Продолжение · 6
Ув. 28000.
Электронно-микроскопические изменения в центре язвы.
Дистрофические и некротические изменения в центре язвы выражены более значительно.
Количество клеток находящихся в состоянии некроза в центре язвы встречается более часто, в них отмечается наличие остаточных телец, расширение перинуклеарных пространств и цистерн ГЭР, в цитоплазме обнаруживаются различных размеров фагосомы, содержащие миэлиновые образования, являющиеся результатом деструкции мембранных органелл. Остальные органеллы имеют едва различимые контуры. Количество митохондрий незначительно. В некоторых клетках ядра фрагментированы, состоят из гетерохроматина, кариолемма и плазмолемма разрушены, в цитоплазме отмечается почкование и бесструктурные зоны, хлопьевидный материал. В клетках отмечается наличие микробов расположенных группами, отдельные контактируют с плазмолеммой клетки, в образовавшихся отростках клетки иногда содержится по несколько микробов, которые затем отторгаются от нее. Это, по нашему мнению, является отражением локального некроза (рис. 38).
В ряде клеток отмечается зернистая дистрофия. Отдельные клетки образуют причудливые выросты, с протофиламетами, фагосомами, рибосомами, характеризующиеся низкой электронной плотностью (рис. 39).
Ув. 36000.
Ув. 36000
Количество эпителиальных клеток в центре язвы, практически вследствие полного разрушения эпидермиса, значительно уменьшено, они также большей частью представлены кератиноцитами.
В сохранившемся эпидермисе встречаются кератиноциты с сильно развитым белок синтезирующим аппаратом, в митохондриях кристы небольшой длины, расположены в продольном и поперечном направлениях (рис. 40).
В некоторых участках между кератиноцитами хорошо выражены десмосомы, зерна кератогеалина, по периферии располагаются тонофибриллы, группы плотно расположенного мелкозернистого материала,другие органеллы отсутствуют. В некоторых кератиноцитах микробы располагаются в цитоплазме, в некоторых случаях микробы находятся в межклеточном пространстве, выявляются электронно плотные кокки и микробы удлиненной формы, некоторые лежат попарно, происходит размножение микробов (рис.41).
Выявляются контакты плотного типа между отдельными кератиноцитами, в этих участках вдоль плазмолеммы клеток располагаются микропиноцитозные везикулы, что свидетельствует об активном обмене с окружающим межклеточным веществом и клетками.
В этой зоне наиболее часто регистрируемыми клетками являются фибробласты и макрофаги.
Исследованные фибробласты, как правило, содержат крупное ядро, с небольшим количеством гетерохроматина и выраженными ядерными порами. В цитоплазме цистерны ГЭР расширены, между ними множество свободных полисом, в митохондриях отмечается небольшое количество крист и просветление матрикса, имеются фагосомы. За пределами клетки располагаются коллагеновые волокна.
В некоторых исследованных фибробластах, выявляется множество свободных полисом и протофиламентов, матрикс средней электронной плотности, кроме них располагаются цистерны причудливой формы и небольшое число лизосом. Рядом с фибробластом располагается тканевой базофил с осьмиофильными гранулами.
Имеются участки, где наблюдается активизация в ядрах фибробластов. Из-за фрагментации ядра оно приобретает причудливую форму, перинуклеарные пространства расширены, в цитоплазме, в цитоплазме обилие свободных полисом, другие органеллы отсутствуют. В некоторых фибробластах ядра имеют очень крупные ядрышки и обилие РНП гранулы, в цитоплазме содержатся цистерны ГЭР (рис.42). Среди исследованных фибробластов выявляются зрелые активно функционирующие формы, в их ядре содержатся крупные ядрышки, РНП гранулы, в цитоплазме отмечается обилие цистерн ГЭР и свободных рибосом.
Особый интерес представляют контакты фибробластов с другими клеточными элементами, чаще всего они происходят с макрофагами.
При этом в макрофаге отмечается обилие органелл – вакуоли, фагосомы, первичные лизосомы, на периферии располагаются гранулы различных размеров и электронной плотности, по нашему мнению образовавшиеся в результате зернистой дистрофии. В контактируемом фибробласте наблюдается обилие свободных полисом, обеспечивающих синтез белка и элементы комплекса Гольджи, митохондрии, набухшие с просветленным матриксом. В межклеточном пространстве находятся пучки коллагеновых волокон.
Кроме этого выявляются контакты фибробластов с тучными клетками. При этом в тучной клетке гранулы располагаются на расстоянии друг от друга, ядро представлено двумя фрагментами. В митохондриях отмечается образование мелких вакуолей, а цитоплазма образует небольшие отростки. В фибробласте, контактирующем, с тучной клеткой отмечаются диструктивные изменения – сильно расширены цистерны, митохондрии набухшие и вакуолизированы.
В свободно встречаемых тучных клетках, выявляются гранулы различных размеров и электронной плотности, плотно расположенные друг к другу, по периферии гранулы отсутствуют, в некоторых клетках начинается фрагментация ядра, кариолемма в отдельных участках отсутствует. Отмечается увеличение объема гетерохроматина, заканчивающегося, как правило, кариопикнозом. Вокруг тучной клетки находятся фибробласты, с хорошо развитым белок синтезирующим аппаратом.
В межклеточном веществе коллагеновые волокна располагаются на расстоянии друг от друга, вокруг них располагается большое количество мелкозернистого, иногда хлопьевидного материала, в некоторых участках коллагеновые волокна отсутствуют.
Кроме этого в межклеточном пространстве располагаются микробы: кокковые, палочковидные, неправильной формы, в некоторых отмечается снижение электронной плотности.
