Продолжение · 4
Первоначальными клиническими признаками развития пододерматита являются хромота, значительное повышение местной температуры, развитие припухлости, усиление пульсации сосудов больного пальца, болезненность. Явно выраженные клинические признаки отмечаются при остром течении процесса. При хронических пододерматитах наиболее выраженными клиническими признаками являются - нарушение функции конечностей и деформация больного пальца (рис.8).
Причинами деформаций копытец при хронических пододерматитах, по нашему мнению, является нарушение процесса рогообразования и отсутствие нагрузки на больное копытце, так как животное старается не опираться на больной палец, что исключает его естественное стирание. А так как процесс может продолжаться многие месяцы, то отмечается явное несоответствие пропорций здорового и больного копытца.
При исследовании деформированных копытец часто устанавливаются дефекты копытного рога в виде трещин, выявляются щели в подошвенной части и медиальной стенки копытца, образовавшиеся в результате отслоения копытного рога от основы кожи.
В некоторых случаях при внешнем визуальном осмотре деформированных копытец никаких нарушений целостности копытного рога не отмечаются. Но при диагностической расчистке и обрезке, в значительно утолщенной подошве, обнаруживаются в несколько этажей щелевидные полости, с серо-коричневыми остатками засохшего экссудата, чешуйчатой формы.
По нашему мнению, эти полости образуются при обострении хронически протекающего пододерматита, в острый гнойный поверхностный пододерматит, с отслоением рога подошвы от основы кожи, и образования полости заполненной гнойным экссудатом, в последующем течение процесса нормализуется, происходит регенерация рога подошвы, экссудат рассасывается, в результате этого в полости сохраняются остатки гноя, окрашенные пигментами рога.
При наличии дефекта копытного рога, восстановление его происходит очень медленно, на этом фоне, даже относительно медленный рост грануляционной ткани, через некоторое время приводит к развитию фунгозных грануляций. Которые в последующем препятствуют восстановлению дефекта. В связи с этим при лечении пододерматитов одним из принципов является регуляция роста грануляций
3.1.3 Гистологические и гистохимические показатели гнойно-некротических поражений копытец у крупного рогатого скота.
Материал для гистологических исследований получали с центра или периферии язв. При гистологическом исследовании пораженных тканей в области венчика установили, что в центре язвы эпидермис имел признаки акантоза и сохранялся только на небольших участках поверхности кожи. Количество клеток эпидермиса с признаками кариопикноза и кариолизиса (рис.5) увеличивалось в поверхностных слоях. Между клетками зародышевого и базального слоя выявляли пространства и щели, зародышевые клетки имели зернистую цитоплазму.
Поверхностный слой эпидермиса расслоен, приобретает эозинофильные свойства. Более глубокая часть рогового вещества напротив базофильна, с выраженными фуксинофильными свойствами, но тоже с многочисленными щелями между клеточными слоями. Таким образом, наблюдается гиперкератоз. Светлый слой с эозинофильными свойствами, также имеет многочисленные щели.
Зернистый слой характеризуется наличием большого количества погибших пикнотизированных клеток, наряду с клетками имеющие крупные зерна рогового вещества.
В шиповидном слое также относительно много клеток с пикнотичными ядрами. Клетки базального слоя с крупными светлыми ядрами и крупными ядрышками. Ядра расположены эксцентрично, они чаще несколько вытянутой формы. Отмечается наличие фигур амитоза. Необходимо отметить, что шиповидный слой относительно тонкий.
Видимо дифференциация, и ороговение клеток происходит относительно быстро, что также является признаком гиперкератоза.
Остальная часть поверхности была оголена и представлена дермой, инфильтрированной полиморфно-ядерными клетками (рис.6).
Соединительнотканные волокна, расположенные ближе к поверхности, находились в состоянии мукоидного набухания, в этих участках развивался гиалиноз (рис.7).
В более глубоких слоях инфильтрация исчезала, но разволокнение, отеки и декомплексация соединительной ткани сохранялись (рис.8).
Дерма непосредственно под эпидермисом (сосочковый слой) хорошо кровоснабжается. Кровеносные сосуды были расширены и заполнены кровью, в стенках их выявлялись фиброзные изменения (рис.9), отмечали кровоизлияния. То же время сосуды микроциркулярного русла были спавшимися, выявляли много дегранулированных тканевых базофилов.
Сосочковый слой также обильно инфильтрирован полиморфно-ядерными лейкоцитами, юными клетками соединительной ткани, моноцитами, гистиоцитами, лимфоидными клетками (рис.10). В сетчатом слое они располагаются вокруг кровеносных сосудов (рис.11).
В глубоких слоях дермы структура тканей была близкой к нормальной, тогда как потовые железы кистозно изменены.
На препаратах окрашенных по Ван Гизон хорошо выражен эпидермис, в разной степени сохранности, окрашивающийся пикриновой кислотой в желтый цвет, кровеносные сосуды – в желтый цвет, коллагеновые волокна окрашиваются фуксином в красный цвет. В поверхностных слоях дермы наблюдаются набухшие разрушающиеся коллагеновые волокна,с обильной инфильтрацией между ними. В средних слоях дермы эти диструктивные изменения волокон соединительной ткани сохраняются, уровень инфильтрации уменьшается. Кровеносные сосуды фиброзно изменены. В более глубоких слоях структура соединительной ткани сохраняется: волокна приблизительно одинакового диаметра, идут в одном направлении с умеренным количеством фибробластов и фиброцитов.
На некоторых препаратах, в глубоких слоях дермы, в приграничных областях здоровых и пораженных тканей, выявляются слабо выраженные явления регенерации в виде появления юных круглоклеточных элементов соединительной ткани – фибробластов и фиброцитов.
