ми прорезями на три площадки. Средняя площадка ниже боковых на 1/10 мм. Она разделена продольной прорезью на 2 площадки, каждая из которой имеет выгравированную сетку, состоящую из 225 больших квадратов, 25 из них разделены на 16 маленьких квадратиков. Площадь маленького квадратика составляет 1/400 мм?. Если площадку накрыть шлифованнымвит 1/400 ммз.вит 1/400 ммз. 1/400 ммз. ммз. стеклом, то объем объем камеры маленького квадратика соста-
шлифованнымвит 1/400 ммз.вит 1/400 ммз. 1/400 ммз. ммз. стеклом, то объем объем камеры маленького квадратика соста| Для подсчета спермиев пробу спермы предварительно разбавляют в 3% (гипертоническом) растворе натрия хлорида. В таком растворе натрия хлорида спермии становятся неподвижными (погибают), что об| легчает технику подсчета. Cnepmy разбавляют в 100 раз при помощи | | эритроцитарного меланжера. Для этого вначале набирают в меланжер | | сперму до отметки 1, затем — раствор натрия хлорида до деления 101. Чтобы равномерно смешать сперму с раствором, концы меланжера за| | жимают между пальцами руки (большим и указательным) и встряхива) ют в течение 2-3 мин. Из пипетки меланжера удаляют первые четыре | капли, не содержащие спермиев. Следующую каплю вносят под заранее | притертое шлифованное стекло. Заряженную камеру Горяева кладут | на столик микроскопа и исследуют под большим увеличением микро| скопа. Спермии подсчитывают в 5 больших квадратах (80 малых) по | диагонали. Считают только головки спермиев, расположенные внутри || | малых квадратиков, а также на их левых и верхних линиях. Число спер| миев, подсчитанных в 5 больших квадратах, суммируют и делят на 200. | у При делении получается цифра, выражающая концентрацию спермиев | | (млрд/мл). | ноеЦенным соотношение показателем нормальных при оценке и патологических качества спермы форм является спермиев. процент- Для определения их соотношения наносят на край обезжиренного сухого | чистого и теплого предметного стекла каплю спермы и 2-3 капли 0,9%т : | раствора натрия хлорида. Капли быстро перемешивают стеклянной па| лочкой и делают при помощи шлифованного стекла тонкий мазок. Ма; x : | зок высушивают, фиксируют несколько мипут 96% спиртом и окраши| ваютй не менеев5 мин 1-2%oy раствором эозина. Раствор краски готовят | на 2,9% растворе натрия цитрата. Краску на стекле смывают дистилли| рованнойгривают подводой микроскопоми высушивают при увеличении 400—600Ha воздухе. Подсохший раз и подсчитываютмазок просма| в нескольких полях зрения не менее 200 спермиев. Количество нормаль| ных и патологических форм спермиев по каждому полю зрения сумми1 руют и высчитывают их процентное соотношение. |
К числу патологических форм спермиев относят гигантские, карликовые, с деформацией головки, с двумя головками, с надломом шейки и ее эксцентричным прикренлением к головке, изолированные головки, с искривленным и закрученным хвостом, с двумя хвостами, с цитоплазматической каплей и тд. В нормальной сперме жеребца удельный вес патологических форм спермиев не должен превышать 25%. Хранение спермы. Лошадей осеменяют свежеполученной, охлажденной (сохраняемой при температуре 2-5 °С) и замороженно-оттаяннойСвежеполученнуюспермой. сперму используют сразу же после оценки качества. Активность спермиев должна быть не ниже 6 баллов. Свежеполученная сперма со сроком хранения при комнатной температуре более 60 мин к использованию не допускается. Охлаждение — наиболее отработанный способ хранения спермы жеребца вне организма. Для разбавления и кратковременного хранения спермы обычно используют молочно-желточную, глюкозо-желточную илиМолочно-желточнаялактозо-желточнуюсреда:среды.