Электронно-микроскопическими исследованиями в центре язвы установлено активное состояние сосудистой системы капиллярного типа. Встречаются капилляры закрытого типа. Ядра эндотелиальной клетки в активном морфофункциональном состоянии, округлой формы, содержание эухроматина больше, множество РНП гранул. В кариолемме видны ядерные поры, поверхность ее имеет небольшие изгибы, перинуклеарные пространства расширены. В цитоплазме содержатся протофиламенты и свободные рибосомы и полисомы, отдельные из них располагаются на кариолемме. Благодаря наличию этих рибосом обеспечивается синтез белка и дальнейший рост капилляра. К стенке эндотелиоцита иногда прилегают осмиофильные цитоплазматические отростки, некоторые отростки отделены базальной мембраной и расположены на некотором расстоянии (рис. 43).
Таким образом, в центре язв в области пальцев у крупного рогатого скота отмечаются значительные некротические и дистрофические изменения в клеточных элементах, волокнистых структурах и аморфном веществе соединительной ткани.
В тоже время, в глубоких слоях дермы выявляются клеточные структуры и сосудистая система капилляров, находящиеся в активном морфофункциональном состоянии, выявляются элементы формирования клеточного барьера.
Ув 28000.
Ув. 36000
Ув. 28000
Морфологическая характеристика состояния кожи вокруг язв.
Морфологию кожи, изучали в кусочках тканей взятых отступя от края язвы на 2см.
В исследованном участке кожи определялись все виды клеточных элементов эпидермиса и дермы, в различном функциональном состоянии и дифференциации.
Прежде всего, выявлялись фибробласты, различной степени дифференциации. В малодифференцированных фибробластах, отмечали ядра в активном состоянии, в кариоплазме множество РНП гранул, цистерн ГЭР незначительное количество, различной степени расширения, содержание в цитоплазме рибосом и полисом, определялось степенью активности клеток, между которыми выявлялся тонковолокнистый материал, в митохондриях содержатся большое количество хорошо развитых крист.
Другие малодифференцированные фибробласты содержат обильное количество полисом и рибосом, между которыми располагается тонковолокнистый материал. В митохондриях содержится большое количество хорошо развитых крист, имеются остаточные тельца, цистерны ГЭР в небольшом количестве, они умеренно расширены.
В фибробластах отмечали крупные ядра и ядрышки, большое количество эухроматина и РНП гранул, в узком ободке цитоплазмы располагаются митохондрии с небольшим количеством цистерн ГЭР и аппарата Гольджи. Цистерны аппарата Гольджи сближены, что характеризует их низкую функциональную активность.
В некоторых фибробластах в ядрах отмечали большее содержание эухроматина, гетерохроматин располагался по периферии, кариолемма образует множество изгибов, перинуклеарные пространства расширены. Органеллы представлены множество свободных полисом, протофиламентами. Наблюдается, что в плазмолемме образуются небольшие впячивания с фагоцитированным материалом. Кроме того, наблюдается крупное, хорошо очерченное осмиофильное плотное образование, что по нашему мнению является иммунным комплексом (рис.44).
Некоторые фибробласты наблюдали в состоянии амитоза, ядра которых находятся в активном морфофункциональном состоянии, с противоположных сторон наблюдаются углубления цитоплазмы. В ядре имеются несколько ядрышек, преобладает эухроматин, хорошо видны ядерные поры, расширенные перинуклеарные пространства. Вследствие перетяжки ядра образуются два фрагмента. В цитоплазме органелл мало, встречаются редкие полисомы и митохондрии, с небольшим количеством крист (рис. 45).
Выявленные фиброциты имели удлиненную форму, с узким ободком цитоплазмы, ядра содержат в основном геторохроматин, в кариоплазме содержатся РНП гранулы. В цитоплазме наблюдаются редкие полисомы, короткие цистерны ГЭР и микропиноцитозные везикулы, характеризующие экзоцитоз (рис.46).
В некоторых случаях отмечаются контакты двух фибробластов, в одном из них в кариоплазме имеются РНП гранулы, происходит расширение перинуклеарного пространства. В части цитоплазмы содержится много свободных полисом, кроме того в цитоплазме имеется большое электронно плотное тельце округлой формы оно не окружено мембраной, по нашему мнению происходит накопление иммунных комплексов. Так же в цитоплазме имеются мелкие гранулы, они образуют не большие скопления, вокруг отдельных из них располагаются рибосомы. В плазмолемме имеются небольшие углубления, по нашему мнению, это является отражением процессов эндоцитоза. У другого фибробласта лучше развиты волокнистые элементы, имеются митохондрии, остаточные миелиновые тельца, полисомы, в отдельных участках электронная плотность повышена, в некоторых понижена (рис. 47).
В исследованных макрофагах ядра имеют сложную поверхность, крупные ядрышки, наблюдается расширение перинуклеарных пространств, иногда вблизи ядра обнаруживаются крупные вакуоли, в цитоплазме много митохондрий, полисом и протофиламентов. От плазмолеммы образуется множество коротких отростков. Такие изменения в макрофаге отражают начало функциональной активности клетки (рис.48).
Также встречаются молодые формы макрофагов, такие клетки имеют круглую форму, крупное ядро, в кариоплазме много эухроматина, в цитоплазме содержатся полисомы и везикулы, наблюдаются прикрепленные тельца средней электронной плотности к поверхности плазмолеммы (рис. 49).
В некоторых исследованных клетках отмечали значительные деструктивные изменения – кариолемма лизирована, материал ядер сгруппирован в плотные массы, между которыми располагается зерна средней электронной плотности, указанные признаки показывают на развитие апатоза (рис.50).
Встречаются клетки с значительными деструктивными изменениями в ядре, оно сжатое, уменьшенное, гетерохроматин располагается у кариолеммы, имеются вакуоли, перинуклеарные пространства расширены, однако на наружном листке кариолеммы обнаруживаются небольшое количество рибосом. В тоже время клетка имеет большой объем цитоплазмы, в котором интенсивно протекает синтез белка. Следует отметить, что цистерны ГЭР и рибосомы представлены в равном количестве, в митохондриях уменьшено количество крист в некоторых имеются небольшие вакуоли.
