альный способ осеменения в настоящее время крайне редко применяют на практике.
2.4. Трансплантация за родышей
Трансплантация зародышей — репродуктивная технология, при которой зародыши, полученные от самки-донора, переносят в половые пути самки-реципиента для их дальнейшего вынашивания и рождения в срок зрелого приплода.
Первая успешная трансплантация зародыша лошади, приведшая к рождению жеребенка, была выполнена в 1973 г. в Японии (Oguri М., 1973), Трансплантацию зародышей в практике воспроизводства лошадей применяют редко, главным образом из-за несовершенства и дороговизны этой репродуктивной технологии (Braun, 1994) и, в меньшей степени, из-за консервативного отношения к ней коннозаводчиков, запрещающих ее использование для разведения некоторых пород лошадей (например, чистокровной, американской рысистой и др.). Работу по трансплантации проводятв следующем порядке: отбор доноров и реципиентов; осеменение кобыл в естественный или индуцированный половой цикл; получение зародышей от доноров; оценка, культивирование и хранение зародышей; синхронизация полового цикла реципиента с половым циклом донора, пересадка зародышей реципиентам, Отбор и осеменение доноров. Донор — это самка, от которой получают зародыши (после осеменения в спонтанную или индуцированную охоту) или яйцеклетки для оплодотворения и получения в условиях inшиvitroРеципиентOT другой зародышей.самки — это самка,для вынашивания в половые органы которойи рожденияв переносят зароды-срок полноценного приплода. В качестве доноров используют ценных в племенном отношении животных: молодых кобыл в возрасте 2-3 лет, происходящих от выдаюстокщихся для их оценкиродителей, пофизиологически качеству приплодазрелых (бези отрываздоровых OT соревнований),кобыл-рекордиа также бесплодных или старых, но ценных в племенном отношении кобыл.
Зародыши от кобыл-доноров обычно получают без вызывания множественной овуляции, поскольку существующие на сегодняшнии день схемы индукции полиовуляции (суперовуляции) несовершенны и малоэффективны.
Для получения зародышей доноров осеменяют естественно или искусственно в спонтанный или индуцированный (без стимуляции или с попыткой индукции суперовуляции) половой цикл. Время и кратность осеменения кобыл-доноров контролируют по дате пачала половой охоты и степени зрелости преовуляторного фолликула. При искусственном осеменении кобыл в спермодозе должно содержаться 250-500 млн активных спермиев.
Получение зародышей. Зародыши у кобыл-доноров получают нехирургическим способом из полости рога матки (рис. 2.12). В рог матки зародыши мигрируют на 6-й день после овуляции на стадии морулы или бластоцисты и достигают в диаметре в среднем 0,2 мм. С 7-го по 9-Й день после овуляции зародыши увеличиваются в размерес 0,4 до 2,2 мм (Wanderwall D.K., Woods G.L., 2006). Оптимальное время для вымывания зародыша — 7-й или 8-й день после овуляции. Через 9 дней после овуляции бластоциста имеет слишком большие размеры, легко травмируется и поэтому непригодна для пересадки.
Операцию по нехирургическому извлечению зародышей из полости матки проводят при помощи двухканального катетера самой разной конструкции (например, катетера VEUF-80 длиной 80 см, диаметром 8 мм). Катетер через шейку матки вводят в тело матки и надувают в резиновый баллончик 15—30 мл воздуха. Полость тела и рогов матки
_
ыы юм
— в ™
—
ей
At Oo =
МР va
olf
¢р р
№ / ‘\ Piaр
а * 6
Рис. 2.12. Схема получения (а) и пересадки (6) зародыша лошади нехирургическим способом
al
промывают последовательно три-четыре раза 1 л специальной среды и собирают в цилиндр объемом несколько свыше 1 л. Удаление промывочной жидкости из рогов и тела матки контролируют методом трансректальной пальпации. Количество остаточной жидкости после каждого промывания матки не должно превышать 10% введенной. Собранную в цилиндр промывную жидкость отстаивают в течение 20-30 мин, чтобы зародыши опустились на дно. Затем верхний слой жидкости (850—900 мл) удаляют, а нижний слой порционно разливают в чашки Петри и исследуют макро- и микроскопически в больших часовых стеклах под бинокулярной лупой при 10-—15-кратном увеличении. Найденных зародышей оценивают морфологически. Зародыши с признаками дегенерации, уродства и недоразвития выбраковывают, пригодные для трансплантации при помощи шприца (1 мл) и катетера переносят в стерильную чашку Петри со средой для трансплантации. В течение 1-2 мин зародыш отмывают и переносят во вторую чашку Петри, где хранят до момента трансплантации. Эффективность вымывания без индукции у кобылы-донора суперовуляции достигает 59-80%, у хронически бесплодных кобыл — 30%. В качестве среды для вымывания обычно используют жидкость Дюльбекко, обогащенную 1% инактивированной фетальной бычьей сывороткой, для кратковременного хранения — Ham’ Е10, после ее предварительного насыщения в течение 3—5 мин газовой смесью, содержащей 90% No, 5% О, и 5% СО», и последующего добавления к ней 10% инактивированной фетальной бычьей сыворотки или сыворотки новорожденного теленка, пенициллина (1000 ЕД/мл) и стрептомицина (100При мкг/мл).необходимости транспортировки зародышей на большие расстоянияОптимальныеих замораживают, результаты получают прино они плохо замораживании шестидневныхпереносят замораживание. зародышей лошадей. Первый жеребенок от пересадки замороженно-оттаянного зародыша получен в Японии (Yamomoto У. et al., 1982). Эффективность такой трансплантации низкая и не превышает 20% (Bruyas J.F. иОтборреципиентов.Вкачествереципиентовиспользуютздоро- вых кобыл в возрасте 3-15 лет с хорошо развитой молочной железой, без какой-либо патологии родового канала и не имевших осложнений в период беременности, родов или в послеродовом периоде и проявляющих в период полового сезона регулярные и нолноценные половые циклы.
