Продолжение · 3
При исследовании копытец, обращали внимание на их состояние, целосность, наличие деформаций, при этом соспоставляли параметры исследуемых копыт с параметрами правильного копыта грудных и тазовых конечностей: учитывали соотношение зацепной части копытца и мякиша, угол зацепной части копытца, степень отрастания, деформации.
Исследование копытец проводили в состоянии покоя и на приподнятой и зафиксированной конечности.
В состоянии покоя на конечности определяли:
- величину и форму копытец, обращая внимание на различие копытец одной и той же конечности, характер деформации (возможна связь с характером постановки конечностей или какой либо патологией) (рисунок 1);
- состояние рога каймы и копытцевых стенок (гиперплазия эпидермиса каймы, трещины и расседины венечного рога, кольчатость рога, шелушение, распад и другие дефекты рога);
- состояние кожи и мягких тканей, прилежащих к копытцам (раны, наличие тилом, припухание венчика, наполнение выворотов суставов, наличие свищей и т.п.).
На приподнятой и зафиксированной конечности определяли :
- состояние подошвы, мякишей, белой линии, подошвенных краев копытцевых стенок (рисунок 2),
- характер отрастания и стирания рога обоих копытец одной и той же конечности (различия могут быть обусловлены постановкой или заболеванием одного из копытец) (рисунок 3),
- состояние кожи межпальцевого свода (рисунок 4).
При этом нельзя упускать из виду: механические повреждения копытец (трещины, расседины), наличие инородных предметов на подошве, патологий в виде пододерматитов, ламинитов, наминок, отделения рога стенки от рога подошвы, гниение рога мякиша, эрозийных и язвенных поражений, ран подошвы, мякиша и кожи межпальцевого свода.
Местные исследования гнойно-некротического очага проводили по общепринятой методике: учитывали локализацию, размеры, наличие припухлости и их консистенцию, при открытых процессах обращали внимание на наличие мертвых тканей, затоков карманов. Определяли характер грануляций (крупнозернистые, мелкозернистые, фунгозные, кровоточивые, некровоточивые, болезненные, безболезненные, дряблость, анемичность) и экссудата (количество, качество, цвет, запах, консистенция). Визуально определяли наличие эпителиального ободка. При описании гнойно-некротических процессов основы кожи копытец, кроме параметров грануляций и экссудата, учитывали степень отслоения копытного рога.
После первоначального осмотра устанавливали предварительный диагноз. Окончательный диагноз устанавливается после расчистки и обрезки копытец, в необходимых случаях после соответствующих лабораторно-диагностических исследований. Прогнозировали течение гнойно-некротического процесса и назначали соответствующее лечение.
2.1.2 Методика гистологического и гистохимического исследования биопсийного материала.
Материал для гистологических, гистохимических и электронно-микроскопических исследований получали методом биопсии с центра и периферии гнойно-некротического процесса. При спонтанной патологии, контролем служили кусочки кожи взятые с интактной области здоровой конечности. Биопсию проводили специально заточенной иглой Боброва с мандреном, для гистологических исследований использовали биоптатор собственной конструкции, позволяющий регулировать глубину проникновения в ткани, получать качественный биопсийный материал и минимально травмировать ткани. Кусочки тканей фиксировали в жидкости Карнуа, нейтральном формалине, срезы получали с парафиновых блоков и окрашивали гематокселином и эозином, пикрофуксином по ван-Гизону, содержание ДНК определяли по методу Фельгена, РНК-по Браше, гликогена – по Шабадашу.
2.1.3 Методика проведения электронной микроскопии биопсийного и патологического материала.
Для электронно-микроскопических исследований полученный материал фиксировали в 2% глутаровом альдегиде на фосфатном буфере 4 часа на холоду, затем трехкратно по 10 мин. промывали в фосфатном буфере. После фиксации имели возможность хранить материал в холодильнике в течение нескольких суток. Дофиксацию проводили в 1%-ном растворе ОSO4 (осмий) в течение 1,5 часа, затем проводили 3-х кратную промывку по 10 мин. в фосфатном буфере. Обезвоживание проводили в спиртах возрастающей крепости:
50 спирт – 10 мин;
70 спирт – 10 мин;
70 спирт с 1% уранилацитатом – от 5-12 часов на холоде;
80 спирт - 10мин;
96 спирт – 2 раза по 10 мин;
100 спирт – 3 раза по 10 мин;
Ацетон – 3 раза по 15 мин.
Пропитку тканей в эпоксидной смоле с аралдитом проводили в два этапа:
Аралдит + ацетон (1:1) – 2 часа;
2.Аралдит + ацетон (3:1) – 10 часов.
Заливку кусочков тканей в капсулы проводили с добавлением в смолу катализатора, при тщательном медленном в течение 30 мин перемешивании.Окончательную заливку проводили в термостатах в три этапа:
1.37 градусов – сутки;
2.48 градусов – сутки;
3. 56 градусов – сутки.
Электронно-микроскопические исследования проводили на трансмиссионных микроскопах TESLA BS 500 и JEM 100 S (Б.Уикли, 1974).
2.1.4 Методика проведения сканирующей электронной микроскопии биопсийного материала.
Для сканирующей электронной микроскопии материал фиксировали в жидкости Карнуа или нейтральном формалине. Обезвоживание проводили в спиртах возрастающей концентрации:
50 спирт – 20 мин;
60 спирт – 20 мин;
70 спирт – 20 мин;
80 спирт – 20 мин;
96 спирт – 20 мин;
100 спирт – 20 мин;
100 спирт + ацетон – 10 мин;
Ацетон – 1 час. Материал помещали в стеклянные тигли, с притертой крышкой.
Исследования проводили на сканирующем электронном микроскопе JXA – 6400, в вакуумном посте с золото – палладьевым напылением, толщиной до 1000 ангстрем в течение 4 мин.
3.1 Дифференциальная диагностика гнойно-некротических процессов копытец крупного рогатого скота.