В исследованных участках кожи обнаруживаются кровеносные капилляры закрытого типа, которые имеют пикнотичные ядра, кариолемма в некоторых участках отсутствует. В цитоплазме имеется множество свободных рибосом и хлопьевидный материал. В межклеточном пространстве располагаются коллагеновые волокна с хорошо выраженной поперечной исчерченностью, образуют пучки идущие в различных направлениях, длина и диаметр волокон неравномерны по всей протяженности (рис.51).
Ув. 28000.
Ув. 28000
Ув. 36000.
Ув. 16000.
Ув. 28000
Таким образом, проведенные исследования показывают, что в коже вокруг язвы, в условиях сохранения целостности эпидермиса и дермы, наряду с активно функционирующими клеточными элементами и волокнистыми структурами, отмечаются некротические и деструктивные изменения структуры соединительной ткани, способствующие в последующем распространению развития язвенных процессов. Клеточные элементы находятся в различной степени дифференциации, выявляются как юные формы, так и зрелые. В приграничной области наряду с элементами формирования клеточного барьера формируются иммунные комплексы.
Морфологические показатели кожи интактной области здоровой конечности.
В коже в области венчика пальца у крупного рогатого скота здоровой конечности клеточные элементы и волокнистые структуры находятся в активном функциональном состоянии.
Исследованные фибробласты выявляются в различной степени дифференциации.
В малодифференцированных фибробластах, ядра в активном состоянии, в кариоплазме много РНП гранул. В цитоплазме рибосомы рассеяны, цистерн ГЭР мало, они сильно расширены, имеется в небольшом количестве тонковолокнистый материал (рис. 52).
Исследованные фиброциты имеют ядро и узкий ободок цитоплазмы. Вокруг клеток располагаются коллагеновые волокна (рис. 53).
Фибробласты обычно имеют крупные ядра и ядрышки, содержащие большое количество эухроматина и РНП гранул. В узком ободке цитоплазмы располагаются митохондрии с небольшим количеством цистерн ГЭР и аппарата Гольджи. В некоторых клетках цистерны аппарата Гольджи сближены, что характеризует их низкую функциональную активность.
Встречаются клетки с двумя ядрами, образовавшиеся, по нашему мнению, в результате амитоза, ядра с сильно измененной формой. В цитоплазме имеются рибосомы, много митохондрий разных размеров, с развитыми кристами. Наблюдается кооперация клеток (рис.54).
В исследованных капиллярах эндотелиоциты имеют ядра в активном состоянии, гетерохроматин расположен по периферии, эухроматин содержится в большем количестве. В кариоплазме имеются РНП гранулы, поверхность ядер неровная, образуются углубления цитоплазмы. В цитоплазме содержатся митохондрии, единичное количество цистерн ГЭР и много тонковолокнистого материала. Вдоль плазмолеммы хорошо видимы микропиноцитозные везикулы, что отражает активный обмен веществ.
Продолжение · 7
Встречаются эндотелиоциты из стенки капилляра, образующие плотный контакт с другим эндотелиоцитом. При этом эндотелиоцит имеет крупное активное ядро, гетерохроматин образует узкую полоску вдоль кариолеммы. В цитоплазме хорошо выражен аппарат Гольджи, который участвует в образовании везикул, везикулы располагаются вдоль плазмолеммы в 1-2 ряда, таким образом, по нашему мнению, обеспечиваются процессы секреции. Цитоплазма содержит митохондрии, мелкой и средней величины, хорошо видимы кристы. В поле зрения располагаются цитоплазматические отростки, содержащие рибосомы, митохондрии, протофиламенты (рис.55).
В исследованных участках встречаются миофибробласты, имеющие ядро с сильно измененной поверхностью, гетерохроматин в которых локализуется периферически, большую часть кариоплазмы занимает эухроматин и РНП гранулы. В цитоплазме содержится много митохондрий, свободных рибосом и миофиламентов. Вдоль плазмолеммы наблюдаются везикулы, отмечается уплотнение отдельных участков цитоплазмы в области плазмолеммы. По нашему мнению, возможно, данная клетка находится в стенке кровеносного сосуда (рис.56).
В межклеточном веществе здоровой кожи наблюдали различной степени дифференциации коллагеновые волокна – это молодые формы коллагеновых фибрилл, образующие тонкие пучки, и более зрелые коллагеновые волокна, образующие крупные пучки, идущие в параллельном направлении. Подобные коллагеновые волокна характерны для сетчатого слоя дермы, а тонкие пучки сосочковому слою дермы.
Таким образом, клеточные элементы и волокнистые структуры здорового участка кожи области пальцев у крупного рогатого скота, характеризуются активными обменными процессами, стабильным морфофункциональным состоянием.
Ув. 36000
Ув. 36000
Ув. 32000.
Ув. 36000.
Морфологические показатели при пододерматитах.
При пододерматитах изменения характерны изменениям структуры формирующейся грануляционной ткани.
Встречается большое количество юных форм фибробластов. В ядрах содержание гетерохроматина уменьшено, который глыбками располагается у кариолеммы, в кариоплазме много РНП гранул. В клетке выделяется большой объем цитоплазмы и обилие свободных рибосом, имеются мелкие митохондрии с небольшим количеством крист. Отмечается наличие небольшого количества цистерн ГЭР и лизосом (рис.57).
В цитоплазме клеток при сильном увеличении наблюдается наличие небольшого количества тонковолокнистого материала. В межклеточном веществе находятся коллагеновые фибриллы с хорошо выраженной поперечной исчерченностью. В одной из исследованных клеток повышается электронная плотность, плазмолемма отсутствует, эти показатели свидетельствуют о начале некроза клетки (рис.58).