На периферии язвы при гистологическом исследовании установили, что роговой слой утолщен, неравномерной толщины, окрашен по-разному. При переходе на поверхность язвы роговой слой истончается, в нем появляются вакуоли, кровоизлияния, а затем и клеточный инфильтрат. Он исчезает и эпидермис, содержащий много гибнущих клеток, также постепенно истончается. Эпидермис и коллагеновые волокна в состоянии отека и разволокнения .
В периферических частях язвы эпидермис глубоко проникает в дерму - акантоз, и характеризуется следующими признаками: обильно инфильтрирован полиморфноядерными лейкоцитам, располагающимися между эпителиальными клетками диффузно, ближе к поверхности кожи. Эпителиоциты хорошо сохранены, межклеточные пространства встречаются редко. Потовые железы кистозно изменены. Сосочковый слой дермы обильно инфильтрирован полиморфноядерными лейкоцитами, юными клетками соединительной ткани, моноцитами, гистеоцитами. В сетчатом слое инфильтрация выражена вокруг кровеносных сосудов.
Альтерация выражена слабо, она проявляется в виде некроза и дистрофии эпителиальных клеток и фибробластов. В большей степени выражены элементы клеточной инфильтрации. В приграничной области появляются элементы пролиферации в виде юных фибробластов.
Гистохимическими исследованиями установили, что в центре язвы и на периферии реакция по Фельгену и Браше была слабо положительной, реакция на гликоген – отрицательная.
гиалиноз соединительной ткани. Окраска по Ван Гизон.
Ок.10. Об.8.
Ок. 10. Об. 8.
Ок.10.Об.8.
инфильтрированы гистиоцитами и лимфоидными клетками.
Окраска гематоксилином и эозином. Ок. 10.Об.20.
сосудов. Окраска гематоксилином и эозином. Ок.10.Об.8.
Таким образом, гистологические изменения при язвенных процессах характеризуются дистрофическими и некротическими процессами в эпидермисе и дерме, в центре язвы разрушение эпидермиса явно выражено, на периферии происходит его истончение, в сохранившихся участках эпидермиса отмечается акантоз, гиперкератоз, клетки эпидермиса находятся в состоянии кариопикноза и кариолизиса, деструкция клеточных элементов выявляется во всех слоях эпидермиса, отмечается его расслоение, образование щелей и пространств. Собственно дерма инфильтрирована полиморфноядерными клетками. Соединительнотканные волокна в состоянии мукоидного набухания и гиалиноза. В глубоких слоях дермы структура тканей близка к норме, но инфильтрация, отек разволокнение тканей сохраняется.
Гистологические изменения после заживления язвы.
После заживления язв гистологически было установлено, что поверхность кожи покрыта роговым слоем, который умеренно развит и разделен на две зоны поверхностную чешуйчатую и светлую зоны (рис.12).
Базофильный и фуксинофильные зоны отсутствуют.
Далее в классическом порядке расположены эпителиальные клетки, переходящие в дерму.
В роговом слое имеются глубокие инвагинации не покрытые роговым веществом. Инвагинации заполнены роговым веществом в виде чешуйчатых закрученных роговых чешуек. Кроме этого на поверхности эпидермиса образуются микроскладки .
Эпидермис в некоторых участках источен и близко к поверхности подходят сосочки дермы. В базальном слое относительно много меланоцитов. В сосочковом слое очень развиты кровеносные сосуды. Они сильно извиты, с расширенным просветом, крови не содержат (13).
Сетчатый слой дермы фиброзно изменен, содержит толстые фуксинофильные волокна, с очень небольшим количеством клеток. Фактически напоминает рубец. Много меланина, там где его не должно быть, например, вокруг потовых желез, сосуды фиброзно изменены, с утолщенными стенками.
Таким образом, при заживлении язвы, происходит восстановление компонентов эпидермиса и дермы, в начальном этапе отмечается их некоторое несовершенство - инвагинации, складчатость. Положительным моментом является интенсивный рост кровеносной системы, формирование волокнистого компонента дермы.
Ок.10.Об.3.
Окраска гематоксилином и эозином. Ок.10. Об.3
Гистологические изменения при пододерматите.
В начальной стадии развития воспаления пододерматита в листочках основы кожи и листочках роговой стенки отмечается отек и разволокнение клеточных элементов и волокнистых структур (рис.14).
Следующим этапом развития воспаления является образования полости и скопления в ней экссудата (рис15), что в последующем приводит к отслоению роговой стенки (рис.16). При хроническом течении процесса, которое может продолжаться несколько месяцев, процесс распространяется на копытцевую кость и завершается его некрозом (рис.17).
Изменения в роговой стенке характеризуются следующими признаками: роговое вещество в состоянии дистрофии, эпидермис в различной степени сохранности (рис.18), в местах сохранения инфильтрирован полиморфноядерными лимфоцитами, сильно разволокнен. Кератогеалин имеет базофильную окраску, что свидетельствует об изменении его биохимических свойств и соответственно физико-химических.
листочков в состоянии отека и разволокнения. Окраска гематокселином и эозином.Ок.10.Об.3
основы кожи. Окраска гематоксилином и эозином.
Ок.10. Об.8.
Ок.10.Об.3.
Окраска гематоксилином и эозином. Ок.10.Об.8.
клетки в состоянии гидропической дистрофии.
Окраска гематоксилином и эозином.
Ок.10.Об.20.
коллагеновых волокон и кровоизлияния.
Окраска гематоксилином и эозином. Ок.10.Об.20
кровеносных сосудов. Окраска гематокселином и эозином. Ок.10. Об.8.
