Продолжение · 9
Таким образом, через 21 сутки после нанесения ран клеточный состав, волокнистые структуры и межклеточное вещество соответствуют зрелой грануляционной ткани. Клетки находятся в активном функциональном состоянии, усиленно синтезируют белок, отмечается барьеризация зоны воспаления.
Через 28 суток после нанесения ран, выявленные клеточные элементы и волокнистые структуры свидетельствуют о завершающей стадии заживления ран. В этот срок клеточный состав преимущественно представлен фибробластами, отличающиеся друг от друга степень активности ядра, которые имеют извилистую форму, ядрышки находятся в активном функциональном состоянии. В большинстве фибробластов цистерны ГЭР сильно расширены, что свидетельствует о значительном напряжении функциональной деятельности, наблюдаются случаи амитоза ядра.
В межклеточном пространстве располагаются коллагеновые волокна, в которых наблюдается поперечная исчерченность.
По периферии раны выявляются активно функционирующие эпителиоциты, свидетельствующие о интенсивной эпителизации раны.
Ув.12000
Ув. 10000.
Ув. 10000
Ув. 16000
Ув.16000.
Таким образом, в этот срок происходит завершающая стадия заживления раны, заканчивающаяся ее полной эпителизацией. Тем не менее, клеточные элементы сохраняют высокую степень активности, восстанавливаются волокнистые структуры соединительной ткани.
4.1.3 Морфофункциональные показатели заживления экспериментальных ран в области пальцев, при применении гелевой мази (МАОП-гель), с использованием электронной и сканирующей электронной микроскопии
Через сутки после нанесения ран, в периферических участках наиболее часто регистрируемой и сохранившейся клеточной структурой является кератиноцит.
В кератиноцитах из шиповидного слоя, в цитоплазме содержатся пучки тонофиламентов, идущих в различных направлениях, имеются бесструктурные участки цитоплазмы, плазмолемма клеток отсутствует. Незначительные участки содержат рибосомы и полисомы, которые осуществляют синтез белка. Отмечается наличие гранул средней электронной плотности, возможно образовавшиеся в результате деструкции тонофиламентов (рис. 68). Кератиноциты из зернистого слоя содержат зерна кератогеалина, на периферии сохраняются тонофиламенты, клетки осуществляют контакты между собой с помощью десмосом. Встречаются кератиноциты округлой формы, также сохранившие тонофиламенты и зерна кератогеалина по периферии клетки. В межклеточном веществе вокруг них имеются скопления группы микробов. Отдельные микробы представляют интерес тем, что они кружены оболочкой средней электронной плотности, они палочковидной и кокковой формы (рис.69). Кроме этого, в некоторых из них отмечается увеличение морфофункциональной активности, в их телах имеются участки различной электронной плотности (рис. 70). Микробы обнаруживаются и в самих клетках, например в кератиноцитах они располагаются среди пучков тонофибрилл, плазмолемма при этом сохранена только участками.
В межклеточном веществе отмечается лизис компонентов коллагеновых волокон, в отдельных участках сохранены только их очертания, электронная плотность их уменьшена, сохраняются фрагменты цитоплазматических отростков и элементы значительно измененных клеток, среди которых также наблюдаются скопления групп микробов.
Таким образом, через сутки после нанесения ран, в дерме отмечается значительная деструкция клеток, волокнистых структур, межклеточного вещества, отсутствие отдельных видов клеток – фибробластов, макрофагов. В тоже время сохраняется активность некоторых эпителиальных клеток, осуществляющих синтез белка. Выявляется большое количество микроорганизмов, в межклеточном веществе, в самих клетках, находящихся в активном функциональном состоянии усугубляющие деструктивные и некротические процессы в ране.
Через трое суток после нанесения ран, и первого применения мази МАОП-гель, по сравнению с предыдущим сроком, состав клеточных элементов в ране значительно изменился – это нейтрофильные лейкоциты, лимфоциты, эритроциты, макрофаги, фиброциты.
В исследованных микрофотографиях встречаются нейтрофильные лейкоциты, имеющие 6 сегментов ядер, при этом вся цитоплазма заполнена зернами высокой электронной плотности, они имеют разнообразную форму – овальную, удленненную. В некоторых нейтрофилах находятся митохондрии, их плазмолемма имеет волнистый вид. Здесь же могут располагаться эритроциты с равномерной электронной плотностью цитоплазмы, фиброцит с ядром гомогенной зернистости, с 1-2 лизосомами в цитоплазме, фрагмент цитоплазмы макрофага с фагосомами различной электронной плотности (рис. 71).
В часто встречающихся сигментоядерных нейтрофилах содержатся лизосомы, митохондрии с большим количеством крист, что является показателем их активности. В сегментах ядер преобладает гетерохроматин, однако они друг от друга отличаются плотностью, а цитоплазма заполнена гранулами, в некоторых нейтрофилах цитоплазма относительно свободна. Здесь же встречаются эритроциты с пониженной электронной плотностью цитоплазмы.
Исследованные макрофаги заполнены пузырьковыми структурами, вакуолями, митохондриями, их плазмолемма разрушена. Некоторые макрофаги окружены материалом высокой электронной плотности. В этот период эксперимента в исследованных образцах отмечается наличие относительно большого количества макрофагов находящиеся в различной степени деструкции (рис. 72).