В некоторых клетках наблюдается кариопикноз и повышение осмиофилии цитоплазмы (рис.59). Кроме этого в них же отмечается отсутствие кариолеммы, очень высокая плотность гетерохроматина, между которыми располагается большое количество зерен, вокруг клеток располагаются достаточно плотно друг к другу коллагеновые волокна, с извилистым ходом волокон (рис.60). В межклеточном веществе находится материал средней электронной плотности, в большом количестве встречаются микробы различной формы: круглые, удлинные, с изменой формой, рядом располагаются продукты распады.
Таким образом, при пододерматитах основа кожи копытец, представлена структурой формирующейся грануляционной ткани, со всеми элементами рыхлой соединительной ткани. Наряду с этим, при активно формирующихся и дифференцирующихся клеточных элементах и волокнистых структурах, отмечаются деструктивные и некротические процессы.
Ув. 28000.
Ув. 20000.
Ув. 20000.
4.1 Особенности клинико-морфологических изменений в организме крупного рогатого скота в условиях экспериментального моделирования гнойно-некротических поражений в области копытец.
4.1.1 Клинико-морфологические характеристики ран, физиологические и биохимические показатели крови крупного рогатого скота, в условиях применения мази левомеколь и гелевой мази (МАОП-гель) при моделировании экспериментальных гнойно-некротических поражений копытец.
В данной серии опытов в сравнительном плане изучали влияние пиримидиновых производных - мази левомеколь (контроль) и МАОП-гели на клинико-гемтологические, гистологические и гистохимические показатели экспериментальных ран в области пальцев у крупного рогатого скота.
Через сутки после нанесения ран у животных отмечалось угнетение общего состояния, снижение аппетита, по данным таблицы 3, отмечалось повышение температуры тела на 0,6° (Р>0,05), учащение пульса на 10,4 удара (Р>0,05), дыхания на 14,7 движений (Р<0,05).
При движении животных отмечается скованность, хромота смешанного типа второй степени. Вокруг ран развивался разлитой тестоватой консистенции, болезненный краевой отек. Тампон, расположенный в ране, пропитан фибринозным сгустком и прочно фиксирован в ней. После удаления его все неровности дна и стенок раны покрыты сгустками крови и фибринозного экссудата.
Через сутки после первого применения пиримидиновых производных угнетение несколько уменьшилось, хромота и скованность движений сохраняется, прием воды и корма активный. Общая температура тела, по сравнению с исходным показателем, возросла на 1,0° (Р<0,05), по сравнению с предыдущим сроком на 0,3°, пульс участился соответственно на 17,2 удара (Р>0,05), по сравнекнию с предыдущим сроком на 6,3 удара. Дыхание участилось на 14,5 (таблица 3) движений (Р>0,05), а по сравнению с предыдущим сроком осталось почти без изменений.
По сравнению с исходными данными, в гематологических показателях не произошло значительных сдвигов: по гемоглобину, эритроцитам, лейкоцитам - по данным таблицы 2 (Р>0,05), количество же сегментоядерных увеличилось на 7,0% (Р<0,05) при снижении лимфоцитов на 8,4% (Р<0,05).
На этом общем клинико-гематологическом фоне площади ран (таблица 4) при однократом применении МАОП-гели и контрольных, не имели существенных отличий (Р>0,05).
В сравнении с контрольными ранами, при применении МАОП-гели, отмечаются следующие отличия: более выраженная эмиграция лейкоцитов и пролиферация клеточных элементов; наличие слабо выраженной реакции по Ван-Гизону в рыхлой клетчатке, а также вокруг крупных сосудов; положительная реакция на ДНК и РНК в ядрах клеточных элементов, при более выраженной реакции на ДНК.
Через трое суток после первого применения пиримидиновых производных наблюдалось некоторое улучшение общего состояния животных, они более активно принимали корм и воду, но хромота и скованность движений сохранялась.
В сравнении с предыдущим сроком исследования, сколько-нибудь значительных отклонений, как это следует из таблицы 3, в показателях общей температуры, пульса и дыхания не установлено (Р>0,05). В периферической крови (таблица 2), наблюдалась тенденция к увеличению процентного содержания палочкоядерных и сегментоядерных лейкоцитов, при снижении количества лимфоцитов на 7,0%, для упомянутых показателей Р>0,05.
На этом общем клинико-гематологическом фоне, после двух кратного применения МАОП-гели, местная температура увеличилась на 0,39° (Р<0,01) (таблица 5), площадь ран уменьшилась на 1,69см.кв. (Р<0,05). Стенки и дно ран, по сравнению с предыдущим сроком, не во всех участках покрыты рыхлой фибринозной массой, в таких местах выявляются бледно-розовые мелкозернистые грануляции.
При гистологических и гистохимических исследованиях, при применении МАОП-гели, установлено, что поверхность ран покрыта фибрином, инфильтрированным незначительным количеством лимфоцитов и нейтрофилами, под ним располагается слой дегенеративных клеточных элементов, представленный преимущественно нейтрофилами и полибластами, далее следует сосудистый слой с пролиферирующими клеточными элементами, в основном, полибластами с крупными круглыми ядрами и незначительным слоем цитоплазмы. Гистохимически выявляется положительная реакция по ван-Гизон в местах скопления клеточных элементов, в основном вокруг мелких и крупных сосудов. Содержание гликогена повышено в местах формирования юной соединительной ткани, стенках сосудов. Выявляется выраженная положительная реакция на ДНК и РНК, в ядрах клеточных элементов, при более положительной реакции на ДНК. По сравнению с предыдущим сроком исследования, интенсивность реакций на нуклеиновые кислоты усиливается.
В контрольных ранах, к этому сроку, по сравнению с использованием МАОП-гели, показатели местной температуры, площадь ран, существенных различий не имели (Р>0,05). Ткани дна и стенок покрыты плотной фибринозной массой, структура его равномерная.