Зернистый слой эпидермиса хорошо выражен только там, где сохранено роговое вещество, но даже здесь много клеток в состоянии вакуолизации и гидроптической дистрофии (рис.19). Шиповатый и базальный слои в некоторых участках относительно хорошо сохранены, хотя в шиповатом слое имеются относительно крупные щели и вакуолизированные эпителиоциты. В целом рост эпителия нарушен, что проявляется в виде акантоза .
Гистологические изменения воспаления основы кожи характеризуются следующими признаками - сосочковый слой после разрушения эпидермиса покрыт густым обильным гнойным экссудатом, содержащим нейтрофилы, эритроциты, гнойные тельца, а также слизь, имеющую волокнистое строение и выраженные базофильные свойства.
Инфильтрат проникает по соединительнотканным сосочкам дермы глубоко в сетчатый слой дермы. Хорошо видны кровоизлияния, гиперемия, очаги разволокнения соединительной ткани (рис.20).
В дерме много сосудов радиально направляющихся к поверхности. Характерно наличие толстых пучков коллагеновых волокон идущих по направлению к поверхности и перпендикулярно к ним расположенных более тонких волокон образующих сеточку, между ячейками, которых лежат клеточные элементы.
Повсеместно отмечается отек соединительной ткани, кровеносные сосуды расширены, не содержат кровь, а вокруг них клеточный инфильтрат тем обильней, чем ближе к поверхности.
В сетчатом слое выражено мукоидное набухание коллагеновых волокон дермы и гиалиноз стенок кровеносных сосудов (рис.21). Они становятся базофильны, неравномерно окрашены, различной толщины.
Это хорошо видно при окраске по Ван Гизон.
При благоприятном асептическом течении воспаления он носит ограниченный характер, экссудат рассасывается, нормализуется рост эпидермиса, при этом происходит восстановление в полном объеме его клеточных элементов и волокнистых структур. Очаг воспаления сохраняется в виде щели, частично заполненной остатками гноя, чешуйчатой формы, светло коричневого цвета, придающему ему пигментами рога.
Таким образом, гистологические изменения при пододерматите характеризуются отеком и разволокнением эпидермиса и соединительной ткани основы кожи. Изменения эпидермиса проявляются в виде его разрушения и дистрофии, в местах его сохранения отмечается инфильтрация полиморфноядерными клеточными элементами. В соединительнотканном компоненте основы кожи копытец при пододерматите отмечаются гиперемии, инфильтрация, кровоизлияния, отек разволокнение и мукоидное набухание коллагеновых волокон. В результате воспалительной реакции происходит отслоение копытного рога от основы кожи копытец
3.1.4 Морфологические показатели спонтанных гнойно-некротических поражений копытец крупного рогатого скота с использованием электронной и сканирующей микроскопии.
Биопсийный материал для исследований брали с периферии и центра язвы. Контролем служили кусочки кожи, взятые отступя от края язвы на 2см и интактной области противоположной здоровой конечности.
Электронно-микроскопическими исследованиями при язвах в области пальцев у крупного рогатого скота установлены изменения всех соединительнотканных компонентов кожи – клеточных, волокнистых структур и межуточного вещества.
Электронно-микроскопические изменения на периферии язвы.
Исследованиями установлено, что на периферии язвы наиболее характерными изменениями клеток являются деструктивные изменения, характеризующиеся их кариопикнозом, кариолизисом, фрагментацией, в цитоплазме отмечаются признаки некроза, плазмолемма в некоторых клетках отсутствует. В некоторых клетках содержатся гранулы различной электронной плотности, в результате дегрануляции образуются вакуоли, содержание цистерн ГЭР и свободных рибосом незначительное, в некоторых цистерны ГЭР расширены. В межклеточном веществе выявляются микробы различной формы и размеров.
Сканирующей электронной микроскопией в эпидермисе установлено: мацерация, отек, разволокнение и отслоение эпидермиса от дермы (рис.22).
Как отмечают Кузнецов С.Л. и соавт. (2002), (по Котовскому Е.Ф.) из эпителиальных клеток 85% составляют кератиноциты, 10%-меланоциты, остальные – внутриэпителиальные макрофаги (клетки Лангенгарса) и осязательные клетки Меркеля.
Продолжение · 5
В связи с этим, в эпидермисе наиболее характерные изменения наблюдали в кератиноцитах, которые определялись различным их морфофункциональным состоянием.
В исследованных кератиноцитах отмечали наличие крупных ядер с сильно измененной формой, у некоторых по периферии образуются выступы в виде лопастей. Ядра обычно светлые, состоящие преимущественно из эухроматина, в кариоплазме много мелкозернистого материала из рибосом. Эти изменения отражают очень высокий уровень синтеза РНК (рис.23). Вокруг ядра образуются светлые зоны. Наблюдается расширение перинуклеарных пространств. Выявляются органеллы общего значения, пучки тонофибрилл, обилие свободных рибосом. В таких клетках ярко выражены регенеративные процессы, однако сохраняются и изменения реактивного характера – расширение перинуклеарных пространств и наличие бесструктурных участков.
Некоторые кератиноциты имели крупные ядра, в которых располагаются различной величины ядрышки, количество их может быть от одного до четырех, с обилием РНП гранул, что свидетельствует об активизации синтеза РНК (рис. 38). Количество эухроматина различно, может быть его преобладание, в этом случае гетерохроматин располагается в виде тонкой линии вдоль кариолеммы. Иногда в кератиноцитах находятся элементы комплекса Гольджи, в метахондриях матрикс просветлен.
В некоторых кератиноцитах, расположенных в зернистом слое, большая часть цитоплазмы заполнена тонофибриллами, часть расположена, рассеяно, часть образует пучки различного диаметра, имеет зерна кератогеалина, при этом встречаются участки деструкции цитоплазмы.
