Патоморфологическая и ультраструктурная характеристика гнойно-некротических процессов в области пальцев у крупного рогатого скота

Продолжение · 7

Встречаются эндотелиоциты из стенки капилляра, образующие плотный контакт с другим эндотелиоцитом. При этом эндотелиоцит имеет крупное активное ядро, гетерохроматин образует узкую полоску вдоль кариолеммы. В цитоплазме хорошо выражен аппарат Гольджи, который участвует в образовании везикул, везикулы располагаются вдоль плазмолеммы в 1-2 ряда, таким образом, по нашему мнению, обеспечиваются процессы секреции. Цитоплазма содержит митохондрии, мелкой и средней величины, хорошо видимы кристы. В поле зрения располагаются цитоплазматические отростки, содержащие рибосомы, митохондрии, протофиламенты (рис.55).

В исследованных участках встречаются миофибробласты, имеющие ядро с сильно измененной поверхностью, гетерохроматин в которых локализуется периферически, большую часть кариоплазмы занимает эухроматин и РНП гранулы. В цитоплазме содержится много митохондрий, свободных рибосом и миофиламентов. Вдоль плазмолеммы наблюдаются везикулы, отмечается уплотнение отдельных участков цитоплазмы в области плазмолеммы. По нашему мнению, возможно, данная клетка находится в стенке кровеносного сосуда (рис.56).

В межклеточном веществе здоровой кожи наблюдали различной степени дифференциации коллагеновые волокна – это молодые формы коллагеновых фибрилл, образующие тонкие пучки, и более зрелые коллагеновые волокна, образующие крупные пучки, идущие в параллельном направлении. Подобные коллагеновые волокна характерны для сетчатого слоя дермы, а тонкие пучки сосочковому слою дермы.

Таким образом, клеточные элементы и волокнистые структуры здорового участка кожи области пальцев у крупного рогатого скота, характеризуются активными обменными процессами, стабильным морфофункциональным состоянием.

Ув. 36000

Ув. 36000

Ув. 32000.

Ув. 36000.

Морфологические показатели при пододерматитах.

При пододерматитах изменения характерны изменениям структуры формирующейся грануляционной ткани.

Встречается большое количество юных форм фибробластов. В ядрах содержание гетерохроматина уменьшено, который глыбками располагается у кариолеммы, в кариоплазме много РНП гранул. В клетке выделяется большой объем цитоплазмы и обилие свободных рибосом, имеются мелкие митохондрии с небольшим количеством крист. Отмечается наличие небольшого количества цистерн ГЭР и лизосом (рис.57).

В цитоплазме клеток при сильном увеличении наблюдается наличие небольшого количества тонковолокнистого материала. В межклеточном веществе находятся коллагеновые фибриллы с хорошо выраженной поперечной исчерченностью. В одной из исследованных клеток повышается электронная плотность, плазмолемма отсутствует, эти показатели свидетельствуют о начале некроза клетки (рис.58).

В некоторых клетках наблюдается кариопикноз и повышение осмиофилии цитоплазмы (рис.59). Кроме этого в них же отмечается отсутствие кариолеммы, очень высокая плотность гетерохроматина, между которыми располагается большое количество зерен, вокруг клеток располагаются достаточно плотно друг к другу коллагеновые волокна, с извилистым ходом волокон (рис.60). В межклеточном веществе находится материал средней электронной плотности, в большом количестве встречаются микробы различной формы: круглые, удлинные, с изменой формой, рядом располагаются продукты распады.

Таким образом, при пододерматитах основа кожи копытец, представлена структурой формирующейся грануляционной ткани, со всеми элементами рыхлой соединительной ткани. Наряду с этим, при активно формирующихся и дифференцирующихся клеточных элементах и волокнистых структурах, отмечаются деструктивные и некротические процессы.

Ув. 28000.

Ув. 20000.

Ув. 20000.

4.1 Особенности клинико-морфологических изменений в организме крупного рогатого скота в условиях экспериментального моделирования гнойно-некротических поражений в области копытец.

4.1.1 Клинико-морфологические характеристики ран, физиологические и биохимические показатели крови крупного рогатого скота, в условиях применения мази левомеколь и гелевой мази (МАОП-гель) при моделировании экспериментальных гнойно-некротических поражений копытец.