В исследованных макрофагах микробы включены в состав фаголизосомы, в которых хорошо видима капсула. В большей части фаголизосом содержится материал высокой электронной плотности, который находится в различной степени лизиса, плазмолемма видима на всем протяжении (рис. 73).
В этот срок исследования часто отмечаются контакты между отдельными клетками и группами клеток. При контакте двух лимфоцитов отмечается, что один находится в состоянии кариоптикноза и лизиса цитоплазмы. Другой лимфоцит находится в лучшем состоянии, однако в ядре гетерохроматина много, а в цитоплазме наблюдается мелкая зернистость. Здесь же находится кератиноцит, с обилием свободных рибосом, которые обеспечивают синтез белка и восстановление субклеточных структур, в ядре отмечается большее количество эухроматина, что также является признаком активного синтеза белка. В этой же зоне отмечаются контакты макрофагов и нейтрофильных лейкоцитов, между клетками обнаруживаются цитоплазматические отростки (рис. 74).
Таким образом, через трое суток после нанесения ран и первого применения мази МАОП-гель, значительно изменился клеточный состав грануляционной ткани по сравнению с предыдущим сроком, наиболее функционально активными клетками в этот срок являются нейтрофильные лейкоциты и макрофаги. Значительно подавлена активность микробов, за счет фагоцитарной деятельности макрофагов. Усиливаются контакты между отдельными клетками и группами клеток.
Через 7 суток после нанесения ран и повторного применения мази МАОП-гель, по сравнению с предыдущим сроком, на периферии раны выявляются процессы эпителизации, отмечается отсутствие микробов, как в межклеточном веществе, так и в клеточных элементах. Исследованные ткани соответствуют структуре грануляционной ткани.
В исследованных участках, в данный срок, в большом количестве встречаются кератиноциты, которые находятся в различном морфофункциональном состоянии, иногда это группа клеток, в которых различаются тонофибриллы и зерна керагогеалина, выявляющиеся в виде телец различной электронной плотности, в результате клетки приобретают пятнистый вид. Между кератиноцитами расширяются межклеточные пространства, содержащие материал средней электронной плотности. Также встречаются кератиноциты с наличием свободных рибосом, с расширенными цистернами ГЭР и пузырьками, образовавшимися путем отделения от цистерн комплекса Гольджи (рис. 75).
Контактирующие кератиноциты находятся в различном функциональном состоянии, например, в исследованном участке одна клетка содержит пучки тонофиламентов и тонофибрилл, другая имеет более плотное ядро, по нашему мнению, ядро находится в состоянии кариопикноза, зерна кератогеалина характерны для зернистого слоя эпидермиса (рис. 76).
В исследованных макрофагах цитоплазма заполнена фагосомами, митохондриями, пузырьками различной электронной плотности, содержит много волокнистого материала, отростки заполнены рибосомами, таким образом, в клетке имеются участки, где преобладают деструктивные изменения, в других компенсаторные.
В некоторых исследованных участках выявляются выраженные деструктивные изменения, в межклеточном пространстве находятся фрагменты цитоплазматических отростков различной электронной плотности с гранулами рибосом, они электронно-плотные, их довольно много, плазмолемма большей частью разрушена.
Таким образом, через 7 суток после нанесения ран, и повторного применения мази МАОП-гель, выявляется формирующаяся грануляционная ткань, со всеми активно функционирующими структурами и некоторыми элементами деструктивных изменений. В грануляционной ткани не выявляются микробы.
Через 14 суток после нанесения ран и трехкратного применения мази МАОП-гель, исследованные ткани соответствуют формирующейся зрелой грануляционной ткани со всеми присущими ей элементами, как клеточных структур, так и волокнистых компонентов и межклеточного вещества.
Наиболее активными клеточными элементами в этот срок являются фибробласты, макрофаги, гранулоциты, эпителиальные клетки, в них отмечается активный синтез белка, идущего на формирование волокнистых структур и белков, обеспечивающих функционирование самих клеток.
Выявляются элементы формирования волокнистых структур.
Через 21 сутки после нанесения ран, по сравнению с предыдущим сроком, структура грануляционной ткани более зрелая, наиболее активными ее компонентами являются фибробласты, клеточные элементы крови, коллагеновые волокна.
Выявленные фибробласты находятся в активном морфофункциональном состоянии, в цитоплазме находятся расширенные цистерны ГЭР, содержащие материал низкой электронной плотности, большое количество митохондрий, часто наблюдается просветление матрикса, такие фибробласты имеют четкие контуры тела. Иногда во внеклеточном матриксе находятся гранулы высокой электронной плотности, образовавшиеся в результате дегрануляции нейтрофила. Здесь же может отмечаться контакт фибробласта с нейтрофилом, сегменты ядра нейтрофила и плотные гранулы располагаются свободно, что по нашему мнению также связано с его дегрануляцией (рис. 77).
Наряду с эти выявляются фибробласты с выраженными деструктивными изменениями, которые содержат волокнистый материал, в результате чего увеличивается электронная плотность цитоплазмы.
В исследованной микрофотографии находится кровеносный капилляр, в просвете которого находится эритроцит, ядро эндотелиоцита небольших размеров, сморщенное с неровными контурами, в цитоплазме много расширенных цистерн ГЭР.