Гистологически и гистохимически в контрольных ранах, имеются следующие отличия: рыхлая клетчатка в состоянии сильного отека, содержит большое количество лейкоцитов, явления экссудации, преобладают над процессами пролиферации клеточных элементов, сосудистый слой с пролиферирующими клеточными элементами менее развит, реакция по ван-Гизон отмечается незначительно, только по ходу крупных сосудов. Реакция Шабадаша отрицательная, реакции на РНК и ДНК выражены слабо.
Через семь суток общее состояние животных удовлетворительное, прием воды и корма активный, сохраняется некоторая скованность движений. Общая температура, по сравнению с предыдущим сроком, незначительно понизилась на 0,3° (Р>0,05), отмечается незначительная тенденция к урежению пульса и понижению частоты дыхания ( таблица 3).
В периферической крови, как видно из таблицы 2, произошло некоторое снижение количества гемоглобина на 0,3 г/%, эритроцитов на 0,1 млн., лейкоцитов на 2800 клеток, в лейкоцитарной формуле понизилось процентное содержание палочкоядерных лейкоцитов на 3,6%, сегментоядерных на 9,0%, при увеличении количества лимфоцитов на 15,6%, для всех показателей крови Р<0,05.
На этом общем клинико-гематологическом фоне к этому сроку при применении МАОП-гели, по сравнению с предыдущим сроком местная температура достоверно уменьшилась на 0,65° (Р<0,001), уменьшение площади ран оказалось недостоверным.
Поверхность ран покрыта незначительным количеством серо-белого цвета сметанообразной консистенции гноем, покрывающим мелкозернистые розово-красного цвета грануляции, по периферии хорошо выражен эпителиальный ободок.
Гистологически и гистохимически поверхность раны покрыта рыхлой массой, состоящей из фибрина, склеившихся эритроцитов и большого количества лейкоцитов. Под ней располагается большое количество клеток с дегенеративными изменениями ядер. Далее следует сосудистый слой, преимущественно капилляров, расширенных и переполненных кровью, колдичество их в глубоких слоях раны уменьшается, увеличивается приэтом их диаметр. Вокруг них клеточные элементы образуют муфтообразные скопления, у самой поверхности их сплошную массу их, с большим содержанием РНК и ДНК, наибольшим, по сравнению с предыдущим сроком исследований. В глубоких слоях четко дифференцируются фибробласты с веретенообразной цитоплазмой и РНК – положительной зернистостью в ней. Полибласты и фибробласты располагаются между раздвинутыми коллагеновыми волокнами, при положительной реакции по ван-Гизон, с тенденцией нарастания в глубоких слоях. Интенсивность реакции по Шабадашу выражена преимущественно в стенках кровеносных сосудов. В краевых участках раны омечается регенерация эпителия.
Сопоставляя приведенные показатели ран при применении МАОП-гели, с контрольными установлено, что местная температура, площадь ран не имели существенных различий. При этом, поверхность контрольных ран покрыта незначительным количеством серо-грязного цвета гноем, жидкой консистенции с неприятным запахом. После удаления гноя обнаруживаются бледно-розовые крупнозернистые грануляции.
Гистологическое и гистохимическое строение грануляционной ткани контрольных ран отличается от ран при использовании МАОП-гели: слабым развитием сосудистого слоя с пролифирирующими клеточными элементами, наличием кровоизлияний в поверхностных его слоях, менее интенсивной реакцией по Браше и Фельгену.
Как отмечалось в разделе материал и методика исследований, на 14 сутки после первого применения пиримидиновых производных, опытные раны последний раз обрабатывались МАОП-гелью, а контрольные мазью левомеколь, в последующем обработка ран не производилась, на поверхности ран образовывались корочки, и дальнейшее заживление протекало под струпом.
На 14 сутки после трехкратного применения пиримидиновых производных, общее состояние не отличалось от исходных данных. По данным таблиц 3 и 2 показатели общей температуры, пульса, дыхания и периферической крови, не выходили за пределы верхних и нижних границ физиологической нормы.
К этому сроку на фоне применения МАОП-гели произошло снижение местной температуры на 1,1º, а площадь ран на 3,48 см², для эти показателей степень достоверности определяется по третьему порогу вероятности (Р<0,001), при этом ежедневное уменьшение площади ран составило 6,12%.
На поверхности ран отмечается незначительное количество раневого экссудата серого цвета, покрывающего бледно-розовые мелкозернистые грануляции, с хорошо выраженным эпителиальным ободком шириной 2-3мм.
На гистологических препаратах под тонким слоем серо-фибринозного экссудата отмечается хорошо сформировавшаяся грануляционная ткань, с многочисленными капилляров и обилием полибластов, особенно в поверхностном ее слое, при более выраженной реакции на РНК и ДНК, по сравнению с предыдущим сроком исследования. В глубоких частях грануляционного слоя преобладают фибробласты и плотно расположенные коллагеновые волокна, с РНК – положительной реакцией в цитоплазме фибробластов и нарастанием реакции по ванг-Гизон в соединительной ткани. Реакция по Шабадашу положительная в ороговевающих слоях регененрирующего эпителия, стенках артерий, но слабее выражена в коллагеновых волокнах.
В контрольных ранах, где применяли мазь левомеколь, раны покрыты крупнозернистыми бледно-розовыми грануляциями. Гистологически и гистохимически в контрольных ранах эксудативно-некротический слой более выражен, с кровоизлияниями, гнойной инфильтрацией и участками некроза обильным скоплением лейкоцитов и полибластов при менее выраженной реакции на РНК и ДНК и слабо положительной реакцией по ван-Гизон в глубоких слоях соединительно тканых элементов грануляционной ткани.
Через 21 сутки после начала применения пиримидиновых производных общее состояние животных хорошее.
К этому сроку, по данным таблиц 2,3 показатели общей температуры, пульса, дыхания и периферической крови близки к показателям физиологической нормы.