Успешное лечение, благополучный исход и выздоровление животного возможно, только при ранней своевременной диагностике и правильном выборе лечебно-профилактических мероприятий.
Экономические потери при болезнях в области пальцев часто связаны с несвоевременной диагностикой, не всегда правильным выбором оперативного или консервативного лечения, рациональности лечения процесса вообще, с учетом объективной оценки течения заболевания в настоящий момент, его возможно, неблагоприятным исходом. Только при правильной диагностике и оценке течения процесса, возможно объективное прогнозирование его благоприятного исхода и определение рациональности лечения данного животного или его выбраковки. Неправильная оценка ситуации и принятие решения о лечении при неблагоприятном функциональном прогнозе, влечет за собой развитие негативных последствий экономического характера: потери мясной, молочной продуктивности, нарушение функции воспроизводства, прямых затрат на дополнительное содержание и лечение. Лечение в такой ситуации может быть оправданным возможным получением полноценного потомства, а также перевод острого гнойного процесса в хроническое течение с развитием фиброзных и оссифицирующих форм воспаления, при которых возможно некоторое восстановление потерянной продуктивности, связанное с заболеванием.
Своевременная и точная диагностика гнойно-некротических поражений в области пальцев у крупного рогатого скота возможна только при наличии научно обоснованной классификации болезней, с учетом анатомо-морфологических особенностей данной области, позволяющей прогнозировать течение этих процессов.
Исходя из многолетнего опыта работы по лечению и профилактике болезней в области пальцев у крупного рогатого скота, в откормочных и молочно-товарных комплексах республики Башкортостан, нами представлена следующая классификация этих болезней.
Мы предлагаем гнойно-некротические процессы в области пальцев разделить на четыре группы: а) болезни в области венчика, мякиша и кожи межпальцевого свода (раны, язвы, экземы, дерматиты, абсцессы, флегмоны); б) болезни основы кожи (пододерматиты, ламиниты, спонтанные язвы, язвы Рустерхольца); в) болезни суставов и сухожильно-связочного аппарата (артриты, тендиниты и тендовагиниты); г) болезни костей пальцев (периоститы, оститы, остеомиэлиты, некроз и кариес) (Таблица 1).
Основные этиологические факторы возникновения этих болезней, по нашему мнению, можно раздедлить на три группы: 1) травматические; 2) связанные с условиями содержания и кормления; 3) инфекционные (некробактериоз, ящур).
Таблица 1 Классификация болезней в области пальцев
Болезни
в
области
пальцев у
крупного
рогатого скота
1
Болезни в области венчика, мякиша, кожи межпальцевого свода(раны,язвы, экземы, дерматиты, абсцессы, флегмоны)
2
Болезни основы кожи копытца (пододерматиты, ламиниты, спонтанные язвы, язвы Рустерхольца).
4
Болезни костей пальцев (периоститы, оститы, остеомиэлиты, некроз, кариес).
3
Болезни суставов и сухожильно-связачного аппарата (артриты, тендениты и
тендовагиниты).
Многие гнойно-некротические процессы приведенные в данной классификации, часто имеют необратимый характер с неблагоприятным функциональным прогнозом, это прежде всего флегмонозные процессы, диффузные пододерматиты и ламиниты, фиброзные и оссифицирующие процессы, болезни связанные с поражением костей.
С учетом данной классификации нами проводились диагностика, дифференциальная диагностика, гнойно-некротических процессов в области пальцев у крупного рогатого скота, определялись лечебно-профилактические, оргнизационно-хозяйственные мероприятия, направленные на ликвидацию последствий этих болезней и снижение экономических затрат.
Основную массу гнойно-некротических процессов в области пальцев составляют раны, язвы, пододерматиты, которые являются пусковым механизмом для развития более тяжелых процессов.
Диагностика и дифференциальная диагностика ран не составляла особых трудностей, она проводилась с учетом этиологических и клинических признаков. Дифференцировали поверхностные и глубокие раны, проникаюшие – в суставы. По этиологическим признакам различали колотые, резаные, равные, рвано-ушибленные раны, случайный характер носили циркулярные раны в области венчика, вызванные сдавливанием тканей инородными предметами в виде колец (резиновых, проволочных, веревочных из шпагата, капрона, искусственых материалов).
Язвы дифференцировали как простые и прогрессирующие, часто по клиническому проявлению выявляли фунгозные язвы.
Набольшее затруднение вызывает диагностика и дифференциальная диагностика пододерматитов, она трубует определенных навыков и квалификации, уточняется при расчисте и обрезке копытец, при необходимости проводится диагностическое вскрытие подошвы.
По клиническим признакам и результатам расчистки, обрезки диагностического вскрытия, дифференцировали следующие пододерматиты: а) по течению – острые и хронические; б) по глубине поражения - поверхностные и глубокие; в) по характеру экссудата - асептические, гнойные, гнилостные; г) по локализации - ограниченные, диффузные и тотальные при эксунгуляции.
Воспаление основы кожи копытец при локализации в области подошвы отмечали как пододерматиты, в области боковой стенки – ламиниты.
На основании полученных клинических данных, после постановки диагноза и дифференциальной диагностики, прогнозирования течения процесса проводили соответсвующие опреративно-консервативные лечебные мероприятия.
3.1.1 Клинико-морфологические характеристики спонтанных гнойно-некротических поражений копытец крупного рогатого скота.
Использование современных методов контроля течения гнойно-некротических процессов в области пальцев у крупного рогатого скота, с применением гистологических, гистохимических исследований, трансмиссионной и сканирующей электронной микроскопии в сочетании с общеклиническими и гематологическими методами исследованиями, позволяют дополнить изучение течение этих процессов подобностями особенностей возникновения и заживления их на различных этапах. И позволяют анализировать состояние клеточных элементов, волокнистых структур и аморфного вещества соединительной ткани на различных стадиях заживления.