Интерес представляет изучение структуры группы рядом расположенных фибробластов. В одном из них хорошо видно ядро, содержащее эухроматин и РНП гранулы, ядро имеет извилистую поверхность, перинуклеарное пространство расширено. Цитоплазма у фибробластов высокой электронной плотности, степень расширения цистерн ГЭР у них различная, у одних выражена больше в других меньше, эта тенденция отмечается и внутри отдельных клеток. Вдоль плазмолеммы цитоплазма приобретает гомогенный вид. В одном из фибробластов вдоль плазмолеммы располагаются микропиноцитозные везикулы, что свидетельствует об активных взаимоотношениях с межклеточным веществом (рис.78).
В этот срок, среди исследованных фибробластов выявляются клетки с сильно расширенными цистернами с материалом низкой электронной плотности. В цитоплазме этих клеток имеются прикрепленные рибосомы и свободные. Митохондрии разнообразной формы и размеров – в виде палочек или овальные, в отдельных из них видимы кристы. Внутренняя структура митохондрий разнообразна. Вокруг фибробласта выявляется полоса гомогенного материала, вокруг него располагаются пучки коллагеновых волокон идущих в различных направлениях. В коллагеновых фибриллах видна поперечная исчерченность. Между волокнами имеются остаточные тельца высокой электронной плотности.
При исследовании клеток расположенных рядом с кровеносным сосудом выявлено, что большая часть этих клеток это нейтрофилы, как правило, они имеют по 2-3 сегмента ядра. Цитоплазма заполнена гранулами неравномерно, они округлой или овальной формы, высокой электронной плотности. Ядро эндотелиоцита в активном морфофункциональном состоянии, так как большую часть кариоплазмы занимает эухроматин. Ядро имеет волнистые контуры и хорошо видимые поры, в цитоплазме клетки находится мелкогранулярный материал, рибосомы, небольшое количество митохондрий, кристы развиты слабо. Среди этих клеток практически в центре располагается эритроцит, характеризующийся высокой электронной плотностью, с большим темным ядром и более светлой цитоплазмой.
Кроме этого надо отметить, в эти сроки в ряде исследованных участков больше выражены деструктивные процессы. В кератиноцитах ядра сморщены, органеллы различимы слабо, в отдельных участках цитоплазмы имеются короткие трубочки ГЭР, между ними располагается небольшое количество рибосом. В дерме у фибробластов развиты цистерны ГЭР, они расширены и содержат хлопьевидный материал, в цитоплазме имеются остаточные тельца и небольшое количество лизосом. В одном из фибробластов содержится два ядра, одно из них в состоянии кариопикноза, второе небольших размеров с измененной поверхностью.
Выявлено, что в этот срок клетки грануляционной ткани активно контактируют между собой. Так при контакте двух фибробластов отмечено, что они имеют крупные ядра, в которых преобладает эухроматин, в крупных ядрышках имеется гранулярный компонент, поверхность ядра сильно измененная, цитоплазма имеет вид узкого ободка. Указанные признаки подтверждают интенсивную функциональную активность этих клеток. Между фибробластами располагаются коллагеновые волокна, идущие в различных направлениях.
Выявляются также контакты фибробластов и нейтрофилов, в таких фибробластах ядро морфо-функционально активное, имеет крупное ядрышко, в кариоплазме много РНП гранул, видимы многочисленные ядерные поры. В цитоплазме развиты цистерны ГЭР, они умеренно расширены. Контактирующий нейтрофил имеет три сегмента ядра, с небольшим количеством эухроматина и РНП гранул, в цитоплазме содержится много гранул различной формы и митохондрий. В рядом расположенных коллагеновых волокнах хорошо видна поперечная исчерченность (рис.79).
Таким образом, через 21 сутки после нанесения ран и четырех кратного применения мази МАОП-гель, ультраструктурные исследования показали, что происходит восстановление межклеточного вещества дермы, формирование зрелых коллагеновых волокон, усиливается функциональная активность клеточных структур, результатом, которого является активизация синтеза белков, обеспечивающих формирования структур соединительной ткани и нормального функционирования самих клеток. Восстанавливается капиллярная сеть кровеносных сосудов поврежденной дермы.
На 28 сутки после нанесения ран и применения мази МАОП-гель в области пальцев у крупного рогатого скота, основными активно функционирующими структурами в зоне заживающей раны являются фибробласты и коллагеновые волокна (рис. 80).
В исследованных в морфо-функционально активных фибробластах (рис.81), выявляется крупное, хорошо функционирующее ядро, с большим количеством эухроматина и РНП гранул, ядрышки этих клеток также крупные. В узком ободке цитоплазмы и имеются рибосомы, в отдельных местах плазмолемма имеет нечеткие контуры. В межклеточном веществе также встречаются фрагменты фибробластов, в которых эндоплазматическая сеть развита слабо, имеются свободные полисомы, вакуоли, плазмолемма не всегда четкая.
Коллагеновые волокна располагаются достаточно плотно друг к другу, иногда образуют толстые пучки высокой электронной плотности, по сравнению с предыдущим сроком они имеют больший диаметр (рис.82).
В некоторых исследованных зонах наряду с наличием активно функционирующего фибробласта, имеются клетки в состоянии некроза, вокруг которого располагаются гранулы нейтрофильного лейкоцита.
В межклеточном веществе среди коллагеновых волокон располагаются фрагменты клеток с цистернами ГЭР, причем большая часть клетки находится в состоянии некроза, в этих фрагментах отсутствует плазмолемма. В некоторых участках среди коллагеновых волокон располагается деструктивный материал, образовавшийся в результате некроза клеток.