В центре некоторых клеток содержатся остаточные тельца – третичные лизосомы, заполненные пузырьками гранулами и мембранами. Имеются участки цитоплазмы, где структура нарушается и содержится гомогенный материал средней электронной плотности, кроме того, имеются вакуоли разных размеров, в митохондриях хорошо представлены кристы, что является признаком интенсивности синтеза АТФ (рис.24). Некоторые кератиноциты заполнены свободными рибосомами, в митохондрии имеют плотный матрикс, видимы кристы, размеры рибосом укрупняются, что является свидетельством активного синтеза белка.
Последовательное исследование кератиноцитов позволило отследить стадии формирования цитоскелета, что определяется характером свободных рибосом, пучков тонофибрилл и митохондрий. Наличие пучков тонофибрилл и их тонкое строение свидетельствует об интактном состоянии исследованных участков. Активное состояние митохондрий выявляет содержание зернистого материала и крист.
На некоторых микрофотографиях выявляются контакты кератиноцитов с другими клетками, при этом в кератиноците отмечается наличие тонофибрилл, расположенных в различных направлениях, в митохондриях имеются рибосомы с кристами. В контактируемой клетке содержится большое количество волокнистого материала, между филаментами располагается большие скопления рибосом. Митохондрии гипертрофированы и осмиофильны, с повышенной плотностью, имеются рибосомы и кристы. В некоторых кератиноцитах особенно привлекает внимание митохондрии с большим количеством крист, внутри митохондрии имеются рибосомы. В отдельных митохондриях имеются просветленные участки, которые образуются в результате вакуолизации матрикса. Полисомы располагаются свободно, тонофибрилллы образуют небольшие пучки на периферии клетки.
Иногда отмечаются контакты кератиноцитов с группой клеток - макрофагом и тучной клеткой (рис.25). В этом случае в кератиноците тонофиламенты объединяются в тонофибриллы, в цитоплазме имеется несколько вакуолей и множество свободных рибосом. В макрофаге гетерохроматин в небольшом количестве, располагается у кариолеммы, в кариоплазме имеются РНП гранулы. В цитоплазме много митохондрий с хорошо развитыми кристами и расширенные цистерны ГЭР. Рядом с ядром располагаются мембраны, микропузырьки комплекса Гольджи. Кроме этого в клетке выявляются осьмиефильные образования похожие на микробы. В ядре тучной клетки больше эухроматеина, чем гетерохроматина. Гранулы располагаются относительно свободно, на периферии их меньше, форма гранул неправильная, имеются светлые полосы, пузырьки образовавшиеся в результате дегрануляции. В тоже время надо отметить, что наряду с клетками находящимися в относительно удовлетворительным морфофункциональном состоянии, встречаются кератиноциты, в которых отмечается кариопикноз, кариолизис, фрагментация, в цитоплазме наблюдается состояние некроза, плазмолемма отсутствует. В некоторых подобных клетках содержатся гранулы различной электронной плотности, вакуоли, количество цистерн ГЭР и свободных рибосом незначительное.
Ув. 100. Мм. х 50. 39мм
Ув. 28000.
хорошо выражены кристы.
Ув. 20000.
Ув.28000
Деструктивные изменения в кератиноците характеризуются тем, что клетка имеет ядро с очень сильно измененной формой, по периферии которого образуются выступы в виде лопастей. Ядрышко располагается эксцентрично, перинуклеарные пространства расширены, в кариоплазме находятся РНП гранулы. Цитоплазма также характеризуется значительными деструктивными изменениями, имеется группа остаточных телец, гранулы рибосом находятся на расстоянии друг от друга, в этой связи клетка имеет светлый вид. После кератиноцита другой клеткой наиболее часто встречающейся на периферии язвы в области пальцев у крупного рогатого скота является фибробласт.
Фибробласты на периферии язвы находятся в различном морфофункциональном состоянии, в микрофотографиях они встречаются, единично, группами, а также в контакте с другими клетками
При их исследовании некоторых микрофотографий отмечается, что фибробласты имеют сложную поверхность, из-за отростков различной длины и формы. Ядра активны морфофункционально, гетерохроматина мало, ядрышки приобретают различную форму и размеры. В кариоплазме имеются РНП гранулы, отмечаются изгибы кариолеммы и выросты в связи с углублением цитоплазмы в ядро.
В некоторых фибробластах отмечается содержание свободных рибосом, цистерн ГЭР, митохондрий, при этом цистерны ГЭР сильно расширены, содержат материал средней электронной плотности, митохондрии набухшие, с укороченными кристами, эти изменения свидетельствуют о функциональном напряжении клетки (рис.27).
При исследовании двух рядом расположенных фибробластов, выявляется, что от цитоплазмы образуются отростки различной длины. В осмиофильном фибробласте комплекс Гольджи с значительной плотностью, в митохондриях имеются хорошо развитые кристы, что свидетельствует о хорошем, энергетическом обмене. В клетке низкой электронной плотности большое число цистерн гранулярного эндоплазматического ретикулума, с материалом средней электронной плотности. В межклеточном пространстве располагается хлопьевидный материал, коллагеновые волокна отсутствуют.
В других случаях, при контактах двух фибробластов отмечается, что у одного из них поверхность сложной формы, оно содержит большое количество гетерохроматина. В цитоплазме имеются полисомы, цистерны ГЭР, митохондрии, комплекс Гольджи, но плазмолемма слабо различима, в части цитоплазмы число органелл уменьшается. В другом фибробласте цистерны ГЭР сильно расширены, между ними наблюдается обилие полисом. В цитоплазме имеется участок, содержащий фрагменты коллагеновых волокон.
