al
промывают последовательно три-четыре раза 1 л специальной среды и собирают в цилиндр объемом несколько свыше 1 л. Удаление промывочной жидкости из рогов и тела матки контролируют методом трансректальной пальпации. Количество остаточной жидкости после каждого промывания матки не должно превышать 10% введенной. Собранную в цилиндр промывную жидкость отстаивают в течение 20-30 мин, чтобы зародыши опустились на дно. Затем верхний слой жидкости (850—900 мл) удаляют, а нижний слой порционно разливают в чашки Петри и исследуют макро- и микроскопически в больших часовых стеклах под бинокулярной лупой при 10-—15-кратном увеличении. Найденных зародышей оценивают морфологически. Зародыши с признаками дегенерации, уродства и недоразвития выбраковывают, пригодные для трансплантации при помощи шприца (1 мл) и катетера переносят в стерильную чашку Петри со средой для трансплантации. В течение 1-2 мин зародыш отмывают и переносят во вторую чашку Петри, где хранят до момента трансплантации. Эффективность вымывания без индукции у кобылы-донора суперовуляции достигает 59-80%, у хронически бесплодных кобыл — 30%. В качестве среды для вымывания обычно используют жидкость Дюльбекко, обогащенную 1% инактивированной фетальной бычьей сывороткой, для кратковременного хранения — Ham’ Е10, после ее предварительного насыщения в течение 3—5 мин газовой смесью, содержащей 90% No, 5% О, и 5% СО», и последующего добавления к ней 10% инактивированной фетальной бычьей сыворотки или сыворотки новорожденного теленка, пенициллина (1000 ЕД/мл) и стрептомицина (100При мкг/мл).необходимости транспортировки зародышей на большие расстоянияОптимальныеих замораживают, результаты получают прино они плохо замораживании шестидневныхпереносят замораживание. зародышей лошадей. Первый жеребенок от пересадки замороженно-оттаянного зародыша получен в Японии (Yamomoto У. et al., 1982). Эффективность такой трансплантации низкая и не превышает 20% (Bruyas J.F. иОтборреципиентов.Вкачествереципиентовиспользуютздоро- вых кобыл в возрасте 3-15 лет с хорошо развитой молочной железой, без какой-либо патологии родового канала и не имевших осложнений в период беременности, родов или в послеродовом периоде и проявляющих в период полового сезона регулярные и нолноценные половые циклы.
Индукция и синхронизация полового цикла донора и реципиента. Для индукции и синхронизации полового цикла у донора и реципиента кобылам применяют синтетический прогестаген или альтреногест (рис. 2.13), ПгФ., или его синтетический аналог и хорионический гонаWOT POTME:
Индукция и синхронизация полового цикла у кобыл при помощи альтреногеста, ПгФ», или его синтетического аналога. Гормональную обработку проводят без учета стадии полового цикла. Препарат дают животным ежедневно с кормом в дозе 12,5 мл. Кобыле-донору препарат назначают в течение 15 дней, реципиенту — 16 дней. Лютеолитическую дозу ПгфФь», или его синтетического аналога донору инъецируют на 16-й день, реципиенту на 17-й день от начала гормональной обработки. Признаки половой охоты у кобыл диагностируют спустя 5 (4-6) дней после инъекции ПТФ»... По дате начала половой охоты и сроку овуляции преовуляторного фолликула решают вопрос об ускорении (синхронизации) овуляции при помощи хорионического гонадотропина (3000 МЕ) либо у донора, либо у реципиента. Для синхронизации полового цикла при помощи ПФ», или его аналога кобылам (донору и реципиенту) в лютеиновую фазу полового цикла (через 6-11 дней после овуляции) инъецируют лютеолитическую дозу этих препаратов. Инъекцию ПгФ,, или ero аналога реципиенту
| Донор | Детекция половой охоты | ||
|---|---|---|---|
| и | |||
| Альтреногест по 12,5 мл/сут теже | Tee |16-й | |5 дней РАЯ | поем Половая охота | |
| и | rites | Овуляция rs | |
| Реципиент | = | Детекция половой охоты | |
| у | $ | ||
| В течение 16 дней | РЕНИ день ow | [PP | [a oxora |
| 4 | 4 | ||
| Овуляция | nro, | Овуляция |
Рис. 2.13. Схема синхронизации полового цикла у кобыл-доноров и реципиентов при помощи альтреногеста, ПгФ,, или его аналога (Wade J.M., 1996)
осуществляют на один день позже. Половая охота наступает через 4- 6 дней, по дате начала половой охоты и динамике созревания преовуляторного фолликула решают вопрос об ускорении (синхронизации) овуляции при помощи хорионического гонадотропина либо у донора, либо у реципиента (Wade J.M., 1986). Пересадка зародыша. Пересадку зародышей реципиенту производят нехирургическим и хирургическим способами. i Нехирургический способ пересадки зародыша. Перенос зародыша осуществляют через цервикальный канал с помощью одноканального катетера, представляющего собой длинную полистироловою пинет+ ку (22 в). Катетер присоединяют к одноразовому полистироловому ширицу. При помощи шприца в канал катетера (пипетки) набирают: сначала 1 мл антисептического раствора, содержащего 10 тыс. ЕД пе* нициллина и 10 тыс. мкг стрептомицина, затем 0,25 мл воздуха, 0,5 мл кульгуральной среды без зародыша, опять 0,25 мл воздуха, 0,5 мл среды с зародышем, отобранным для трансплантации, далее 0,25 мл воздуха} 0,5 мл среды без зародыша, 0,25 мл воздуха и 0,5 мл культуральной среды. Такая последовательность необходима для обеспечения сохранности зародыша во время процедуры переноса и маркирования места его положения.
Инструмент передают технику для осуществления трансцервикального переноса зародыша в полость матки кобылы-реципиента. рону.Кобылу Половые фиксируют органы обмываютв станке. теплымХвост забинтовывают раствором 1% натрия и отводят бикарбо-в стодятната вои влагалищедезинфицируют. для дигитальногоРуку, одетуюраскрытияв полистироловую шейки маткиперчатку, и введенияввокатетера в канал шейки матки. Цервикальный канал проходят под ректальным контролем. Руку извлекают из влагалища и вводят в прямую. кишку для ректального контроля, проходят цервикальный канал и нажатием на поршень шприца осуществляют перенос зародыша в полость тела матки. Инструмент извлекают из половых органов, пипетку исследуют под бинокулярной лупой, чтобы убедиться, что зародьии перенесен в полость матки. Хирургический метод пересадки. Операция по пересадке зароды-_ шей реципиенту производится под общей анестезией, через боковой разрез брюшной стенки или по белой линии живота. Кобылам-реципиентам вводят 250 мг ксилазина внутривенно и 25 мг ацетопромазина. Область голодной ямки выбривают и обрабатывают антисептическими растворами. По месту разреза проводят инфильтрационную анестезию