Продолжение · 10
Ув. 48000.
Ув.72000.
МАОП-гели. Фрагменты нейтрофильных лейкоцитов, макрофаг. Фиксация микробов в фаголизосоме макрофага.
Ув. 72000.
Ув.48000
Ув.10000.
Ув.10000.
Ув.48000.
Группа активно функционирующих фибробластов. Пиноцитозные везикулы. Пучки коллагеновых волокон в межклеточном пространстве.
Ув.72000.
Контакты фибробластов и нейтрофила. В фибробласте активное ядро и ядрышко. РНП гранулы, развитые цистерны ГЭР.
Ув.58000.
Коллагеновые волокна и фибробласты. Сканирующая электронная микроскопия. Ув. х 900. 39мм.
Активно функционирующие фибробласты. Развитая сеть коллагеновых
волокон. Ув. 72000.
Ув. Х 900. 39мм.
Таким образом, на 28 сутки после нанесения ран и применения МАОП-гели, клеточные элементы и волокнистые структуры находятся в активном морфофункциональном состоянии и соответствуют структуре зрелой грануляционной ткани, присущей для завершающей стадии заживления ран. Характерной особенностью для этого срока является плотное расположение коллагеновых волокон и увеличение их диаметра по сравнению с предыдущим сроком. В тоже время отмечаются и некоторые деструктивные элементы, свойственные для поверхностных слоев грануляционной ткани, неэпителизированных поверхностей раны.
5 Обобщение полученных результатов
Лабораторная диагностика гнойно-некротических процессов проводилась методом гистологического, гистохимического и ультраструктурного анализа биопсийного материала с центра, периферии и отсупя на 2см. от края очага поражения, контролем служили кусочки тканей полученные в интактной области здоровых конечностей.
Гистологически в центре язв установлено, что эпидермис сохраняется частично, сохранившиеся участки в состоянии акантоза, в поверхностных его слоях наблюдается гиперкератоз, клетки эпидермиса в состоянии кариопикноза и кариолизиса, состояние диструкции клеточных элементов выявляется во всех слоях эпидермиса, но более выражено в поверхностных слоях. Отмечается расслоение эпидермиса, образование между слоями пространств и щелей
Оголенная часть дермы, инфильтрированна полиморфно-ядерными клетками. Соединительнотканные волокна в состоянии мукоидного набухания и гиалиноза. В глубоких слоях инфильтрация исчезала, но разволокнение, отеки и декомплексация соединительной ткани сохранялись. В глубоких слоях дермы структура тканей была близкой к нормальной, потовые железы кистозно изменены, сосочковый слой также обильно инфильтрирован полиморфно-ядерными лейкоцитами, юными клетками соединительной ткани, моноцитами, гистиоцитами, лимфоидными клетками. В сетчатом слое они располагались вокруг кровеносных сосудов.
Аналогичные изменения происходят и на периферии язвы, эпидермис находится в состоянии акантоза, а при переходе на поверхность язвы роговой слой истончается, в нем появляются вакуоли, кровоизлияния, а затем и клеточный инфильтрат. Эпидермис и коллагеновые волокна в состоянии отека и разволокнения. Сосочковый слой дермы обильно инфильтрирован полиморфноядерными лейкоцитами, юными клетками соединительной ткани, моноцитами, гистеоцитами. В сетчатом слое инфильтрация выражена вокруг кровеносных сосудов. Альтерация выражена слабо, она проявляется в виде некроза и дистрофии эпителиальных клеток и фибробластов. В большей степени выражены элементы клеточной инфильтрации. В приграничной области появляются элементы пролиферации в виде юных фибробластов.
Таким образом, морфологические изменения при язвенных процессах характеризуются некротическими и деструктивными изменениями в эпидермисе и дерме, тяжесть которых зависит от стадии развития язвы. В то же время в приграничной области выявляются элементы формирования клеточного барьера.
При заживлении язвы, происходит восстановление компонентов эпидермиса и дермы, в начальном этапе отмечается их некоторое несовершенство - инвагинации, складчатость. В это время отмечается интенсивный рост кровеносной системы, активное формирование волокнистого компонента дермы.
Гистологические изменения при пододерматите характеризуются отеком и разволокнением эпидермиса и соединительной ткани основы кожи. Изменения эпидермиса проявляются в виде его разрушения и дистрофии, в местах его сохранения отмечается инфильтрация полиморфноядерными клеточными элементами. В соединительнотканном компоненте основы кожи копытец при пододерматите отмечаются гиперемии, инфильтрация, кровоизлияния, отек разволокнение и мукоидное набухание коллагеновых волокон. В результате воспалительной реакции происходит отслоение копытного рога от основы кожи копытец.
Проведенные гистологические исследования позволяют проследить механизм развития язвенных процессов, определить глубину некротических и дистрофических изменений клеточных элементов, волокнистых структур и состояние межклеточного вещества.
Электронно-микроскопическими исследованиями установили ультраструктурные изменения непосредственно в очаге формирования язвы, и состояние тканей и клеточных структур в приграничной с ней области дермы. Эти исследования позволяют определить интимные изменения во всех структурах и компонентах соединительной ткани при развитии гнойно-некротических процессов.
Характер некротических, дистрофических или регенеративно-восстановительных процессов определяли не только по состоянию клеточных элементов и волокнистых структур, но также устанавливали характеристики состояния гиалоплазмы, мембранной системы, включающей эндоплазматический ретикулум, аппарат Гольджи, митохондрии, наличие и состояние включений и органелл.