На этом фоне при применении МАОП-гели, поверхность ран покрыта сухой бурого цвета прочно фиксированной корочкой, с хорошо выраженным эпителиальным валиком шириной 2-3мм. Температура кожи вокруг ран остается практически прежней, площадь ран уменьшилась на 3,15см² (Р<0,001), ежедневное уменьшение площади ран с 14-х по 21-е сутки составило 10,78%.
Гистологически и гистохимически с краевых участков раны, под отторгающийся струп врастает многослойный ороговевающий эпителий, истончающийся по направлению к центральным участкам, где он состоит из клеток мальпигиевого слоя. Под струпом – подлежащая соединительная ткань, зрелая, фуксинофильная, с беспорядочным расположением пучков коллагеновых волокон и большим количеством сосудов. Содержание ДНК в ядрах, РНК в ядрах и цитоплазме понижено. Содержание гликогена увеличено в эпителиальных клетках и клетках соединительной ткани.
В контрольных ранах, по сравнению с ранами, где использовали МАОП-гель, различия местной температуры, площади ран – несущественны.
Гистологически и гистохимически установлены следующие отличия: сосудистый слой с круглоклеточными элементами контрольных ран охватывает большую глубину, содержит участки с кровоизлияниями, под ним слой рыхлой ткани менее развит. Реакция Шабадаша слабо выражена и выявляется только в поверхностном слое эпидермиса и коллагеновых волокнах.
Продолжение · 8
На 28 сутки после начала применения пиримидиновых производных общее состояние бычков хорошее, показатели общей температуры, пульса, дыхания периферической крови в пределах физиологической нормы.
На этом общем фоне, раны, обработанные МАОП-гелью, к этому сроку покрыты небольшим струпом площадью 0,64см², полностью эпителизированы, при этом площадь струпа на поверхности ран, по сравнению с предыдущим сроком, уменьшилась на 0,85см², а температура кожи зоны раны понизилась на 1,72º и соответствует исходному показателю, степень достоверности обеих показателей определяется по третьему порогу вероятности.
Гистологически и гистохимически под эпителием располагается тонкий слой рыхлой незрелой соединительной ткани, со слабой фуксинофильностью и незначительным количеством капилляров, этот слой без резкихъ границ переходит в зрелую соединительную ткань с более выраженной фуксинофильностью, а многочисленные сосуды муфтообразно окружены круглоклеточными элементами с пониженной реакцией на РНК и ДНК. Реакция по Шабадашу выражена слабо, преимущественно в поверхностных слоях эпидермиса и коллагеновых волокнах зрелой соединительной ткани.
При сопоставлении с контрольными ранами, к этому сроку площадь ран, обработанных МАОП-гелью, меньше на 1,03см² (Р>0,05), ежедневное уменьшение площади их составляет 7,94%, а местная температура ниже на 0,63º (Р<0,001).
Гистологически и гистохимически структура неэпителизированной зоны контрольных ран представлена менее зрелой соединительной тканью с большим количеством переполненных кровью сосудов и наличием отдельных кровоизлияний.
Таким образом, на основании проведенных исследований установлено, что пиримидиновые производные благоприятно влияют на заживление экспериментальных ран в области пальцев у крупного рогатого скота.
Таблица 2.
Гематологические показатели
Наименование показателей | Дни исследований | ||||||
Фон | 1 | 3 | 7 | 14 | 21 | 28 | |
Гемаг.г/% | 9,9±1,34 | 9,0±0,73 | 9,0±0,22 | 8,7±0,74 | 9,2±1,03 | 9,8±0,63 | 10,0±1,29 |
Эритр.мл. | 6,45±1,06 | 6,452±0,88 | 6,5±0,48 | 6,4±1,25 | 6,16±0,99 | 6,457±0,85 | 5,93±0,10 |
Лейкоц.тыс. | 8,06±1,25 | 12,0±2,31 | 12,08±1,75 | 9,28±1,39 | 8,74±1,40 | 7,84±0,18 | 8,27±2,1 |
Лейкоформула: | |||||||
Б | 1,6±0,58 | - | 1,0±0,7 | 1,0±0,3 | 1,0±0,6 | 1,6±0,58 | - |
П | 4,7 ±1,16 | 6,67±1,25 | 9,3±3,52 | 5,7±1,16 | 5,0±1,0 | 4,7±1,2 | 3,0±1,41 |
С | 15,0±1,0 | 22,0±2,45 | 25,0±6,01 | 16,0±1,0 | 19,0±4,6 | 15,0±1,0 | 12,7±1,7 |
Лимф. | 73,0± 1,0 | 64,6±3,4* | 57,0±8,2 | 72,6±4,06 | 72,0±4,37 | 73,0±1,0 | 78,0±2,45 |
5,0±1,0 | 6,0±1,42* | 6,7±2,1 | 3,7±1,16 | 3,0±1,0 | 5,0±1,0 | 3,6±0,95 | |
Общий бел. | 6,37±0,11 | 6,38±0,09 | 6,38±0,08 | 6,39±0,07 | 6,55±0,17 | 6,53±0,07 | 6,64±0,10 |
Белк.фрак: Альбумины | |||||||
1,58±0,25 | 1,57±0,26 | 1,56±0,34 | 1,59±0,20 | 1,63±0,27 | 1,92±0,72 | 1,73±0,14 | |
Глобулины a | 1,31±0,09 | 1,32±0,11 | 1,35±0,22 | 1,41±0,13 | 1,33±0,12 | 1,19±0,54 | 1,44±0,12 |
ß | 2,92±0,07 | 2,92±0,10 | 2,91±0,13 | 2,91±0,15 | 2,95±0,15 | 2,97±0,11 | 2,84±0,06 |
y | 0,56±0,04 | 0,57±0,07 | 0,58±0,09 | 0,58±0,06 | 0,65±0,04 | 0,66±0,11 | 0,64±0,10 |
Фосфор | 4,64±0,28 | 4,84±0,15 | 5,53±0,26 | 6,14±0,20 | 5,99±0,35 | 5,56±0,34 | 6,71±0,46 |
Резерв.щел | 58±1,69 | 59,01±1,56 | 60,01±2,32 | 59,8±3,31 | 62,3±3,13 | 63,5±1,10 | 74,4±3,37 |
Кальций | 8,34±0,43 | 8,56±0,22 | 8,99±0,33 | 9,08±0,16 | 9,67±0,18 | 9,94±0,20 | 10,4±0,47 |
Таблица 3.