В данной серии опытов в сравнительном плане изучали влияние пиримидиновых производных - мази левомеколь (контроль) и МАОП-гели на клинико-гемтологические, гистологические и гистохимические показатели экспериментальных ран в области пальцев у крупного рогатого скота.

Через сутки после нанесения ран у животных отмечалось угнетение общего состояния, снижение аппетита, по данным таблицы 3, отмечалось повышение температуры тела на 0,6° (Р>0,05), учащение пульса на 10,4 удара (Р>0,05), дыхания на 14,7 движений (Р<0,05).

При движении животных отмечается скованность, хромота смешанного типа второй степени. Вокруг ран развивался разлитой тестоватой консистенции, болезненный краевой отек. Тампон, расположенный в ране, пропитан фибринозным сгустком и прочно фиксирован в ней. После удаления его все неровности дна и стенок раны покрыты сгустками крови и фибринозного экссудата.

Через сутки после первого применения пиримидиновых производных угнетение несколько уменьшилось, хромота и скованность движений сохраняется, прием воды и корма активный. Общая температура тела, по сравнению с исходным показателем, возросла на 1,0° (Р<0,05), по сравнению с предыдущим сроком на 0,3°, пульс участился соответственно на 17,2 удара (Р>0,05), по сравнекнию с предыдущим сроком на 6,3 удара. Дыхание участилось на 14,5 (таблица 3) движений (Р>0,05), а по сравнению с предыдущим сроком осталось почти без изменений.

По сравнению с исходными данными, в гематологических показателях не произошло значительных сдвигов: по гемоглобину, эритроцитам, лейкоцитам - по данным таблицы 2 (Р>0,05), количество же сегментоядерных увеличилось на 7,0% (Р<0,05) при снижении лимфоцитов на 8,4% (Р<0,05).

На этом общем клинико-гематологическом фоне площади ран (таблица 4) при однократом применении МАОП-гели и контрольных, не имели существенных отличий (Р>0,05).

В сравнении с контрольными ранами, при применении МАОП-гели, отмечаются следующие отличия: более выраженная эмиграция лейкоцитов и пролиферация клеточных элементов; наличие слабо выраженной реакции по Ван-Гизону в рыхлой клетчатке, а также вокруг крупных сосудов; положительная реакция на ДНК и РНК в ядрах клеточных элементов, при более выраженной реакции на ДНК.

Через трое суток после первого применения пиримидиновых производных наблюдалось некоторое улучшение общего состояния животных, они более активно принимали корм и воду, но хромота и скованность движений сохранялась.

В сравнении с предыдущим сроком исследования, сколько-нибудь значительных отклонений, как это следует из таблицы 3, в показателях общей температуры, пульса и дыхания не установлено (Р>0,05). В периферической крови (таблица 2), наблюдалась тенденция к увеличению процентного содержания палочкоядерных и сегментоядерных лейкоцитов, при снижении количества лимфоцитов на 7,0%, для упомянутых показателей Р>0,05.

На этом общем клинико-гематологическом фоне, после двух кратного применения МАОП-гели, местная температура увеличилась на 0,39° (Р<0,01) (таблица 5), площадь ран уменьшилась на 1,69см.кв. (Р<0,05). Стенки и дно ран, по сравнению с предыдущим сроком, не во всех участках покрыты рыхлой фибринозной массой, в таких местах выявляются бледно-розовые мелкозернистые грануляции.

При гистологических и гистохимических исследованиях, при применении МАОП-гели, установлено, что поверхность ран покрыта фибрином, инфильтрированным незначительным количеством лимфоцитов и нейтрофилами, под ним располагается слой дегенеративных клеточных элементов, представленный преимущественно нейтрофилами и полибластами, далее следует сосудистый слой с пролиферирующими клеточными элементами, в основном, полибластами с крупными круглыми ядрами и незначительным слоем цитоплазмы. Гистохимически выявляется положительная реакция по ван-Гизон в местах скопления клеточных элементов, в основном вокруг мелких и крупных сосудов. Содержание гликогена повышено в местах формирования юной соединительной ткани, стенках сосудов. Выявляется выраженная положительная реакция на ДНК и РНК, в ядрах клеточных элементов, при более положительной реакции на ДНК. По сравнению с предыдущим сроком исследования, интенсивность реакций на нуклеиновые кислоты усиливается.