На периферии язвы основными выявленными клеточными элементами являются эпителиальные клетки - кератиноциты, фибробласты, макрофаги, тучные клетки, нейтрофилы, сосудистые клетки – эндотелиоциты, эритроциты; волокнистые элементы – представлены коллагеновыми волокнами.
Проведенные нами исследования показали, что клеточные элементы на периферии язв находятся в состоянии различного морфофункционального напряжения, некротических и дистрофических изменений. Эти изменения характерны для практически всех клеточных элементов. Некротические изменения в клетках характеризуются кариопикнозом и кариолизисом, фрагментацией, некрозом участков цитоплазмы, наличием остаточных телец, количество рибосом и полисом уменьшено. В таких клетках ядра сильно изменяют форму, по периферии которого образуются выступы и отростки, количество гетерохроматина превышает содержание эухроматина. Ядрышки в них располагается эксцентрично, перинуклеарные пространства расширены. Эти изменения, по нашему мнению, в последующем приводят к некрозу клетки.
Значительные изменения выявляются в мембранной системе клеток, при этом цистерны ГЭР сильно расширены, содержат материал различной электронной плотности, митохондрии набухшие, с укороченными, фрагментированными кристами, аппарат Гольджи находится в нереактивном состоянии, происходит его уплотнение, фрагментация микропузырьков.
Деструктивные изменения на периферии язвы характеризуются развитием зернистой дистрофии в цитоплазме и фибриноидного набухания в межклеточном веществе.
В межклеточном веществе различных участков дермы на периферии язвы обнаруживается деструктивный хлопьевидный материал, различной электронной плотности, с полным отсутствием коллагеновых волокон, у некоторых участках с частичным их сохранением на этом фоне в некоторых участках обнаруживаются микробы различной формы и размеров, в некоторых случаях микробы находятся и в самих клетках.
В кровеносных капиллярах, эндотелиальные клетки находятся в состоянии различного морфофункционального напряжения, в некоторых ядрах выявляется реактивное состояние, они образуют изгибы, ядрышки также неправильной формы, окружены большим количеством РНП гранул. Цитоплазма высокой электронной плотности, с большим количеством рибосом, обеспечивающих синтез белка.
Таким образом, выявленные изменения позволяют проследить последовательность некробиотических изменений в клетках. Кроме этого некротические и дистрофические изменения ядерных структур, мембранной системы органелл и включений нарушают синтез белков, РНК, коллагеновых волокон, нарушаются обменные процессы, выделительная и секреторные функции.
В то же время нужно отметить, что клеточные элементы на периферии язвы находятся в различной степени дифференциации, а также выявляются клетки в активном морфофункциональном состоянии, контактирующие с себе подобными клетками или другими структурными элементами.
Клеточные элементы, находящиеся в активном состоянии, имели сложную поверхность из-за отростков различной длины и формы, с крупным светлым ядром, состоящих преимущественно из эухроматина, в которых располагались различной величины и формы ядрышки, количество их могло быть от одного до четырех, с обилием РНП гранул, в кариоплазме содержится много мелкозернистого материала из рибосом. Эти изменения отражают очень высокий уровень синтеза РНК. Кариолемма имела сложное строение из-за изгибов и выростов в связи с углублением цитоплазмы в ядро. Вокруг ядра образуются светлые зоны. Выявляются органеллы общего значения, пучки тонофибрилл, обилие свободных рибосом, имеются вакуоли разных размеров, в митохондриях хорошо представлены кристы, что является признаком интенсивности синтеза АТФ и свидетельством хорошего энергетического обмена. В таких клетках ярко выражены регенеративные процессы.
Активным функциональным состоянием отличались юные клеточные элементы, имеющие большой объем цитоплазмы, крупное ядро, хорошо развитые цистерны ГЭР и аппарат Гольджи и митохондрии.
Последовательное исследование клеток различной дифференциации позволило отследить стадии формирования цитоскелета, что определяется характером свободных рибосом, пучков тонофибрилл и митохондрий. Наличие пучков тонофибрилл и их тонкое строение, активное состояние митохондрий определяемое по содержанию зернистого материала и крист, свидетельствует о нормальной функциональной деятельности некоторых исследованных участков.
На периферии язвы, наряду с клетками, сохранившими активное морфофункциональное состояние, выявляются клетки выполняющие функцию фагоцитоза деструктивного материала и микробов.
Таким образом, на периферии язвы наряду с некротическими и дистрофическими процессами клеточных, волокнистых структур и межклеточного вещества, сохраняются элементы, и структуры в активном функциональном состоянии, отмечаются некоторые регенеративные процессы, выявляются признаки барьеризации очага поражения.
В отличие от периферии в центре язвы дистрофические и некротические изменения выражены более значительно. Количество клеток находящихся в состоянии некроза в центре язвы встречается более часто, при этом их ядра фрагментированы, состоят из гетерохроматина, кариолемма и плазмолемма разрушены, в цитоплазме отмечается почкование и бесструктурные зоны, хлопьевидный материал, в них отмечается наличие остаточных телец, расширение перинуклеарных пространств и цистерн ГЭР, в цитоплазме обнаруживаются различных размеров фагосомы, содержащие миэлиновые образования, являющиеся результатом деструкции мембранных органелл. Остальные органеллы имеют едва различимые контуры. Количество митохондрий незначительно. В клетках и в межклеточном веществе отмечается наличие микробов расположенных группами, выявляются элементы их размножения, отдельные контактируют с плазмолеммой клетки, в образовавшихся отростках клетки иногда содержится по несколько микробов, которые затем отторгаются от нее. Это, по нашему мнению, является отражением локального некроза. В ряде клеток отмечается зернистая дистрофия.