3.1.2 Клинические характеристики гнойно-некротических поражений копытец у крупного рогатого скота.
Из всех хирургических заболеваний в области конечностей у крупного рогатого скота, наиболее часто регистрируемыми болезнями в области пальцев на откормочных комплексах республики Башкортостан, являлись раны, язвы и пододерматиты. Основные факторы возникновения ран в области пальцев на откормочных комплексах связаны с условиями содержания животных на бетонных, решетчатых полах, конструкивных нарушениях их отдельных элементов, при индивидуальной уборке навоза с использованием скребков, лопат, когда наносятся случайные раны обслуживающим персоналом.
Клинические признаки и состояние ран определялись характером и степенью повреждения тканей, сроками их возникновения, которые колебались от нескольких суток до нескольких недель.
Кроватечение ран в области пальцев, бывает незначительным, даже при большом их зиянии, останавливается самостоятельно, это прежде всего связано с физиологическими особенностями свертываемости крови в области венчика и кожи пальцев.
В течение первых суток вокруг раны формировалась припухлость, которая вначале ограничивалась травмированным пальцем, которая затем по мере осложнений распространялась на соседний палец и циркулярно охватывала всю конечность и в некоторых случаях проксимально достигала до середины пясти или плюсны. Припухлость вначале тестоватой консистенции с последующей тенденцией к уплотнению. Местная температура и болезненность нарастают по мере развития осложнений, максимально местная температура повышалась до 4 градусов.
Первые признаки хромоты опирающейся конечности появлялись к концу первых суток, при осложнениях достигала максимума – 3-ей степени.
Наиболее частые осложнения при ранах развивались в виде абцессов, флегмон, артритов, пододерматитов.
При благоприятном течении раневого процесса первые признаки эпителизации и грануляционной ткани появлялись на 4-5 сутки, по мере очищения ран от мертвых тканей и появления полноценных грануляций, признаки воспаления носят более нормергический характер, припухлость, местная температура, болезненность, хромота уменьшаются. Полное очищение ран отмертвых при естественном заживлении завершается на 7-14 сутки, полное заживление на 25-35 сутки, в зависимости от характера и степени повреждения тканей.
Проведенные исследования показали, что возможно рання диагностика, также квалифицированная первичная хирургическая обработка ран, в некоторых случаях даже однократная, предовращают осложнения и способствуют их благоприятному заживлению в более краткие сроки.
Исследования проведенные в откормочных комплексах и учхозе БГАУ, показали, что наиболее распространенной хирургической патологией являются язвенные процессы.
Спонтанные язвы, диагнозцировали, как простые , прогрессирующие, по клиническому проявлению - фунгозные.
По локализации язвы отмечались в области венчика, мякиша кожи межпальцевого свода, боковой поверхности пальцев, рудиментов пальцев.
Первичными симптомами язвы в области пальцев у откормочных бычков, являлось появление хромоты, опирание на зацепную часть копытца больной конечности.
В последующем появлялась болезненная, горячая, тестоватой консистенции, нависающая над копытной стенкой припухлость. В зависимости от характера течения процесса признаки воспаления прогрессировали, припухлость, болезненность, хромота усиливались, естественное заживление, отмечатся кранйе редко, чаще развиваются осложнения, в виде абсцессов, флегмон, пододерматитов.
Формирование первичной язвы начиналось развитием ограниченного дерматита, выпотом слизисто-гнойного экссудата, с последующем образованием на поверхности кожи корочек, после удаления, которых обнаруживались эрозийно-язвенные поражения эпидермиса различной глубины, в некоторых случаях до сосочкового слоя дермы. Язвы были, как правило, неправильной округлой формы, различного диаметра. На поверхности обнаруживалось грануляции с небольшим количеством мертвых тканей. В большинстве случаев грануляции носили патологический характер, в некоторых случаях дряблые и анемичные, малоболезненные, некровоточивые, в других крупнозернистые, болезненные, кровоточивые.
В период формирования язвы общие изменения состояния животного, общая температура, пульс, дыхание, нарушение функции конечности носят умеренный характер. Эти изменения приобретают существенный характер при осложнениях.
Вторичные язвы образуются после механических повреждений кожи, царапин, ссадин, небольших поверхностных ран, этому по нашему мнению способствуют повышенная влажность, загазованность помещений, мацерация кожи. В последующем клиника и течение идентично язвам образовавшимся первично.
По частоте случаев второй хирургической патологией в области пальцев у крупного рогатого скота после язвенных процессов, являются пододерматиты.
Воспаление основы кожи подошвы мы дифференцировали как пододерматит, боковой стенки – ламинит.
Причинами развития пододерматитов являются раны подошвы, нарушение целостности роговой стенки при трещинах и рассединах, ушибах подошвы, осложнениях по продолжению при язвенных процессах.
Продолжение · 4
Первоначальными клиническими признаками развития пододерматита являются хромота, значительное повышение местной температуры, развитие припухлости, усиление пульсации сосудов больного пальца, болезненность. Явно выраженные клинические признаки отмечаются при остром течении процесса. При хронических пододерматитах наиболее выраженными клиническими признаками являются - нарушение функции конечностей и деформация больного пальца (рис.8).
Причинами деформаций копытец при хронических пододерматитах, по нашему мнению, является нарушение процесса рогообразования и отсутствие нагрузки на больное копытце, так как животное старается не опираться на больной палец, что исключает его естественное стирание. А так как процесс может продолжаться многие месяцы, то отмечается явное несоответствие пропорций здорового и больного копытца.
При исследовании деформированных копытец часто устанавливаются дефекты копытного рога в виде трещин, выявляются щели в подошвенной части и медиальной стенки копытца, образовавшиеся в результате отслоения копытного рога от основы кожи.
В некоторых случаях при внешнем визуальном осмотре деформированных копытец никаких нарушений целостности копытного рога не отмечаются. Но при диагностической расчистке и обрезке, в значительно утолщенной подошве, обнаруживаются в несколько этажей щелевидные полости, с серо-коричневыми остатками засохшего экссудата, чешуйчатой формы.
