки со стороны запайки обрезают в середине воздушного пузырька стерильными ножницами строго перпендикулярно. Ножницы должны быть острыми, так как тупые ножницы деформируют соломинку, при этом может нарушиться плотность соединения её с внутренней частью конусного конца защитного чехла. На шприц с соломинкой надевают защитный чехол, который закрепляют. Надежность закрепления проверяют слабым надавливанием большого пальца руки на поршень шприца: чехол не должен сдвигаться. При этом удаляется воздушный пузырек и появляется капелька спермы, которую можно исследовать под микроскопом на подвижностью

6. ОЦЕНКА СПЕРМЫ ПО ПОДВИЖНОСТИ (АКТИВНОСТИ)

6.1. Для проверки качества спермы необходимо использовать подогретые предметные и покровные стекла, находящиеся во время работы на обогреваемом столике микроскопа. Для взятия пробы на исследование вращательными движениями сперму смешивают, приоткрывают пробку флакона и берут стерильной стеклянной палочкой или пастеровской пипеткой каплю спермы и помещают на предметное стекло. Флакон со спермой немедленно закрывают пробкой. Дают сперме нагреться до 38°С на обогревательном столике микроскопа. После чего при увеличении микроскопа в 120-200 раз отыскивают в поле зрения спермии.

Подвижность спермиев оценивают по десятибалльной шкале. Высшую оценку (10 баллов) получает сперма, в которой практически все спермии имеют прямолинейно-поступательное движение. При оценке 9 баллов таких спермиев 90%, 8 баллов - 80, 7 баллов - 70% спермиев движутся прямолинейнопоступательно и т.д.

Из каждой партии проверяют сперму из 1-2 доз на активность под микроскопом.

В соответствии с ГОСТ 26030-83 (Изменение №1) «Сперма быков замороженная» к использованию допускается сперма быков-производителей, имеющая следующие характеристики:

• подвижность спермиев, баллы (%), не ниже 4 (40);

• число спермиев с прямолинейно-поступательным движением (ППД) в дозе, млн., не менее 15;

• объем дозы, см³ , 0,1 - 1,0;

• выживаемость спермиев при 38°С, не менее 5 часов;

• коли-титр отрицательный;

- микроорганизмы, вызывающие инфекционные заболевания, не допускаются. От быков-производителей, проверенных по качеству потомства и признанных улучшателями, а также от быков мясных пород, допускается к использованию сперма с подвижностью не ниже 3 баллов (30%) и числом спермиев с прямолинейно-поступательным движением в дозе не менее 10 млн.