В некоторых случаях при контакте двух фибробластов, отмечается обилие рибосом, что свидетельствует об интенсивном синтезе белка. В митохондриях наблюдается укорочение крист, что определяет напряженную функциональную деятельность. В тоже время в отдельных клетках наблюдаются очаги некроза, которые отделяются от клетки, поэтому в межклеточном пространстве находятся фрагменты цитоплазматических отростков с деструктивным материалом. Полученные данные показывают, что в данном участке преобладают компесаторно-приспособительные процессы (рис. 28).
Кроме этого при исследовании некоторых групп фибробластов установили, что увеличение количества гетерохроматина указывает на снижение синтетической активности. У некоторых клетки имеют небольшой объем цитоплазмы, с цистернами ГЭР, рибосомами и фрагментами иммунных комплексов с четкими контурами, с расширенными перинуклеарными пространствами, что свидетельствует о напряжении функциональной деятельности. Здесь же в поле зрения наблюдаются фиброциты с узким ободком цитоплазмы, окруженные пучками коллагеновых волокон. В некоторых случаях рядом с фибробластами находились макрофаги, с большим количеством митохондрий, вакуолей, рибосом. Полученные данные свидетельствуют о том, что на периферии язвы формируются элементы клеточного и иммунного барьера, но в тоже время некротические и дистрофические процессы активно проявляются.
В ряде случаев отмечали контакты фибробластов с другими клетками, в частности при контакте с тучной клеткой у фибробласта выявляли ядро неправильной формы, образовавшееся в результате впячивания цитоплазмы, хорошо видимы ядерные поры, больше эухроматина, перинуклеарные пространства расширены. В цитоплазме имеются свободные рибросомы, цистрерны ГЭР умеренно расширены, в митохондриях кристы отсутствуют, имеется комплекс Гольджи. В данной клетке наблюдаются изменения реактивного характера. В тучной клетке наблюдается фрагментация ядра. В цитоплазме множество гранул плотно расположенных друг к другу, большинство гранул низкой электронной плотности. Место контакта имеет повышенную электронную плотность.
При исследовании фибробластов с периферии язвы установили, что они находятся в различной степени дифференциации.
В юных фибробластах хорошо развиты цистерны ГЭР и аппарат Гольджи (рис. 29).
Кроме этого при гнойно-некротических процессах встречаются миофибробласты, по нашим данным эти клетки характеризуются наличием свободных рибосом, митохондрий, цистерн ГЭР, протофиламенты располагаются преимущественно по периферии. В митохондриях кристы развиты хорошо, полисомы образуют скопления и имеют высокую электронную плотность. Цитоплазма, таким образом, разделена на зоны с высоким уровнем синтеза белка и зоны с протофиламентами.
Наряду с этим, в данной зоне встречались миофибробласты с значительными деструктивными изменениями, при этом наиболее сильные изменения отмечались в ядре, изменения касались и кариолеммы, внутренний листок его различим, отмечается наличие широкой бесструктурной зоны между гетерохроматином и наружным листком кариолеммы, наблюдается кариолизис отдельных участков ядра (рис.30). В цитоплазме содержатся полисомы, миофиламенты, митохондрии. Таким образом, мы наблюдаем последовательность некробиотических изменений в клетке.
На периферии язвы, кроме кератиноцитов и фибробласт, выявляли макрофаги, тучные клетки, нейтрофилы, сосудистые клетки, клетки крови.
Исследованные макрофаги находились в различном морфофункциональном состоянии. В некоторых макрофагах отмечали, что ядро изменено и утолщено, с большим количеством гетерохроматина и в состоянии кариопикноза, в цитоплазме содержится много свободных рибосом, имеется небольшое количество цистерн ГЭР, в околоядерной области располагается группа остаточных телец. Наличие этих структур, можно рассматривать, как макрофаг – коллагеннокласт, в межклеточных пространствах находятся коллагеновые волокна. Клетка имеет удлиненную форму, в цитоплазме находятся фибриллярные структуры в продольных и поперечных разрезах.
Эндотелиоциты интенсивно осуществляющие синтез РНК, содержат очень крупное ядрышко, с большим количеством гранулярного материала, РНП гранулы равномерно размещены по кариоплазме. В ядре гетерохроматина очень мало, он располагается у внутреннего листка кариолеммы в виде узкой линии, перинуклеарные пространства расширены.
В других случаях выявляются молодые формы макрофагов, у которых отмечается обилие митохондрий с развитыми кристами, имеются умеренно расширенные цистерны ГЭР, от поверхности образуются небольшие цитоплазматические выросты, наблюдаются процессы фагоцитоза (рис.31).
При электронно-микроскопических исследованиях кровеносных капилляров, на периферии язвы установлено, что эндотелиальные клетки находятся в состоянии различного морфофункционального напряжения, в некоторых ядрах выявляется реактивное состояние, они образуют изгибы, ядрышки также неправильной формы, окружены большим количеством РНП гранул. Цитоплазма высокой электронной плотности, с большим количеством рибосом, обеспечивающих синтез белка. Митохондрии с уменьшенным содержанием крист. На люминальной и базальной поверхности стенки кровеносного капилляра образуются микроворсинки (рис. 32, 33). В других эндотелиоцитах ядра в активном морфофункциональном состоянии, гетерохроматин располагается на периферии, в кариоплазме много РНП гранул. Цитоплазма характеризуется высокой морфофункциональной активностью, содержит митохондрии, цистерны ГЭР, рибосомы, фагосомы, лизосомы и микропиноцитозные везикулы, тонофибриллярный материал находится на периферии.