По нашему мнению, эти полости образуются при обострении хронически протекающего пододерматита, в острый гнойный поверхностный пододерматит, с отслоением рога подошвы от основы кожи, и образования полости заполненной гнойным экссудатом, в последующем течение процесса нормализуется, происходит регенерация рога подошвы, экссудат рассасывается, в результате этого в полости сохраняются остатки гноя, окрашенные пигментами рога.
При наличии дефекта копытного рога, восстановление его происходит очень медленно, на этом фоне, даже относительно медленный рост грануляционной ткани, через некоторое время приводит к развитию фунгозных грануляций. Которые в последующем препятствуют восстановлению дефекта. В связи с этим при лечении пододерматитов одним из принципов является регуляция роста грануляций
3.1.3 Гистологические и гистохимические показатели гнойно-некротических поражений копытец у крупного рогатого скота.
Материал для гистологических исследований получали с центра или периферии язв. При гистологическом исследовании пораженных тканей в области венчика установили, что в центре язвы эпидермис имел признаки акантоза и сохранялся только на небольших участках поверхности кожи. Количество клеток эпидермиса с признаками кариопикноза и кариолизиса (рис.5) увеличивалось в поверхностных слоях. Между клетками зародышевого и базального слоя выявляли пространства и щели, зародышевые клетки имели зернистую цитоплазму.
Поверхностный слой эпидермиса расслоен, приобретает эозинофильные свойства. Более глубокая часть рогового вещества напротив базофильна, с выраженными фуксинофильными свойствами, но тоже с многочисленными щелями между клеточными слоями. Таким образом, наблюдается гиперкератоз. Светлый слой с эозинофильными свойствами, также имеет многочисленные щели.
Зернистый слой характеризуется наличием большого количества погибших пикнотизированных клеток, наряду с клетками имеющие крупные зерна рогового вещества.
В шиповидном слое также относительно много клеток с пикнотичными ядрами. Клетки базального слоя с крупными светлыми ядрами и крупными ядрышками. Ядра расположены эксцентрично, они чаще несколько вытянутой формы. Отмечается наличие фигур амитоза. Необходимо отметить, что шиповидный слой относительно тонкий.
Видимо дифференциация, и ороговение клеток происходит относительно быстро, что также является признаком гиперкератоза.
Остальная часть поверхности была оголена и представлена дермой, инфильтрированной полиморфно-ядерными клетками (рис.6).
Соединительнотканные волокна, расположенные ближе к поверхности, находились в состоянии мукоидного набухания, в этих участках развивался гиалиноз (рис.7).
В более глубоких слоях инфильтрация исчезала, но разволокнение, отеки и декомплексация соединительной ткани сохранялись (рис.8).
Дерма непосредственно под эпидермисом (сосочковый слой) хорошо кровоснабжается. Кровеносные сосуды были расширены и заполнены кровью, в стенках их выявлялись фиброзные изменения (рис.9), отмечали кровоизлияния. То же время сосуды микроциркулярного русла были спавшимися, выявляли много дегранулированных тканевых базофилов.
Сосочковый слой также обильно инфильтрирован полиморфно-ядерными лейкоцитами, юными клетками соединительной ткани, моноцитами, гистиоцитами, лимфоидными клетками (рис.10). В сетчатом слое они располагаются вокруг кровеносных сосудов (рис.11).
В глубоких слоях дермы структура тканей была близкой к нормальной, тогда как потовые железы кистозно изменены.
На препаратах окрашенных по Ван Гизон хорошо выражен эпидермис, в разной степени сохранности, окрашивающийся пикриновой кислотой в желтый цвет, кровеносные сосуды – в желтый цвет, коллагеновые волокна окрашиваются фуксином в красный цвет. В поверхностных слоях дермы наблюдаются набухшие разрушающиеся коллагеновые волокна,с обильной инфильтрацией между ними. В средних слоях дермы эти диструктивные изменения волокон соединительной ткани сохраняются, уровень инфильтрации уменьшается. Кровеносные сосуды фиброзно изменены. В более глубоких слоях структура соединительной ткани сохраняется: волокна приблизительно одинакового диаметра, идут в одном направлении с умеренным количеством фибробластов и фиброцитов.
На некоторых препаратах, в глубоких слоях дермы, в приграничных областях здоровых и пораженных тканей, выявляются слабо выраженные явления регенерации в виде появления юных круглоклеточных элементов соединительной ткани – фибробластов и фиброцитов.
На периферии язвы при гистологическом исследовании установили, что роговой слой утолщен, неравномерной толщины, окрашен по-разному. При переходе на поверхность язвы роговой слой истончается, в нем появляются вакуоли, кровоизлияния, а затем и клеточный инфильтрат. Он исчезает и эпидермис, содержащий много гибнущих клеток, также постепенно истончается. Эпидермис и коллагеновые волокна в состоянии отека и разволокнения .
В периферических частях язвы эпидермис глубоко проникает в дерму - акантоз, и характеризуется следующими признаками: обильно инфильтрирован полиморфноядерными лейкоцитам, располагающимися между эпителиальными клетками диффузно, ближе к поверхности кожи. Эпителиоциты хорошо сохранены, межклеточные пространства встречаются редко. Потовые железы кистозно изменены. Сосочковый слой дермы обильно инфильтрирован полиморфноядерными лейкоцитами, юными клетками соединительной ткани, моноцитами, гистеоцитами. В сетчатом слое инфильтрация выражена вокруг кровеносных сосудов.
Альтерация выражена слабо, она проявляется в виде некроза и дистрофии эпителиальных клеток и фибробластов. В большей степени выражены элементы клеточной инфильтрации. В приграничной области появляются элементы пролиферации в виде юных фибробластов.
Гистохимическими исследованиями установили, что в центре язвы и на периферии реакция по Фельгену и Браше была слабо положительной, реакция на гликоген – отрицательная.