Сохранность коллагеновых волокон в центре язвы также неравномерна и функциональное состояние их различно.
Некротические процессы в центре язвы имеют тенденцию распространения в глубину.
В тоже время нужно отметить, что даже при наличии значительных некротических и дистрофических процессов в центре язвы, часть клеточных элементов сохраняет активное функциональное состояние.
Активное состояние клеточных элементов наряду с этим, проявляется наличием контактов плотного типа между отдельными клетками, в этих участках вдоль плазмолеммы клеток располагаются микропиноцитозные везикулы, что свидетельствует об активном обмене с окружающим межклеточным веществом и клетками.
Кроме этого выявляется активное состояние сосудистой системы капиллярного типа. Наряду с нормально функционирующими капиллярами, встречаются капилляры закрытого типа. В эндотелиальных клетках этих капилляров ядра находятся в активном морфофункциональном состоянии, округлой формы, содержат больше эухроматина, и множество РНП гранул. В кариолемме видны ядерные поры, поверхность ее имеет небольшие изгибы, перинуклеарные пространства расширены. В цитоплазме содержатся протофиламенты и свободные рибосомы и полисомы, отдельные из них располагаются на кариолемме. Благодаря наличию этих рибосом обеспечивается синтез белка и дальнейший рост капилляра.
Таким образом, на периферии и в центре язвы одновременно происходит развитие некротических, дистрофических и регенеративно-восстановительных процессов и характер их проявления, определяет течение процесса, тенденцию к прогрессированию язвы или склонностью при определенных условиях к заживлению. Эти условия определяются, прежде всего, внешними факторами, дополнительного воздействия на пораженные ткани или их устранения в процессе лечебно-профилактических процедур, состоянием общей резистентности организма, наличием и формированием полноценного клеточного и иммунного барьеров.
В приграничной с язвой области кожи, определялись все виды клеточных элементов эпидермиса и дермы, в различном функциональном состоянии и дифференциации. Проведенные исследования показывают, что в коже вокруг язвы, в условиях сохранения целостности эпидермиса и дермы, наряду с активно функционирующими клеточными элементами и волокнистыми структурами, отмечаются некротические и деструктивные изменения структуры соединительной ткани, способствующие в последующем, при определенных условиях, распространению развития язвенных процессов. Клеточные элементы находятся в различной степени дифференциации, выявляются как юные формы, так и зрелые. В приграничной области наряду с элементами формирования клеточного барьера формируются иммунные комплексы.
В исследованных интактных участках кожи области пальцев здоровой конечности у крупного скота клеточные элементы, мембранная система, волокнистые структуры находятся в активном функциональном состоянии.
Выявленные клеточные элементы и волокнистые структуры находятся в различной степени дифференциации, особую активность в этом плане проявляют фибробласты. В коллагеновых волокнах отмечается послойная дифференциация, характерная для сосочкового и сетчатого слоев дермы. Таким образом, проявляется стабильное функциональное состояние кожи. Такое состояние выражается активной синтетической деятельностью клеток, активацией обменных и секреторных процессов, выявляются признаки амитоза, что по определению Щелкунова С.И. (Клишов А.А. 1964), является одним из проявлений жизнедеятельности клетки, поддерживающих и регулирующих ее специфическую деятельность и повышающей рабочую производительность ткани.
Таким образом, клеточные элементы, мембранная система и волокнистые структуры здорового участка кожи области пальцев у крупного рогатого скота, характеризуются активными синтетическими, секреторными, обменными процессами, стабильным морфофункциональным состоянием.
Электронно-микроскопическими исследованиями установлено, что при пододерматитах основа кожи копытец, представлена структурой формирующейся грануляционной ткани, со всеми элементами рыхлой соединительной ткани. Кроме этого, при активно формирующихся и дифференцирующихся клеточных элементах и волокнистых структурах, отмечаются деструктивные и некротические процессы, характерные для структуры соединительной ткани при репаративной регенерации.
Продолжение · 11
Электронно-микроскопическими исследованиями при заживлении экспериментальных ран в области пальцев после применения мази левомеколь, в различные сроки установлено, что через трое суток после нанесения ран, клеточные элементы и межклеточное вещество, находятся в состоянии некротических и деструктивных изменений, но при этом ядра сохраняют генетический потенциал, некоторые находятся в активном функциональном состоянии, выявляются элементы компенсаторно-приспособительных процессов. Через семь суток после нанесения ран и двукратного применения мази левомеколь, в тканях сохраняются некротические и деструктивные процессы. В тоже время отмечается активное функциональное состояние клеточных элементов, их дифференциация, особенно фибробластов, в которых выявляется активный синтез РНК и ДНК и идет интенсивное формирование молодых соединительно-тканных клеток. Выявляется процесс развития капиллярной сети формирующейся грануляционной ткани. Сохраняется серозно-фибринозный отек тканей. Исследования, проведенные на 14 день после нанесения ран и трехкратного применения мази левомеколь, показывают, последовательность формирования структуры грануляционной ткани ран, за счет дифференциации клеточных элементов, волокнистых структур и межклеточного вещества. Эти изменения протекают на фоне усиления синтеза белка используемых для формирования компонентов грануляционной ткани, и белков обеспечивающих активное функционирование самих клеток. Через 21 сутки после нанесения ран клеточный состав, волокнистые структуры и межклеточное вещество соответствуют формирующейся зрелой грануляционной ткани. Клетки находятся в активном функциональном состоянии, усиленно синтезируют белок, отмечается барьеризация зоны воспаления. На 28 сутки после нанесения ран происходит завершающая стадия заживления раны, заканчивающаяся ее полной эпителизацией. Клеточные элементы сохраняют высокую степень активности, восстанавливаются волокнистые структуры соединительной ткани.