Показатели температуры, пульса и дыхания по средним данным | ||||||||
Наименование показателей | Д Н И И С С Л Е Д О В А Н И Й | |||||||
Фон | ч/з 24 часа после инфицирования | 1 | 3 | 7 | 14 | 21 | 28 | |
Температура | 38,9±0.22 | 39,5±0,53* | 39,8±0,46* | 39,8±0,5 | 39,5±0,35 | 38,9±0,32 | 38,8±0,30 | 38,8±0,14 |
Пульс | 72,0±3,77 | 82,4±10,53 | 89,2±13,26 | 81,4±6,7 | 80,6±5,42 | 76,6±6,88 | 69,3±5,52 | 69,0±5,3 |
Дыхание | 25,3±4,93 | 40,0±5,2* | 39,8±8,01 | 37,1±8,57 | 35,4±5,66 | 31,2±2,72 | 25,5±2,67 | 24,5±0,58 |
х - разница,по сравнению с фоном статистически достоверна по первому порогу вероятности (Р < 0,05) | ||||||||
Таблица 4 Показатели целлофанографии ран по средним данным при применении пиримидиновых производных | ||||||||
Пиримидиновые производные | Д Н И И С С Л Е Д О В А Н И Й | |||||||
1 | 3 | 7 | 14 | 21 | 28 | |||
М±м | М±м | М±м | М±м | М±м | М±м | |||
МАОП-гель | 9,5±0,43 | 7,81±0,54 | 8,12±0,6 | 4,64±0,26** | 1,49±0,13*** | 0,64±0,04*** | ||
Левомеколь | 9,24±1,11 | 8,42±1,57 | 8,86±1,55 | 5,51±1,11 | 3,76±1,26 | 1,67±0,70 | ||
**-разница, по сравнению с контролем статистически достоверна по второму порогу вероятности (Р <0,01) ***-разница, по сравнению с контролем статистически достоверна по третьему порогу вероятности (Р <0,001) на третьему порогу | ||||||||
Таблица 5.
Показатели кожной температуры при применении пиримидиновых производных по средним показателям | |||||||
Пиримидиновые производные | Д Н И И С С Л Е Д О В А Н И Й | ||||||
Фон | 1 | 3 | 7 | 14 | 21 | 28 | |
М±м | М±м | М±м | М±м | М±м | М±м | М±м | |
МАОП-гель | 31,63±0,08 | 34,12±0,09 | 34,45±0,06 | 33,8±0,16 | 32,7±0,18 | 32,87±0,15 | 31,15±0,14*** |
Левомеколь | 31,93±0,18 | 33,76±0,12 | 34,42±0,11 | 33,79±0,16 | 32,84±0,19 | 33,06±0,16 | 31,78±0,04 |
ххх-разница, по сравнению с контролем вероятности (Р < 0,001) статистически достоверна по третьему порогу | |||||||
- Морфофункциональные показатели заживления экспериментальных ран в области пальцев, при применении мази левомеколь, с использованием электронной и сканирующей электронной микроскопии
Через трое суток после нанесения ран, электронно-микроскопическими исследованиями установлено, что клеточный состав соответствует элементам формирующейся грануляционной ткани, находящимся в различном морфофункциональном состоянии. Отмечаются клетки в состоянии некроза, у которых местами отсутствует плазмолемма, цистерны гранулярного эндоплазматического ретикулума (ГЭР) расширены (рис.61). Характерной особенностью ядер клеток является отсутствие гетерохроматина, при наличии эухроматина, это свидетельствует о том, что генетический аппарат ядра функционирует. Отмечается активное расширение перинуклеарных пространств, ядра клеток неправильной формы, что характерно для компенсаторно приспособительных реакций. Отмечается обширная вакуолизация цитоплазмы, которая постепенно переходит в межклеточное вещество, вокруг клетки образуется материал средней электронной плотности.
Значительные изменения отмечаются в межклеточном веществе, коллагеновые волокна отсутствуют, в результате их деструкции образуются тельца различной электронной плотности.
Таким образом, через трое суток после нанесения ран, клеточные элементы и межклеточное вещество, находятся в состоянии некротических и деструктивных изменений, но при этом ядра сохраняют генетический потенциал, некоторые находятся в активном функциональном состоянии, выявляются элементы компенсаторно-приспособительных процессов.
Через семь суток после нанесения ран в клеточных элементах и межклеточном веществе сохраняются значительные некротические и деструктивные процессы. Но при этом отмечается более четкая дифференциация клеток. Наиболее часто встречаются фибробласты, в различном функциональном состоянии, иногда их фрагменты, при отсутствии плазмолеммы, с различной степенью расширения цистерн ГЭР, что является свидетельством о синтезе белка в этих клетках (рис. 62).
Кроме этого встречаются фибробласты, с ядрами неправильной формы, при наличии нескольких ядрышек, что свидетельствует об увеличении синтеза РНК, встречаются фибробласты с фрагментированными ядрами. Вокруг некоторых клеток отмечается наличие светлого межклеточного вещества, что по нашему мнению, является скопление отечной жидкости (рис. 63).
В исследованных микрофотографиях отмечаются парно контактирующие клетки, при этом в одной клетке выявляется кариопикноз, в другой ядро активно функционирует, при отсутствии цитоплазмы. Клетки окружены волокнистой гомогенной структурой, возможно, по нашему мнению, это фибрин.