гиалиноз соединительной ткани. Окраска по Ван Гизон.
Ок.10. Об.8.
Ок. 10. Об. 8.
Ок.10.Об.8.
инфильтрированы гистиоцитами и лимфоидными клетками.
Окраска гематоксилином и эозином. Ок. 10.Об.20.
сосудов. Окраска гематоксилином и эозином. Ок.10.Об.8.
Таким образом, гистологические изменения при язвенных процессах характеризуются дистрофическими и некротическими процессами в эпидермисе и дерме, в центре язвы разрушение эпидермиса явно выражено, на периферии происходит его истончение, в сохранившихся участках эпидермиса отмечается акантоз, гиперкератоз, клетки эпидермиса находятся в состоянии кариопикноза и кариолизиса, деструкция клеточных элементов выявляется во всех слоях эпидермиса, отмечается его расслоение, образование щелей и пространств. Собственно дерма инфильтрирована полиморфноядерными клетками. Соединительнотканные волокна в состоянии мукоидного набухания и гиалиноза. В глубоких слоях дермы структура тканей близка к норме, но инфильтрация, отек разволокнение тканей сохраняется.
Гистологические изменения после заживления язвы.
После заживления язв гистологически было установлено, что поверхность кожи покрыта роговым слоем, который умеренно развит и разделен на две зоны поверхностную чешуйчатую и светлую зоны (рис.12).
Базофильный и фуксинофильные зоны отсутствуют.
Далее в классическом порядке расположены эпителиальные клетки, переходящие в дерму.
В роговом слое имеются глубокие инвагинации не покрытые роговым веществом. Инвагинации заполнены роговым веществом в виде чешуйчатых закрученных роговых чешуек. Кроме этого на поверхности эпидермиса образуются микроскладки .
Эпидермис в некоторых участках источен и близко к поверхности подходят сосочки дермы. В базальном слое относительно много меланоцитов. В сосочковом слое очень развиты кровеносные сосуды. Они сильно извиты, с расширенным просветом, крови не содержат (13).
Сетчатый слой дермы фиброзно изменен, содержит толстые фуксинофильные волокна, с очень небольшим количеством клеток. Фактически напоминает рубец. Много меланина, там где его не должно быть, например, вокруг потовых желез, сосуды фиброзно изменены, с утолщенными стенками.
Таким образом, при заживлении язвы, происходит восстановление компонентов эпидермиса и дермы, в начальном этапе отмечается их некоторое несовершенство - инвагинации, складчатость. Положительным моментом является интенсивный рост кровеносной системы, формирование волокнистого компонента дермы.
Ок.10.Об.3.
Окраска гематоксилином и эозином. Ок.10. Об.3
Гистологические изменения при пододерматите.
В начальной стадии развития воспаления пододерматита в листочках основы кожи и листочках роговой стенки отмечается отек и разволокнение клеточных элементов и волокнистых структур (рис.14).
Следующим этапом развития воспаления является образования полости и скопления в ней экссудата (рис15), что в последующем приводит к отслоению роговой стенки (рис.16). При хроническом течении процесса, которое может продолжаться несколько месяцев, процесс распространяется на копытцевую кость и завершается его некрозом (рис.17).
Изменения в роговой стенке характеризуются следующими признаками: роговое вещество в состоянии дистрофии, эпидермис в различной степени сохранности (рис.18), в местах сохранения инфильтрирован полиморфноядерными лимфоцитами, сильно разволокнен. Кератогеалин имеет базофильную окраску, что свидетельствует об изменении его биохимических свойств и соответственно физико-химических.
листочков в состоянии отека и разволокнения. Окраска гематокселином и эозином.Ок.10.Об.3
основы кожи. Окраска гематоксилином и эозином.
Ок.10. Об.8.
Ок.10.Об.3.
Окраска гематоксилином и эозином. Ок.10.Об.8.
клетки в состоянии гидропической дистрофии.
Окраска гематоксилином и эозином.
Ок.10.Об.20.
коллагеновых волокон и кровоизлияния.
Окраска гематоксилином и эозином. Ок.10.Об.20
кровеносных сосудов. Окраска гематокселином и эозином. Ок.10. Об.8.
Зернистый слой эпидермиса хорошо выражен только там, где сохранено роговое вещество, но даже здесь много клеток в состоянии вакуолизации и гидроптической дистрофии (рис.19). Шиповатый и базальный слои в некоторых участках относительно хорошо сохранены, хотя в шиповатом слое имеются относительно крупные щели и вакуолизированные эпителиоциты. В целом рост эпителия нарушен, что проявляется в виде акантоза .
Гистологические изменения воспаления основы кожи характеризуются следующими признаками - сосочковый слой после разрушения эпидермиса покрыт густым обильным гнойным экссудатом, содержащим нейтрофилы, эритроциты, гнойные тельца, а также слизь, имеющую волокнистое строение и выраженные базофильные свойства.
Инфильтрат проникает по соединительнотканным сосочкам дермы глубоко в сетчатый слой дермы. Хорошо видны кровоизлияния, гиперемия, очаги разволокнения соединительной ткани (рис.20).
В дерме много сосудов радиально направляющихся к поверхности. Характерно наличие толстых пучков коллагеновых волокон идущих по направлению к поверхности и перпендикулярно к ним расположенных более тонких волокон образующих сеточку, между ячейками, которых лежат клеточные элементы.
Повсеместно отмечается отек соединительной ткани, кровеносные сосуды расширены, не содержат кровь, а вокруг них клеточный инфильтрат тем обильней, чем ближе к поверхности.
В сетчатом слое выражено мукоидное набухание коллагеновых волокон дермы и гиалиноз стенок кровеносных сосудов (рис.21). Они становятся базофильны, неравномерно окрашены, различной толщины.
Это хорошо видно при окраске по Ван Гизон.