Из клеток крови встречаются эритроциты, находящиеся как в сосудах, так и вне их, различной электронной плотности, иногда образуются их скопления, контактирующие с другими клетками, в которых хорошо развит белоксинтезирующий аппарат (рис.34).
При исследовании эритроцитов находящихся вне сосудов, вокруг них обнаруживается фибриллярный материал, образовавшийся в результате деструкции коллагеновых волокон, фибробласты, содержащие умеренное количество цистерн ГЭР и свободные полисомы, фрагменты фибробластов.
В межклеточном веществе различных участков дермы на периферии язвы обнаруживается деструктивный хлопьевидный материал, различной электронной плотности, с полным отсутствием коллагеновых волокон, на этом фоне в некоторых участках обнаруживаются микробы различной формы и размеров. У некоторых микробов центр более плотный, между плазмолеммой и центром образуется светлый ободок, на поверхности микроба имеются прикрепленные частицы (рис. 35). В некоторых участках выявляются коллагеновые с хорошо сохранившейся структурой и поперечной исчерченностью.
Деструктивные изменения на периферии язвы характеризуются развитием зернистой дистрофии, о чем свидетельствуют скопления осмиофильных зерен в цитоплазматических отростках, эти отростки располагаются в материале средней и высокой электронной плотности, что указывает на фибриноидное набухание. Плотные структуры образуются при пикнозе ядра, окруженные расширенными перинуклеарными пространствами (рис.36).
В исследованных участках обнаруживается значительное количество клеток в состоянии кариопикноза и фрагментации, некротизированным участками цитоплазмы, и отсутствием плазмолеммы, но с сохранившимися вокруг коллагеновыми волокнами (рис.37).
Наряду с этим на периферии язвы выявляется значительное количество клеток сохраняющих активное морфофункциональное состояние, выполняющих функцию фагоцитоза деструктивного материала и микробов.
Таким образом, морфологические изменения на периферии язвы характеризуются некротическими и деструктивными изменениям клеточных элементов, волокнистых структур и внеклеточного матрикса. В тоже время в некоторых участках сохраняется относительно высокая активность этих структур, в перифериических участках формируются элементы клеточного и иммунного барьера.
Ув. 48000
Ув. 28000
Ув. 28000.
митохондрий, умеренно расширенными цистернами ГЭР, образующая цитоплазматические отростки, с признаками фагоцитоза.
Ув.48000
Ув.16000.
10Мм. Х900. 39мм.
У.20000.
Продолжение · 6
Ув. 28000.
Электронно-микроскопические изменения в центре язвы.
Дистрофические и некротические изменения в центре язвы выражены более значительно.
Количество клеток находящихся в состоянии некроза в центре язвы встречается более часто, в них отмечается наличие остаточных телец, расширение перинуклеарных пространств и цистерн ГЭР, в цитоплазме обнаруживаются различных размеров фагосомы, содержащие миэлиновые образования, являющиеся результатом деструкции мембранных органелл. Остальные органеллы имеют едва различимые контуры. Количество митохондрий незначительно. В некоторых клетках ядра фрагментированы, состоят из гетерохроматина, кариолемма и плазмолемма разрушены, в цитоплазме отмечается почкование и бесструктурные зоны, хлопьевидный материал. В клетках отмечается наличие микробов расположенных группами, отдельные контактируют с плазмолеммой клетки, в образовавшихся отростках клетки иногда содержится по несколько микробов, которые затем отторгаются от нее. Это, по нашему мнению, является отражением локального некроза (рис. 38).
В ряде клеток отмечается зернистая дистрофия. Отдельные клетки образуют причудливые выросты, с протофиламетами, фагосомами, рибосомами, характеризующиеся низкой электронной плотностью (рис. 39).
Ув. 36000.
Ув. 36000
Количество эпителиальных клеток в центре язвы, практически вследствие полного разрушения эпидермиса, значительно уменьшено, они также большей частью представлены кератиноцитами.
В сохранившемся эпидермисе встречаются кератиноциты с сильно развитым белок синтезирующим аппаратом, в митохондриях кристы небольшой длины, расположены в продольном и поперечном направлениях (рис. 40).
В некоторых участках между кератиноцитами хорошо выражены десмосомы, зерна кератогеалина, по периферии располагаются тонофибриллы, группы плотно расположенного мелкозернистого материала,другие органеллы отсутствуют. В некоторых кератиноцитах микробы располагаются в цитоплазме, в некоторых случаях микробы находятся в межклеточном пространстве, выявляются электронно плотные кокки и микробы удлиненной формы, некоторые лежат попарно, происходит размножение микробов (рис.41).
Выявляются контакты плотного типа между отдельными кератиноцитами, в этих участках вдоль плазмолеммы клеток располагаются микропиноцитозные везикулы, что свидетельствует об активном обмене с окружающим межклеточным веществом и клетками.
В этой зоне наиболее часто регистрируемыми клетками являются фибробласты и макрофаги.
Исследованные фибробласты, как правило, содержат крупное ядро, с небольшим количеством гетерохроматина и выраженными ядерными порами. В цитоплазме цистерны ГЭР расширены, между ними множество свободных полисом, в митохондриях отмечается небольшое количество крист и просветление матрикса, имеются фагосомы. За пределами клетки располагаются коллагеновые волокна.
В некоторых исследованных фибробластах, выявляется множество свободных полисом и протофиламентов, матрикс средней электронной плотности, кроме них располагаются цистерны причудливой формы и небольшое число лизосом. Рядом с фибробластом располагается тканевой базофил с осьмиофильными гранулами.