свежее цельное или лучше снятое коровье молоко — 100 мл, желток куриного яйна — 20 мл, спермосан-3 — 30 тыс. ЕД. Молоко берут от клинически здоровых коров с отрицательными результатами исследования на туберкулез, лептоспироз, бруцеллез, а также мастит. Желательно подобрать коров, продуцирующих молоко низкой жирности, поскольку молочные жировые шарики значительно затрудняют оценку разбавленной спермы по качеству. Молоко обязательно в течение 10 мин прогревают в водяной бане при температуре 92—96 °С для разрушения некоторых ее белков, оказывающих на спермии токсическое действие. Затем молоко процеживают через 3-4 слоя чистой стерильной марли, охлаждают до температуры 35-39 °С и добавляют противомикробный препарат. Глюкозо-бикарбонатно-молочная среда: глюкоза — 4,9 г бикарбонат натрия — 0,15 г, обезжиренное сухое молоко — 2,4 г, вода бидистиллированная — до 100 мл, антимикробные препараты (пенициллин и стрептомицин по 150 тыс. ЕД). Глюкозо-желточная среда: глюкоза — 7 г, свежий доброкачественный желток куриного яйца — 0,8 мл, спермосан-3 — 30 тыс. ЕД, вода дистиллированная (бидистиллированная) — 100 мл. Лактозо-желточная среда: лактоза — 11 т, свежий доброкачественный желток куриного яйца — 0,8 мл, спермосан-3 — 30 тыс. ЕД, вода дистиллированная (бидистиллированная) — 100 мл.
Согласно рецепту отвешивают глюкозу или лактозу и вносят в чистую стерильную колбу. Вливают в нее необходимое количество прокипяченной и остуженной дистиллированной воды, фильтруют, добавляют антисептик и желток куриного яйца. Перед извлечением желтка скорлупу яйца обеззараживают при помощи бактерицидной лампы или спиртового ватного тампона. Среды готовят непосредственно перед получением спермы. Сперму разбавляют сразу же после оценки ее качества. "Температура спе orn и среды должна быть одинаковой, чтобы предупредить емпературь ный шок спермиев. Разбавляют сперму в градуированном смесителе Среду добавляют к сперме небольшими порциями. После добав ния каждой порции смеситель вращают, чтобы равномерно смешать среду
и сперму. Разбавленную сперму медленно охлаждают и хранят при температуре 2—5 °С не более 48 ч. В процессе хранения допускается я активности спермиев до 5 баллов. Криоконсервация, или замораживание, — самый перспективный способ хранения спермы вне организма. Впервые кобылу успешно, осеменили замороженно-оттаянной спермойв 1957 г. Сперму разбавляют в 4 раза криопротекторной средой: лактозо-хелато-цитратно-желточно-глицериновой средой (ЛХЦЖГ) или лактозосульфатно-желточно-глицериновой средой (ЛСЖГ). Состав среды ЛХЦЖГ: лактоза — 11 г, желток — 0,8 г, 4,2% раствор соды двууглекислой — 0,2 мл, 35,7% раствор натрия urpara — 0,25 мл хелатон — 100 мг, глицерин — 3,5 мл, вода дистиллированная — 100 мл. Состав среды ЛСЖГ лактоза — 10 г, желток — 1,6 г, сульфат аммиака — 150 мг, глицерин — 3,5 мл, вода Дистиллированная - 100 мл После разбавления сперму охлаждают до 0 °С и выдерживают при этой температуре 2 ч. Охлажденную сперму разливают в пюминиевые пакеты по 13 мл, закрывают двойной закруткой и маркируют. На каж. . лом пакете со спермой пишут породную принадлежность, личку и дату
получения спермы. Пакеты со спермой замораживают в парах жидкого азота в специальпом устройстве в течение 5 мин, затем погружают в жидкий азот для хранения при температуре —196 °С. Оттаивание спермы проводят в водяной бане (при температуре 38— 40°C) в течение 1-2 мин. После оттаивания активность enepninen жер ребца должна быть не ниже 2 баллов. Количество активных спермиев в спермодозе — 300-400 млн.