При благоприятном асептическом течении воспаления он носит ограниченный характер, экссудат рассасывается, нормализуется рост эпидермиса, при этом происходит восстановление в полном объеме его клеточных элементов и волокнистых структур. Очаг воспаления сохраняется в виде щели, частично заполненной остатками гноя, чешуйчатой формы, светло коричневого цвета, придающему ему пигментами рога.
Таким образом, гистологические изменения при пододерматите характеризуются отеком и разволокнением эпидермиса и соединительной ткани основы кожи. Изменения эпидермиса проявляются в виде его разрушения и дистрофии, в местах его сохранения отмечается инфильтрация полиморфноядерными клеточными элементами. В соединительнотканном компоненте основы кожи копытец при пододерматите отмечаются гиперемии, инфильтрация, кровоизлияния, отек разволокнение и мукоидное набухание коллагеновых волокон. В результате воспалительной реакции происходит отслоение копытного рога от основы кожи копытец
3.1.4 Морфологические показатели спонтанных гнойно-некротических поражений копытец крупного рогатого скота с использованием электронной и сканирующей микроскопии.
Биопсийный материал для исследований брали с периферии и центра язвы. Контролем служили кусочки кожи, взятые отступя от края язвы на 2см и интактной области противоположной здоровой конечности.
Электронно-микроскопическими исследованиями при язвах в области пальцев у крупного рогатого скота установлены изменения всех соединительнотканных компонентов кожи – клеточных, волокнистых структур и межуточного вещества.
Электронно-микроскопические изменения на периферии язвы.
Исследованиями установлено, что на периферии язвы наиболее характерными изменениями клеток являются деструктивные изменения, характеризующиеся их кариопикнозом, кариолизисом, фрагментацией, в цитоплазме отмечаются признаки некроза, плазмолемма в некоторых клетках отсутствует. В некоторых клетках содержатся гранулы различной электронной плотности, в результате дегрануляции образуются вакуоли, содержание цистерн ГЭР и свободных рибосом незначительное, в некоторых цистерны ГЭР расширены. В межклеточном веществе выявляются микробы различной формы и размеров.
Сканирующей электронной микроскопией в эпидермисе установлено: мацерация, отек, разволокнение и отслоение эпидермиса от дермы (рис.22).
Как отмечают Кузнецов С.Л. и соавт. (2002), (по Котовскому Е.Ф.) из эпителиальных клеток 85% составляют кератиноциты, 10%-меланоциты, остальные – внутриэпителиальные макрофаги (клетки Лангенгарса) и осязательные клетки Меркеля.
Продолжение · 5
В связи с этим, в эпидермисе наиболее характерные изменения наблюдали в кератиноцитах, которые определялись различным их морфофункциональным состоянием.
В исследованных кератиноцитах отмечали наличие крупных ядер с сильно измененной формой, у некоторых по периферии образуются выступы в виде лопастей. Ядра обычно светлые, состоящие преимущественно из эухроматина, в кариоплазме много мелкозернистого материала из рибосом. Эти изменения отражают очень высокий уровень синтеза РНК (рис.23). Вокруг ядра образуются светлые зоны. Наблюдается расширение перинуклеарных пространств. Выявляются органеллы общего значения, пучки тонофибрилл, обилие свободных рибосом. В таких клетках ярко выражены регенеративные процессы, однако сохраняются и изменения реактивного характера – расширение перинуклеарных пространств и наличие бесструктурных участков.
Некоторые кератиноциты имели крупные ядра, в которых располагаются различной величины ядрышки, количество их может быть от одного до четырех, с обилием РНП гранул, что свидетельствует об активизации синтеза РНК (рис. 38). Количество эухроматина различно, может быть его преобладание, в этом случае гетерохроматин располагается в виде тонкой линии вдоль кариолеммы. Иногда в кератиноцитах находятся элементы комплекса Гольджи, в метахондриях матрикс просветлен.
В некоторых кератиноцитах, расположенных в зернистом слое, большая часть цитоплазмы заполнена тонофибриллами, часть расположена, рассеяно, часть образует пучки различного диаметра, имеет зерна кератогеалина, при этом встречаются участки деструкции цитоплазмы.
В центре некоторых клеток содержатся остаточные тельца – третичные лизосомы, заполненные пузырьками гранулами и мембранами. Имеются участки цитоплазмы, где структура нарушается и содержится гомогенный материал средней электронной плотности, кроме того, имеются вакуоли разных размеров, в митохондриях хорошо представлены кристы, что является признаком интенсивности синтеза АТФ (рис.24). Некоторые кератиноциты заполнены свободными рибосомами, в митохондрии имеют плотный матрикс, видимы кристы, размеры рибосом укрупняются, что является свидетельством активного синтеза белка.
Последовательное исследование кератиноцитов позволило отследить стадии формирования цитоскелета, что определяется характером свободных рибосом, пучков тонофибрилл и митохондрий. Наличие пучков тонофибрилл и их тонкое строение свидетельствует об интактном состоянии исследованных участков. Активное состояние митохондрий выявляет содержание зернистого материала и крист.
На некоторых микрофотографиях выявляются контакты кератиноцитов с другими клетками, при этом в кератиноците отмечается наличие тонофибрилл, расположенных в различных направлениях, в митохондриях имеются рибосомы с кристами. В контактируемой клетке содержится большое количество волокнистого материала, между филаментами располагается большие скопления рибосом. Митохондрии гипертрофированы и осмиофильны, с повышенной плотностью, имеются рибосомы и кристы. В некоторых кератиноцитах особенно привлекает внимание митохондрии с большим количеством крист, внутри митохондрии имеются рибосомы. В отдельных митохондриях имеются просветленные участки, которые образуются в результате вакуолизации матрикса. Полисомы располагаются свободно, тонофибрилллы образуют небольшие пучки на периферии клетки.