В контрольных ранах, к этому сроку, по сравнению с использованием МАОП-гели, показатели местной температуры, площадь ран, существенных различий не имели (Р>0,05). Ткани дна и стенок покрыты плотной фибринозной массой, структура его равномерная.

Гистологически и гистохимически в контрольных ранах, имеются следующие отличия: рыхлая клетчатка в состоянии сильного отека, содержит большое количество лейкоцитов, явления экссудации, преобладают над процессами пролиферации клеточных элементов, сосудистый слой с пролиферирующими клеточными элементами менее развит, реакция по ван-Гизон отмечается незначительно, только по ходу крупных сосудов. Реакция Шабадаша отрицательная, реакции на РНК и ДНК выражены слабо.

Через семь суток общее состояние животных удовлетворительное, прием воды и корма активный, сохраняется некоторая скованность движений. Общая температура, по сравнению с предыдущим сроком, незначительно понизилась на 0,3° (Р>0,05), отмечается незначительная тенденция к урежению пульса и понижению частоты дыхания ( таблица 3).

В периферической крови, как видно из таблицы 2, произошло некоторое снижение количества гемоглобина на 0,3 г/%, эритроцитов на 0,1 млн., лейкоцитов на 2800 клеток, в лейкоцитарной формуле понизилось процентное содержание палочкоядерных лейкоцитов на 3,6%, сегментоядерных на 9,0%, при увеличении количества лимфоцитов на 15,6%, для всех показателей крови Р<0,05.

На этом общем клинико-гематологическом фоне к этому сроку при применении МАОП-гели, по сравнению с предыдущим сроком местная температура достоверно уменьшилась на 0,65° (Р<0,001), уменьшение площади ран оказалось недостоверным.

Поверхность ран покрыта незначительным количеством серо-белого цвета сметанообразной консистенции гноем, покрывающим мелкозернистые розово-красного цвета грануляции, по периферии хорошо выражен эпителиальный ободок.

Гистологически и гистохимически поверхность раны покрыта рыхлой массой, состоящей из фибрина, склеившихся эритроцитов и большого количества лейкоцитов. Под ней располагается большое количество клеток с дегенеративными изменениями ядер. Далее следует сосудистый слой, преимущественно капилляров, расширенных и переполненных кровью, колдичество их в глубоких слоях раны уменьшается, увеличивается приэтом их диаметр. Вокруг них клеточные элементы образуют муфтообразные скопления, у самой поверхности их сплошную массу их, с большим содержанием РНК и ДНК, наибольшим, по сравнению с предыдущим сроком исследований. В глубоких слоях четко дифференцируются фибробласты с веретенообразной цитоплазмой и РНК – положительной зернистостью в ней. Полибласты и фибробласты располагаются между раздвинутыми коллагеновыми волокнами, при положительной реакции по ван-Гизон, с тенденцией нарастания в глубоких слоях. Интенсивность реакции по Шабадашу выражена преимущественно в стенках кровеносных сосудов. В краевых участках раны омечается регенерация эпителия.

Сопоставляя приведенные показатели ран при применении МАОП-гели, с контрольными установлено, что местная температура, площадь ран не имели существенных различий. При этом, поверхность контрольных ран покрыта незначительным количеством серо-грязного цвета гноем, жидкой консистенции с неприятным запахом. После удаления гноя обнаруживаются бледно-розовые крупнозернистые грануляции.

Гистологическое и гистохимическое строение грануляционной ткани контрольных ран отличается от ран при использовании МАОП-гели: слабым развитием сосудистого слоя с пролифирирующими клеточными элементами, наличием кровоизлияний в поверхностных его слоях, менее интенсивной реакцией по Браше и Фельгену.

Как отмечалось в разделе материал и методика исследований, на 14 сутки после первого применения пиримидиновых производных, опытные раны последний раз обрабатывались МАОП-гелью, а контрольные мазью левомеколь, в последующем обработка ран не производилась, на поверхности ран образовывались корочки, и дальнейшее заживление протекало под струпом.