Имеются участки, где наблюдается активизация в ядрах фибробластов. Из-за фрагментации ядра оно приобретает причудливую форму, перинуклеарные пространства расширены, в цитоплазме, в цитоплазме обилие свободных полисом, другие органеллы отсутствуют. В некоторых фибробластах ядра имеют очень крупные ядрышки и обилие РНП гранулы, в цитоплазме содержатся цистерны ГЭР (рис.42). Среди исследованных фибробластов выявляются зрелые активно функционирующие формы, в их ядре содержатся крупные ядрышки, РНП гранулы, в цитоплазме отмечается обилие цистерн ГЭР и свободных рибосом.
Особый интерес представляют контакты фибробластов с другими клеточными элементами, чаще всего они происходят с макрофагами.
При этом в макрофаге отмечается обилие органелл – вакуоли, фагосомы, первичные лизосомы, на периферии располагаются гранулы различных размеров и электронной плотности, по нашему мнению образовавшиеся в результате зернистой дистрофии. В контактируемом фибробласте наблюдается обилие свободных полисом, обеспечивающих синтез белка и элементы комплекса Гольджи, митохондрии, набухшие с просветленным матриксом. В межклеточном пространстве находятся пучки коллагеновых волокон.
Кроме этого выявляются контакты фибробластов с тучными клетками. При этом в тучной клетке гранулы располагаются на расстоянии друг от друга, ядро представлено двумя фрагментами. В митохондриях отмечается образование мелких вакуолей, а цитоплазма образует небольшие отростки. В фибробласте, контактирующем, с тучной клеткой отмечаются диструктивные изменения – сильно расширены цистерны, митохондрии набухшие и вакуолизированы.
В свободно встречаемых тучных клетках, выявляются гранулы различных размеров и электронной плотности, плотно расположенные друг к другу, по периферии гранулы отсутствуют, в некоторых клетках начинается фрагментация ядра, кариолемма в отдельных участках отсутствует. Отмечается увеличение объема гетерохроматина, заканчивающегося, как правило, кариопикнозом. Вокруг тучной клетки находятся фибробласты, с хорошо развитым белок синтезирующим аппаратом.
В межклеточном веществе коллагеновые волокна располагаются на расстоянии друг от друга, вокруг них располагается большое количество мелкозернистого, иногда хлопьевидного материала, в некоторых участках коллагеновые волокна отсутствуют.
Кроме этого в межклеточном пространстве располагаются микробы: кокковые, палочковидные, неправильной формы, в некоторых отмечается снижение электронной плотности.
Электронно-микроскопическими исследованиями в центре язвы установлено активное состояние сосудистой системы капиллярного типа. Встречаются капилляры закрытого типа. Ядра эндотелиальной клетки в активном морфофункциональном состоянии, округлой формы, содержание эухроматина больше, множество РНП гранул. В кариолемме видны ядерные поры, поверхность ее имеет небольшие изгибы, перинуклеарные пространства расширены. В цитоплазме содержатся протофиламенты и свободные рибосомы и полисомы, отдельные из них располагаются на кариолемме. Благодаря наличию этих рибосом обеспечивается синтез белка и дальнейший рост капилляра. К стенке эндотелиоцита иногда прилегают осмиофильные цитоплазматические отростки, некоторые отростки отделены базальной мембраной и расположены на некотором расстоянии (рис. 43).
Таким образом, в центре язв в области пальцев у крупного рогатого скота отмечаются значительные некротические и дистрофические изменения в клеточных элементах, волокнистых структурах и аморфном веществе соединительной ткани.
В тоже время, в глубоких слоях дермы выявляются клеточные структуры и сосудистая система капилляров, находящиеся в активном морфофункциональном состоянии, выявляются элементы формирования клеточного барьера.
Ув 28000.
Ув. 36000
Ув. 28000
Морфологическая характеристика состояния кожи вокруг язв.
Морфологию кожи, изучали в кусочках тканей взятых отступя от края язвы на 2см.
В исследованном участке кожи определялись все виды клеточных элементов эпидермиса и дермы, в различном функциональном состоянии и дифференциации.
Прежде всего, выявлялись фибробласты, различной степени дифференциации. В малодифференцированных фибробластах, отмечали ядра в активном состоянии, в кариоплазме множество РНП гранул, цистерн ГЭР незначительное количество, различной степени расширения, содержание в цитоплазме рибосом и полисом, определялось степенью активности клеток, между которыми выявлялся тонковолокнистый материал, в митохондриях содержатся большое количество хорошо развитых крист.
Другие малодифференцированные фибробласты содержат обильное количество полисом и рибосом, между которыми располагается тонковолокнистый материал. В митохондриях содержится большое количество хорошо развитых крист, имеются остаточные тельца, цистерны ГЭР в небольшом количестве, они умеренно расширены.
В фибробластах отмечали крупные ядра и ядрышки, большое количество эухроматина и РНП гранул, в узком ободке цитоплазмы располагаются митохондрии с небольшим количеством цистерн ГЭР и аппарата Гольджи. Цистерны аппарата Гольджи сближены, что характеризует их низкую функциональную активность.
В некоторых фибробластах в ядрах отмечали большее содержание эухроматина, гетерохроматин располагался по периферии, кариолемма образует множество изгибов, перинуклеарные пространства расширены. Органеллы представлены множество свободных полисом, протофиламентами. Наблюдается, что в плазмолемме образуются небольшие впячивания с фагоцитированным материалом. Кроме того, наблюдается крупное, хорошо очерченное осмиофильное плотное образование, что по нашему мнению является иммунным комплексом (рис.44).
Некоторые фибробласты наблюдали в состоянии амитоза, ядра которых находятся в активном морфофункциональном состоянии, с противоположных сторон наблюдаются углубления цитоплазмы. В ядре имеются несколько ядрышек, преобладает эухроматин, хорошо видны ядерные поры, расширенные перинуклеарные пространства. Вследствие перетяжки ядра образуются два фрагмента. В цитоплазме органелл мало, встречаются редкие полисомы и митохондрии, с небольшим количеством крист (рис. 45).