Иногда отмечаются контакты кератиноцитов с группой клеток - макрофагом и тучной клеткой (рис.25). В этом случае в кератиноците тонофиламенты объединяются в тонофибриллы, в цитоплазме имеется несколько вакуолей и множество свободных рибосом. В макрофаге гетерохроматин в небольшом количестве, располагается у кариолеммы, в кариоплазме имеются РНП гранулы. В цитоплазме много митохондрий с хорошо развитыми кристами и расширенные цистерны ГЭР. Рядом с ядром располагаются мембраны, микропузырьки комплекса Гольджи. Кроме этого в клетке выявляются осьмиефильные образования похожие на микробы. В ядре тучной клетки больше эухроматеина, чем гетерохроматина. Гранулы располагаются относительно свободно, на периферии их меньше, форма гранул неправильная, имеются светлые полосы, пузырьки образовавшиеся в результате дегрануляции. В тоже время надо отметить, что наряду с клетками находящимися в относительно удовлетворительным морфофункциональном состоянии, встречаются кератиноциты, в которых отмечается кариопикноз, кариолизис, фрагментация, в цитоплазме наблюдается состояние некроза, плазмолемма отсутствует. В некоторых подобных клетках содержатся гранулы различной электронной плотности, вакуоли, количество цистерн ГЭР и свободных рибосом незначительное.
Ув. 100. Мм. х 50. 39мм
Ув. 28000.
хорошо выражены кристы.
Ув. 20000.
Ув.28000
Деструктивные изменения в кератиноците характеризуются тем, что клетка имеет ядро с очень сильно измененной формой, по периферии которого образуются выступы в виде лопастей. Ядрышко располагается эксцентрично, перинуклеарные пространства расширены, в кариоплазме находятся РНП гранулы. Цитоплазма также характеризуется значительными деструктивными изменениями, имеется группа остаточных телец, гранулы рибосом находятся на расстоянии друг от друга, в этой связи клетка имеет светлый вид. После кератиноцита другой клеткой наиболее часто встречающейся на периферии язвы в области пальцев у крупного рогатого скота является фибробласт.
Фибробласты на периферии язвы находятся в различном морфофункциональном состоянии, в микрофотографиях они встречаются, единично, группами, а также в контакте с другими клетками
При их исследовании некоторых микрофотографий отмечается, что фибробласты имеют сложную поверхность, из-за отростков различной длины и формы. Ядра активны морфофункционально, гетерохроматина мало, ядрышки приобретают различную форму и размеры. В кариоплазме имеются РНП гранулы, отмечаются изгибы кариолеммы и выросты в связи с углублением цитоплазмы в ядро.
В некоторых фибробластах отмечается содержание свободных рибосом, цистерн ГЭР, митохондрий, при этом цистерны ГЭР сильно расширены, содержат материал средней электронной плотности, митохондрии набухшие, с укороченными кристами, эти изменения свидетельствуют о функциональном напряжении клетки (рис.27).
При исследовании двух рядом расположенных фибробластов, выявляется, что от цитоплазмы образуются отростки различной длины. В осмиофильном фибробласте комплекс Гольджи с значительной плотностью, в митохондриях имеются хорошо развитые кристы, что свидетельствует о хорошем, энергетическом обмене. В клетке низкой электронной плотности большое число цистерн гранулярного эндоплазматического ретикулума, с материалом средней электронной плотности. В межклеточном пространстве располагается хлопьевидный материал, коллагеновые волокна отсутствуют.
В других случаях, при контактах двух фибробластов отмечается, что у одного из них поверхность сложной формы, оно содержит большое количество гетерохроматина. В цитоплазме имеются полисомы, цистерны ГЭР, митохондрии, комплекс Гольджи, но плазмолемма слабо различима, в части цитоплазмы число органелл уменьшается. В другом фибробласте цистерны ГЭР сильно расширены, между ними наблюдается обилие полисом. В цитоплазме имеется участок, содержащий фрагменты коллагеновых волокон.
В некоторых случаях при контакте двух фибробластов, отмечается обилие рибосом, что свидетельствует об интенсивном синтезе белка. В митохондриях наблюдается укорочение крист, что определяет напряженную функциональную деятельность. В тоже время в отдельных клетках наблюдаются очаги некроза, которые отделяются от клетки, поэтому в межклеточном пространстве находятся фрагменты цитоплазматических отростков с деструктивным материалом. Полученные данные показывают, что в данном участке преобладают компесаторно-приспособительные процессы (рис. 28).
Кроме этого при исследовании некоторых групп фибробластов установили, что увеличение количества гетерохроматина указывает на снижение синтетической активности. У некоторых клетки имеют небольшой объем цитоплазмы, с цистернами ГЭР, рибосомами и фрагментами иммунных комплексов с четкими контурами, с расширенными перинуклеарными пространствами, что свидетельствует о напряжении функциональной деятельности. Здесь же в поле зрения наблюдаются фиброциты с узким ободком цитоплазмы, окруженные пучками коллагеновых волокон. В некоторых случаях рядом с фибробластами находились макрофаги, с большим количеством митохондрий, вакуолей, рибосом. Полученные данные свидетельствуют о том, что на периферии язвы формируются элементы клеточного и иммунного барьера, но в тоже время некротические и дистрофические процессы активно проявляются.
В ряде случаев отмечали контакты фибробластов с другими клетками, в частности при контакте с тучной клеткой у фибробласта выявляли ядро неправильной формы, образовавшееся в результате впячивания цитоплазмы, хорошо видимы ядерные поры, больше эухроматина, перинуклеарные пространства расширены. В цитоплазме имеются свободные рибросомы, цистрерны ГЭР умеренно расширены, в митохондриях кристы отсутствуют, имеется комплекс Гольджи. В данной клетке наблюдаются изменения реактивного характера. В тучной клетке наблюдается фрагментация ядра. В цитоплазме множество гранул плотно расположенных друг к другу, большинство гранул низкой электронной плотности. Место контакта имеет повышенную электронную плотность.
При исследовании фибробластов с периферии язвы установили, что они находятся в различной степени дифференциации.