В эти сроки в исследованных микрофотографиях выявляются кровеносные капилляры, стенка которых образована умеренно расширенными эндотелиоцитами, содержащими множественные вакуоли и рибосомы, имеющие набухшие базальные мембраны, в некоторых участках с нарушенной их целостностью.
Значительные деструктивные изменения отмечаются в межклеточном веществе, при этом тонкая структура волокнистого материала не просматривается.
В то же время надо отметить, что в межклеточном веществе встречаются ядра клеток, в которых преобладает эухроматин, что является показателем деконденсации ДНК, возможно, по нашему мнению связано с образованием молодых соединительно-тканных клеток. По литературным данным, эухроматин показатель активности ДНК, гетерохроматин выявляет неактивность ДНК.
Таким образом, через семь суток после нанесения ран, в тканях сохраняются некротические и деструктивные процессы. В тоже время отмечается активное функциональное состояние клеточных элементов, их дифференциация, особенно фибробластов, в которых выявляется активный синтез РНК и ДНК и идет интенсивное формирование молодых соединительно-тканных клеток. Выявляется процесс развития капиллярной сети формирующейся грануляционной ткани. Сохраняется серозно-фибринозный отек тканей.
Через 14 суток после нанесения ран выявляются клеточные элементы, входящие в состав грануляционной ткани.
Надо отметить, что в этот срок продолжают встречаться соединительно-тканные клетки с пикнотичными ядрами и различной степенью деструкции цитоплазмы и цитоплазматических органелл, вакуолизации митохондрий, с дальнейшим образованием множественных вакуолей. В межклеточном пространстве этих клеток находится аморфное вещество средней электронной плотности, а также протофиламенты небольшой длины, в некоторых участках они образуют небольшие пучки (рис. 64).
В данные сроки встречаются фиброциты, в которых отмечается уплотнение кариоплазмы, увеличение перинуклеарного пространства, цитоплазма содержит полисомы, мелкие митохондрии с светлым матриксом. Вокруг клетки имеются бесструктурные пустотные зоны, возможно образовавшиеся в результате гибели клеток. В межклеточном пространстве накапливаются тельца высокой электронной плотности, коллагеновые волокна в поле зрения отсутствуют (рис.65).
Исследованные макрофаги имеют электронноплотные фаголизосомы, остаточные тельца. В ядре выявляются ядрышки средней электронной плотности.
По сравнению с предыдущим сроком встречается большее число гранулоцитов. Эти клетки в различной степени заполнены гранулами, они различной электронной плотности, в некоторых случаях мембраны окаймляющие гранулы хорошо видны. У отдельных клеток плазмолеммы имеют перерывы. Кроме гранул имеется небольшое количество митохондрий. Ядра гранулоцитов средней электронной плотности, правильной формы, отмечается незначительная конденсация хроматина, перинуклиарные пространства расширены. Такие признаки, по нашему мнению, имеют юные клетки. За пределами этихлеток наблюдается образование небольших пучков коллагеновых волокон.
Исследованные зрелые формы гранулоцитов имеют несколько сегментов ядер – до 3-х, гранулы различной электронной плотности, цитоплазма содержит плотный материал, концентрические образования, а также остаточные тельца образовавшиеся в результате фагоцитоза.
Кроме гранулоцитов встречаются клетки с очень активными крупными ядрами, имеющие небольшие изгибы, полностью состоящие из эухроматина, с несколькими ядрышками и интенсивным образованием рибосом. В цитоплазме их имеются полирибосомы, митохондрии, в большинстве митохондрий кристы укорочены. Отсутствие цистерн ГЭР или наличие их в небольшом количестве и укороченных вариантах, указывает на малодифференцированный характер этих клеток.
В данные сроки выявляются контактирующие эпителиальные клетки, имеющие сложную форму, и образующие отростки, цитоплазма содержит расширенные цистерны ГЭР, внутреннее содержимое светлое, имеется умеренное содержание свободных полисом. По литературным данным известно, что белок синтезируемый полисомами используется для функционирования самой клетки.
Таким образом, исследования, проведенные на 14 день после нанесения ран, показывают, последовательность формирования структуры грануляционной ткани ран, за счет формирования и дифференциации клеточных элементов, волокнистых структур и межклеточного вещества. Эти изменения протекают на фоне усиления синтеза белка используемых для формирования компонентов грануляционной ткани, и белков обеспечивающих активное функционирование самих клеток.
Через 21 сутки после нанесения ран клеточные элементы и волокнистые характерны для структуры зрелой грануляционной ткани.
В исследованных участках наиболее часто встречаются фибробласты, в них по сравнению с предыдущим сроком, увеличен объем цитоплазмы и количество цистерн ГЭР, усиливается синтез белка. Плазмолемма слабо различима. В цитоплазме имеются вакуоли различных размеров, иногда в клетках остаточные тельца, в виде электронно-плотных образований. Результатом усиленного синтеза белка является образование коллагеновых волокон, которые формируются в пучки, но в пучках располагаются рыхло.
Некоторые фибробласты имеют сильно измененную форму из-за многочисленных изгибов, в ядре гетерохроматин локализуется у кариолеммы, кроме цистерн ГЭР в цитоплазме имеются тельца с материалом средней электронной плотности (рис. 66).
В исследованных микрофотографиях выявляются контакты фибробластов и фиброцитов, при этом в фибробластах происходит значительное расширение цистерн ГЭР и набухание митохондрий.
В тоже время отмечается наличие клеток, с признаками кариопикноза, сильным расширением цистерн ГЭР, большим количеством вакуолей.
Межклеточное вещество на периферии ран представлено однородной серой массой, что затрудняет обмен веществ, но способствует, по нашему мнению, полной изоляции и барьеризации зоны воспаления от здоровых тканей (рис.67).
