в
___ ФИЗИЮЛОГИЯ И БИОТЕКНИКА РАЗМНОЖЕНИЯЛОШАДЕЙ |
лучении такой спермы самца-производителя тщательно обследуют, назначают соответствующее лечение и не допускают к использованию до полного выздоровления.
Активность спермиев определяют под микроскопом при температуре 38-39 °С, используя специальный обогревательный столик. Для оценки активностимы, 2-3 каплиэякулята 0,9% растворана чистое хлоридапредметное натриястеклои накрываютнаносят покровнымкаплю сперстеклом. Раздавленную каплю исследуют под микроскопом в неярком свете при увеличении 200—300 раз. Сперму оценивают глазомерно по десятибалльной шкале, определяя количество спермиев с прямолинейнопоступательным движением. Высшую оценку — 10 баллов — получает сперма, в которой практически все спермии имеют прямолинейно-поступательное движение либо передвигаются дугообразно. При оценке 9 баллов примерно 90% спермиев двигаются прямолинейно-поступательно либо по большой дуге, при оценке 5 баллов — 50% ит. д. Сперму, не содержащую спермиев, обозначают буквой А (аспермия), мертвую сперму — буквой H (некроспермия). Активность нормальной спермы составляет 6—10 баллов.
Концентрацию спермы высчитывают при помощи счетной камеры Горяева (рис. 2.8), используемой для подсчета эритроцитов и лейкоцитов, а также при помощи фотоэлектрического колориметра или автоматического счетчика клеток. Камера Горяева — наиболее простой и достаточно надежный способ определения концентрации спермы. Она состоит из толстого предметного стекла, разделенного поперечны-
м ЕЕННЕЕННЕЕННЕЕНННЕТЕН
а No TTT
СЕЕЕ ЕЕ
—— Te aioli
(y—1) ЕЕНЕЕНЕЕН ЕН Е:
{| utЕАО| 1 5ГЕi ГЕПАТИТ
Е ПЕРРИЕЕНЕЕННЕЕЕЕЕННЕЕНЕНЫНАРА
4 et | ЕЕ
ЕBil CtПАЩЕНОЕtm ttНИР ТИНИНАГ
6 в
Рис. 2.8. Счетная камера Горяева: а — вид сбоку; 6 — вид сверху; в — сетка
ми прорезями на три площадки. Средняя площадка ниже боковых на 1/10 мм. Она разделена продольной прорезью на 2 площадки, каждая из которой имеет выгравированную сетку, состоящую из 225 больших квадратов, 25 из них разделены на 16 маленьких квадратиков. Площадь маленького квадратика составляет 1/400 мм?. Если площадку накрыть шлифованнымвит 1/400 ммз.вит 1/400 ммз. 1/400 ммз. ммз. стеклом, то объем объем камеры маленького квадратика соста-
шлифованнымвит 1/400 ммз.вит 1/400 ммз. 1/400 ммз. ммз. стеклом, то объем объем камеры маленького квадратика соста| Для подсчета спермиев пробу спермы предварительно разбавляют в 3% (гипертоническом) растворе натрия хлорида. В таком растворе натрия хлорида спермии становятся неподвижными (погибают), что об| легчает технику подсчета. Cnepmy разбавляют в 100 раз при помощи | | эритроцитарного меланжера. Для этого вначале набирают в меланжер | | сперму до отметки 1, затем — раствор натрия хлорида до деления 101. Чтобы равномерно смешать сперму с раствором, концы меланжера за| | жимают между пальцами руки (большим и указательным) и встряхива) ют в течение 2-3 мин. Из пипетки меланжера удаляют первые четыре | капли, не содержащие спермиев. Следующую каплю вносят под заранее | притертое шлифованное стекло. Заряженную камеру Горяева кладут | на столик микроскопа и исследуют под большим увеличением микро| скопа. Спермии подсчитывают в 5 больших квадратах (80 малых) по | диагонали. Считают только головки спермиев, расположенные внутри || | малых квадратиков, а также на их левых и верхних линиях. Число спер| миев, подсчитанных в 5 больших квадратах, суммируют и делят на 200. | у При делении получается цифра, выражающая концентрацию спермиев | | (млрд/мл). | ноеЦенным соотношение показателем нормальных при оценке и патологических качества спермы форм является спермиев. процент- Для определения их соотношения наносят на край обезжиренного сухого | чистого и теплого предметного стекла каплю спермы и 2-3 капли 0,9%т : | раствора натрия хлорида. Капли быстро перемешивают стеклянной па| лочкой и делают при помощи шлифованного стекла тонкий мазок. Ма; x : | зок высушивают, фиксируют несколько мипут 96% спиртом и окраши| ваютй не менеев5 мин 1-2%oy раствором эозина. Раствор краски готовят | на 2,9% растворе натрия цитрата. Краску на стекле смывают дистилли| рованнойгривают подводой микроскопоми высушивают при увеличении 400—600Ha воздухе. Подсохший раз и подсчитываютмазок просма| в нескольких полях зрения не менее 200 спермиев. Количество нормаль| ных и патологических форм спермиев по каждому полю зрения сумми1 руют и высчитывают их процентное соотношение. |
К числу патологических форм спермиев относят гигантские, карликовые, с деформацией головки, с двумя головками, с надломом шейки и ее эксцентричным прикренлением к головке, изолированные головки, с искривленным и закрученным хвостом, с двумя хвостами, с цитоплазматической каплей и тд. В нормальной сперме жеребца удельный вес патологических форм спермиев не должен превышать 25%. Хранение спермы. Лошадей осеменяют свежеполученной, охлажденной (сохраняемой при температуре 2-5 °С) и замороженно-оттаяннойСвежеполученнуюспермой. сперму используют сразу же после оценки качества. Активность спермиев должна быть не ниже 6 баллов. Свежеполученная сперма со сроком хранения при комнатной температуре более 60 мин к использованию не допускается. Охлаждение — наиболее отработанный способ хранения спермы жеребца вне организма. Для разбавления и кратковременного хранения спермы обычно используют молочно-желточную, глюкозо-желточную илиМолочно-желточнаялактозо-желточнуюсреда:среды.свежее цельное или лучше снятое коровье молоко — 100 мл, желток куриного яйна — 20 мл, спермосан-3 — 30 тыс. ЕД. Молоко берут от клинически здоровых коров с отрицательными результатами исследования на туберкулез, лептоспироз, бруцеллез, а также мастит. Желательно подобрать коров, продуцирующих молоко низкой жирности, поскольку молочные жировые шарики значительно затрудняют оценку разбавленной спермы по качеству. Молоко обязательно в течение 10 мин прогревают в водяной бане при температуре 92—96 °С для разрушения некоторых ее белков, оказывающих на спермии токсическое действие. Затем молоко процеживают через 3-4 слоя чистой стерильной марли, охлаждают до температуры 35-39 °С и добавляют противомикробный препарат. Глюкозо-бикарбонатно-молочная среда: глюкоза — 4,9 г бикарбонат натрия — 0,15 г, обезжиренное сухое молоко — 2,4 г, вода бидистиллированная — до 100 мл, антимикробные препараты (пенициллин и стрептомицин по 150 тыс. ЕД). Глюкозо-желточная среда: глюкоза — 7 г, свежий доброкачественный желток куриного яйца — 0,8 мл, спермосан-3 — 30 тыс. ЕД, вода дистиллированная (бидистиллированная) — 100 мл. Лактозо-желточная среда: лактоза — 11 т, свежий доброкачественный желток куриного яйца — 0,8 мл, спермосан-3 — 30 тыс. ЕД, вода дистиллированная (бидистиллированная) — 100 мл.