Ультраструктурные исследования показывают через трое суток после нанесения ран и первого применения мази МАОП-гель, по сравнению с контрольными ранами, где использовали мазь левомеколь, опытные различаются более широким спектром активно функционирующих клеточных элементов – нейтрофильных лейкоцитов и макрофагов. Значительно подавлена активность микробов, за счет фагоцитарной деятельности макрофагов. Усиливающиеся контакты между отдельными клетками и группами клеток, показывают на повышение обменных процессов в клетках. Через 7 суток после нанесения ран, и повторного применения мази МАОП-гель, выявляется формирующаяся грануляционная ткань, со всеми активно функционирующими структурами и некоторыми элементами деструктивных изменений. Наиболее активными клеточными элементами в этот срок являются фибробласты, макрофаги, гранулоциты, эпителиальные клетки, в них отмечается активный синтез белка, идущего на формирование волокнистых структур и белков, обеспечивающих функционирование самих клеток. Эти особенности по сравнению с контрольными ранами определяют более зрелый характер формирующейся грануляционной ткани в опытных ранах. Через 14 суток, после нанесения ран и трехкратного применения МАОП-гели, по сравнению с контрольными ранами, менее выражены некротические и деструктивные процессы в клеточных элементах, они активно функционируют, а коллагеновые волокна имеют, более зрелый и дифференцированный характер, в то время как при применении мази левомеколь, формирование их носит очаговый характер. Через 21 сутки после нанесения ран и четырех кратного применения мази МАОП-гель, ультраструктурные исследования показали, что происходит восстановление межклеточного вещества дермы, формирование зрелых коллагеновых волокон, усиливается функциональная активность клеточных структур, результатом, которого является активизация синтеза белков, обеспечивающих формирования структур соединительной ткани и нормального функционирования самих клеток. Восстанавливается капиллярная сеть кровеносных сосудов поврежденной дермы. На 28 сутки после нанесения ран и применения МАОП-гели, клеточные элементы и волокнистые структуры находятся в активном морфофункциональном состоянии и соответствуют структуре зрелой грануляционной ткани, присущей для завершающей стадии заживления ран. Характерной особенностью для этого срока является плотное расположение коллагеновых волокон и увеличение их диаметра по сравнению с предыдущим сроком. В тоже время отмечаются и некоторые деструктивные элементы, свойственные для поверхностных слоев грануляционной ткани, неэпителизированных поверхностей раны.
Таким образом, проведенные электронно-микроскопические исследования показали, что применение МАОП-гелевой мази оказывает более благоприятное, по сравнению с мазь левомеколь, влияние на заживление экспериментальных ран, при этом активизируется белковая синтетическая деятельность клеточных элементов грануляционной ткани, обменные и секреторные функции, фагоцитарная деятельность. Применение МАОП-гели способствует более раннему очищению ран от мертвых тканей, ускоряет созревание грануляционной ткани, эпителизацию и заживление ран.
Заключение
Использование патоморфологических исследований при диагностике и дифференциальной диагностике гнойно-некротических поражений в области пальцев, а также по результатам использования тех или иных лечебных процедур, дают наиболее объективные сведения о характере изменений в тканях, позволяют выявить патогенез течения этих процессов, определить течение дегенеративных, некротических и регенеративно-восстановительных процессов в самой структуре соединительной ткани и в отдельных ее клеточных компонентах и волокнистых структурах.
Основанием для выбора того или иного метода лечения могут служить признаки выявленные ультрастрктурными исследованиями, например, более ранняя дифференциация клеточных элементов, без формирования зрелых коллагеновых структур, приводит к интенсивной репаративной регенерации и образованию фунгозных грануляций, особенно в участках тела, где дерма непосредственно располагается над твердой костной основой, что характерно для дистального отдела конечности. В связи с этим, при ранее применяемых методах лечения гнойно-некротических процессов в области пальцев, интенсивный рост грануляций регулировался использованием препаратов обладающих прижигающим действием и давящими повязками.
По нашим данным, при применении МАОП-гели, по сравнению с мазью левомеколь, ультраструктурно выявлено более раннее с недельным опережением формирование зрелых пучков коллагеновых волокон. Поэтому применение гелевой мази исключает развитие фунгозных грануляций, которые формируются при использовании мазей приготовленных на другой основе – рыбьем жире, вазелине, ланолине.