Выявленные фиброциты имели удлиненную форму, с узким ободком цитоплазмы, ядра содержат в основном геторохроматин, в кариоплазме содержатся РНП гранулы. В цитоплазме наблюдаются редкие полисомы, короткие цистерны ГЭР и микропиноцитозные везикулы, характеризующие экзоцитоз (рис.46).
В некоторых случаях отмечаются контакты двух фибробластов, в одном из них в кариоплазме имеются РНП гранулы, происходит расширение перинуклеарного пространства. В части цитоплазмы содержится много свободных полисом, кроме того в цитоплазме имеется большое электронно плотное тельце округлой формы оно не окружено мембраной, по нашему мнению происходит накопление иммунных комплексов. Так же в цитоплазме имеются мелкие гранулы, они образуют не большие скопления, вокруг отдельных из них располагаются рибосомы. В плазмолемме имеются небольшие углубления, по нашему мнению, это является отражением процессов эндоцитоза. У другого фибробласта лучше развиты волокнистые элементы, имеются митохондрии, остаточные миелиновые тельца, полисомы, в отдельных участках электронная плотность повышена, в некоторых понижена (рис. 47).
В исследованных макрофагах ядра имеют сложную поверхность, крупные ядрышки, наблюдается расширение перинуклеарных пространств, иногда вблизи ядра обнаруживаются крупные вакуоли, в цитоплазме много митохондрий, полисом и протофиламентов. От плазмолеммы образуется множество коротких отростков. Такие изменения в макрофаге отражают начало функциональной активности клетки (рис.48).
Также встречаются молодые формы макрофагов, такие клетки имеют круглую форму, крупное ядро, в кариоплазме много эухроматина, в цитоплазме содержатся полисомы и везикулы, наблюдаются прикрепленные тельца средней электронной плотности к поверхности плазмолеммы (рис. 49).
В некоторых исследованных клетках отмечали значительные деструктивные изменения – кариолемма лизирована, материал ядер сгруппирован в плотные массы, между которыми располагается зерна средней электронной плотности, указанные признаки показывают на развитие апатоза (рис.50).
Встречаются клетки с значительными деструктивными изменениями в ядре, оно сжатое, уменьшенное, гетерохроматин располагается у кариолеммы, имеются вакуоли, перинуклеарные пространства расширены, однако на наружном листке кариолеммы обнаруживаются небольшое количество рибосом. В тоже время клетка имеет большой объем цитоплазмы, в котором интенсивно протекает синтез белка. Следует отметить, что цистерны ГЭР и рибосомы представлены в равном количестве, в митохондриях уменьшено количество крист в некоторых имеются небольшие вакуоли.
В исследованных участках кожи обнаруживаются кровеносные капилляры закрытого типа, которые имеют пикнотичные ядра, кариолемма в некоторых участках отсутствует. В цитоплазме имеется множество свободных рибосом и хлопьевидный материал. В межклеточном пространстве располагаются коллагеновые волокна с хорошо выраженной поперечной исчерченностью, образуют пучки идущие в различных направлениях, длина и диаметр волокон неравномерны по всей протяженности (рис.51).
Ув. 28000.
Ув. 28000
Ув. 36000.
Ув. 16000.
Ув. 28000
Таким образом, проведенные исследования показывают, что в коже вокруг язвы, в условиях сохранения целостности эпидермиса и дермы, наряду с активно функционирующими клеточными элементами и волокнистыми структурами, отмечаются некротические и деструктивные изменения структуры соединительной ткани, способствующие в последующем распространению развития язвенных процессов. Клеточные элементы находятся в различной степени дифференциации, выявляются как юные формы, так и зрелые. В приграничной области наряду с элементами формирования клеточного барьера формируются иммунные комплексы.
Морфологические показатели кожи интактной области здоровой конечности.
В коже в области венчика пальца у крупного рогатого скота здоровой конечности клеточные элементы и волокнистые структуры находятся в активном функциональном состоянии.
Исследованные фибробласты выявляются в различной степени дифференциации.
В малодифференцированных фибробластах, ядра в активном состоянии, в кариоплазме много РНП гранул. В цитоплазме рибосомы рассеяны, цистерн ГЭР мало, они сильно расширены, имеется в небольшом количестве тонковолокнистый материал (рис. 52).
Исследованные фиброциты имеют ядро и узкий ободок цитоплазмы. Вокруг клеток располагаются коллагеновые волокна (рис. 53).
Фибробласты обычно имеют крупные ядра и ядрышки, содержащие большое количество эухроматина и РНП гранул. В узком ободке цитоплазмы располагаются митохондрии с небольшим количеством цистерн ГЭР и аппарата Гольджи. В некоторых клетках цистерны аппарата Гольджи сближены, что характеризует их низкую функциональную активность.
Встречаются клетки с двумя ядрами, образовавшиеся, по нашему мнению, в результате амитоза, ядра с сильно измененной формой. В цитоплазме имеются рибосомы, много митохондрий разных размеров, с развитыми кристами. Наблюдается кооперация клеток (рис.54).
В исследованных капиллярах эндотелиоциты имеют ядра в активном состоянии, гетерохроматин расположен по периферии, эухроматин содержится в большем количестве. В кариоплазме имеются РНП гранулы, поверхность ядер неровная, образуются углубления цитоплазмы. В цитоплазме содержатся митохондрии, единичное количество цистерн ГЭР и много тонковолокнистого материала. Вдоль плазмолеммы хорошо видимы микропиноцитозные везикулы, что отражает активный обмен веществ.