В юных фибробластах хорошо развиты цистерны ГЭР и аппарат Гольджи (рис. 29).
Кроме этого при гнойно-некротических процессах встречаются миофибробласты, по нашим данным эти клетки характеризуются наличием свободных рибосом, митохондрий, цистерн ГЭР, протофиламенты располагаются преимущественно по периферии. В митохондриях кристы развиты хорошо, полисомы образуют скопления и имеют высокую электронную плотность. Цитоплазма, таким образом, разделена на зоны с высоким уровнем синтеза белка и зоны с протофиламентами.
Наряду с этим, в данной зоне встречались миофибробласты с значительными деструктивными изменениями, при этом наиболее сильные изменения отмечались в ядре, изменения касались и кариолеммы, внутренний листок его различим, отмечается наличие широкой бесструктурной зоны между гетерохроматином и наружным листком кариолеммы, наблюдается кариолизис отдельных участков ядра (рис.30). В цитоплазме содержатся полисомы, миофиламенты, митохондрии. Таким образом, мы наблюдаем последовательность некробиотических изменений в клетке.
На периферии язвы, кроме кератиноцитов и фибробласт, выявляли макрофаги, тучные клетки, нейтрофилы, сосудистые клетки, клетки крови.
Исследованные макрофаги находились в различном морфофункциональном состоянии. В некоторых макрофагах отмечали, что ядро изменено и утолщено, с большим количеством гетерохроматина и в состоянии кариопикноза, в цитоплазме содержится много свободных рибосом, имеется небольшое количество цистерн ГЭР, в околоядерной области располагается группа остаточных телец. Наличие этих структур, можно рассматривать, как макрофаг – коллагеннокласт, в межклеточных пространствах находятся коллагеновые волокна. Клетка имеет удлиненную форму, в цитоплазме находятся фибриллярные структуры в продольных и поперечных разрезах.
Эндотелиоциты интенсивно осуществляющие синтез РНК, содержат очень крупное ядрышко, с большим количеством гранулярного материала, РНП гранулы равномерно размещены по кариоплазме. В ядре гетерохроматина очень мало, он располагается у внутреннего листка кариолеммы в виде узкой линии, перинуклеарные пространства расширены.
В других случаях выявляются молодые формы макрофагов, у которых отмечается обилие митохондрий с развитыми кристами, имеются умеренно расширенные цистерны ГЭР, от поверхности образуются небольшие цитоплазматические выросты, наблюдаются процессы фагоцитоза (рис.31).
При электронно-микроскопических исследованиях кровеносных капилляров, на периферии язвы установлено, что эндотелиальные клетки находятся в состоянии различного морфофункционального напряжения, в некоторых ядрах выявляется реактивное состояние, они образуют изгибы, ядрышки также неправильной формы, окружены большим количеством РНП гранул. Цитоплазма высокой электронной плотности, с большим количеством рибосом, обеспечивающих синтез белка. Митохондрии с уменьшенным содержанием крист. На люминальной и базальной поверхности стенки кровеносного капилляра образуются микроворсинки (рис. 32, 33). В других эндотелиоцитах ядра в активном морфофункциональном состоянии, гетерохроматин располагается на периферии, в кариоплазме много РНП гранул. Цитоплазма характеризуется высокой морфофункциональной активностью, содержит митохондрии, цистерны ГЭР, рибосомы, фагосомы, лизосомы и микропиноцитозные везикулы, тонофибриллярный материал находится на периферии.
Из клеток крови встречаются эритроциты, находящиеся как в сосудах, так и вне их, различной электронной плотности, иногда образуются их скопления, контактирующие с другими клетками, в которых хорошо развит белоксинтезирующий аппарат (рис.34).
При исследовании эритроцитов находящихся вне сосудов, вокруг них обнаруживается фибриллярный материал, образовавшийся в результате деструкции коллагеновых волокон, фибробласты, содержащие умеренное количество цистерн ГЭР и свободные полисомы, фрагменты фибробластов.
В межклеточном веществе различных участков дермы на периферии язвы обнаруживается деструктивный хлопьевидный материал, различной электронной плотности, с полным отсутствием коллагеновых волокон, на этом фоне в некоторых участках обнаруживаются микробы различной формы и размеров. У некоторых микробов центр более плотный, между плазмолеммой и центром образуется светлый ободок, на поверхности микроба имеются прикрепленные частицы (рис. 35). В некоторых участках выявляются коллагеновые с хорошо сохранившейся структурой и поперечной исчерченностью.
Деструктивные изменения на периферии язвы характеризуются развитием зернистой дистрофии, о чем свидетельствуют скопления осмиофильных зерен в цитоплазматических отростках, эти отростки располагаются в материале средней и высокой электронной плотности, что указывает на фибриноидное набухание. Плотные структуры образуются при пикнозе ядра, окруженные расширенными перинуклеарными пространствами (рис.36).
В исследованных участках обнаруживается значительное количество клеток в состоянии кариопикноза и фрагментации, некротизированным участками цитоплазмы, и отсутствием плазмолеммы, но с сохранившимися вокруг коллагеновыми волокнами (рис.37).
Наряду с этим на периферии язвы выявляется значительное количество клеток сохраняющих активное морфофункциональное состояние, выполняющих функцию фагоцитоза деструктивного материала и микробов.
Таким образом, морфологические изменения на периферии язвы характеризуются некротическими и деструктивными изменениям клеточных элементов, волокнистых структур и внеклеточного матрикса. В тоже время в некоторых участках сохраняется относительно высокая активность этих структур, в перифериических участках формируются элементы клеточного и иммунного барьера.
Ув. 48000
Ув. 28000
Ув. 28000.
митохондрий, умеренно расширенными цистернами ГЭР, образующая цитоплазматические отростки, с признаками фагоцитоза.
Ув.48000
Ув.16000.
10Мм. Х900. 39мм.
У.20000.