По результатам наших электронно-микроскопических исследований выявлена значительная патогенная роль микрофлоры в язвах и ранах, которая локализуется и находится в активном морфофункциональном состоянии в различных клеточных структурах и межклеточном веществе. Регенерация тканей, клеточных элементов, волокнистых структур, активация структуры сети капиллярного кровоснабжения, белковая синтетическая активность органелл, обменные процессы в клетках и межклеточные, значительно улучшаются в тканях свободных от микрофлоры или находящихся в состоянии активного фагоцитоза. При значительной обсемененности микробами тканей, клеточных структур, межклеточного вещества в большей степени проявляются признаки кариопикноза, кариолизиса, распад коллагеновых волокон.
Таким образом, необходимым элементом комплексной диагностики ортопедической патологии является проведение патоморфологических обследований, включающих гистологические, гистохимические, электронномикроскопические исследования.
8. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
1. Абдуллаев Д.В. Паракератоз крупного рогатого скота /Д.В. Абдуллаев, Э.Ф. Абсалямов, М.А. Риш // Ветеринария. – 1979. – № 5. – С. 55 – 56.
2. Абдраимов М.Т. Стираемость копытец коров бурой латвийской породы на решетчатых полах разной конструкции / М.Т.Абдраимов //Тр.Целиноградского СХИ.- Целиноград.-1986.Т.69.-С.69-75
3. Авроров В.Н. Сущность и классификация травматизма в промышленном животноводстве/ В.Н. Авроров // Ветеринария. – 1992. -№ 5. – С. 48 – 50.
4. Амаджанов М.М. Некоторые вопросы этиологии и профилактики болезней копытец у коров в условиях молочных комплексов./ М.М. Амаджанов // Сб. науч. тр. Ленинградского ветеринар. ин-та. Л., 1989.-т.102.-С.12-14.
5. Анисин И.А. Заживление ран у крупного рогатого скота под воздействием постоянного магнитного поля / И.А. Анисин И.А., Э.И.Веремей // Диагностика, патоморфология, патогенез и профилактика болезней в промышленном животноводстве. Ч.1. Саратов.- 1990.- С. 93-94.
6. Анюлис Э.Ю. Иммобилизированный ферментный препарат для лечения гнойно-воспалительных процессов у коров / Э.Ю.Анюлис // Материалы конференции. М. – 1990.-С.169-170
7. Азизов Н.М. Раствор тетравита при лечении ран /Н.М.Азизов, Х.Р.Халилов // Ветеринария. – 1989. - № 4. – С. 51 – 52.
8. Алиев Д.Н. Нафталанская нефть при хирургических болезнях буйволов /Д.Н. Алиев // Ветеринария. – 1984. - № 9. – С. 60.
9. Анакина Ю.Г. Причины и пути предупреждения болезней конечностей у скота в условиях интенсивной технологии. Обзор иностранной литературы /Ю.Г.Анакина // Ветеринария. – 1989.- С.68-70.
10. Анюлис Э.Ю. Применение процеля для лечения гнойных ран / Э.Ю. Анюлис, П.И. Расимас, А.Ю Раулинайтис // Ветеринария.- 1988. - № 3. – С. 50 – 52.
11. Ахмаджанов М.М. Некоторые вопросы этиологии и профилактики болезней копытец у коров в условиях молочных комплексов/ М.М. Ахмаджанов // Сб.науч. тр. Ленингр.вет. ин-та.- Л. / 1989.- Т. 102.- С. 12-14.
12. Байлов В.В. Внутрикостная инъекция антибиотиков при болезнях копытец у телят/ В.В. Байлов, А.В.Лебедев // Ветеринария. – 1989. - № 3. – С. 53 – 54.
13. Баймишев Х.Б. Роль двигательной активности в профилактике заболеваний копытец крупного рогатого скота в условиях промышленных колмплексов / Х.Б.Баймишев // Селекция и технололгические основы повышения продуктивности животных. Ульяновск. 1988.-С.42-44
14. Байтубаев Е.Г. Резекция проксимальной фаланги пальца у крупного рогатого скота / Е.Г. Байтубаев // Ветеринария. – 1986. - № 7. – С. 63 – 64.
15. Балаев В.А. Активный моцион обязателен / В.А. Балаев // Ветеринария. – 1989. – С. 12.
16. Баланин В.И. Микроклимат животноводческих зданий / В.И.Баланин /.-С.Пб.: Профи КС.- 2003.-140 с.
17. Барсуков Н.А. Лечение инфицированных ран / Н.А. Барсуков // Ветеринария. – 1986. - №8.-С. 68 – 69.
18. Башкиров Б.А. Этиопатогенез, лечение и профилактика Язвы Рустерхольца у коров / Б.А.Башкиров, В.И.Скрипник // Сб. науч. тр. Ленинградского ветеринарного института.- Л. – 1989. № 102. - С.26-30.
19. Беликова В.А. Бычки на откорме / В.А.Беликова // Животновод .- 1996. - № 3. – С. 24.
20. Белошицкий В.Н. Возраст и причины выбытия бычков черно-пестрой породы на крупном специализированном элевере по выращиванию и оценке быков по качеству потомства /В.Н.Белошицкий //Бюл.ВНИИ разведения и генетики с.-х. животных.1985.Т.81.-С.10-13
21. Богдан И.Д. Рост и стирание копытцевого рога / И.Д. Богдан, Т.З. Богдан // Ветеринария. – 1976. - № 6. – С. 85 – 87.
22. Борисевич В.Б. Строение копытец в норме и при деформациях / В.Б. Борисевич, А.И.Поживил, Авимбила Баба. // Ветеринария. – 1972. – С. 93 – 94.