На 14 сутки после трехкратного применения пиримидиновых производных, общее состояние не отличалось от исходных данных. По данным таблиц 3 и 2 показатели общей температуры, пульса, дыхания и периферической крови, не выходили за пределы верхних и нижних границ физиологической нормы.

К этому сроку на фоне применения МАОП-гели произошло снижение местной температуры на 1,1º, а площадь ран на 3,48 см², для эти показателей степень достоверности определяется по третьему порогу вероятности (Р<0,001), при этом ежедневное уменьшение площади ран составило 6,12%.

На поверхности ран отмечается незначительное количество раневого экссудата серого цвета, покрывающего бледно-розовые мелкозернистые грануляции, с хорошо выраженным эпителиальным ободком шириной 2-3мм.

На гистологических препаратах под тонким слоем серо-фибринозного экссудата отмечается хорошо сформировавшаяся грануляционная ткань, с многочисленными капилляров и обилием полибластов, особенно в поверхностном ее слое, при более выраженной реакции на РНК и ДНК, по сравнению с предыдущим сроком исследования. В глубоких частях грануляционного слоя преобладают фибробласты и плотно расположенные коллагеновые волокна, с РНК – положительной реакцией в цитоплазме фибробластов и нарастанием реакции по ванг-Гизон в соединительной ткани. Реакция по Шабадашу положительная в ороговевающих слоях регененрирующего эпителия, стенках артерий, но слабее выражена в коллагеновых волокнах.

В контрольных ранах, где применяли мазь левомеколь, раны покрыты крупнозернистыми бледно-розовыми грануляциями. Гистологически и гистохимически в контрольных ранах эксудативно-некротический слой более выражен, с кровоизлияниями, гнойной инфильтрацией и участками некроза обильным скоплением лейкоцитов и полибластов при менее выраженной реакции на РНК и ДНК и слабо положительной реакцией по ван-Гизон в глубоких слоях соединительно тканых элементов грануляционной ткани.

Через 21 сутки после начала применения пиримидиновых производных общее состояние животных хорошее.

К этому сроку, по данным таблиц 2,3 показатели общей температуры, пульса, дыхания и периферической крови близки к показателям физиологической нормы.

На этом фоне при применении МАОП-гели, поверхность ран покрыта сухой бурого цвета прочно фиксированной корочкой, с хорошо выраженным эпителиальным валиком шириной 2-3мм. Температура кожи вокруг ран остается практически прежней, площадь ран уменьшилась на 3,15см² (Р<0,001), ежедневное уменьшение площади ран с 14-х по 21-е сутки составило 10,78%.

Гистологически и гистохимически с краевых участков раны, под отторгающийся струп врастает многослойный ороговевающий эпителий, истончающийся по направлению к центральным участкам, где он состоит из клеток мальпигиевого слоя. Под струпом – подлежащая соединительная ткань, зрелая, фуксинофильная, с беспорядочным расположением пучков коллагеновых волокон и большим количеством сосудов. Содержание ДНК в ядрах, РНК в ядрах и цитоплазме понижено. Содержание гликогена увеличено в эпителиальных клетках и клетках соединительной ткани.

В контрольных ранах, по сравнению с ранами, где использовали МАОП-гель, различия местной температуры, площади ран – несущественны.

Гистологически и гистохимически установлены следующие отличия: сосудистый слой с круглоклеточными элементами контрольных ран охватывает большую глубину, содержит участки с кровоизлияниями, под ним слой рыхлой ткани менее развит. Реакция Шабадаша слабо выражена и выявляется только в поверхностном слое эпидермиса и коллагеновых волокнах.

Продолжение · 8

На 28 сутки после начала применения пиримидиновых производных общее состояние бычков хорошее, показатели общей температуры, пульса, дыхания периферической крови в пределах физиологической нормы.

На этом общем фоне, раны, обработанные МАОП-гелью, к этому сроку покрыты небольшим струпом площадью 0,64см², полностью эпителизированы, при этом площадь струпа на поверхности ран, по сравнению с предыдущим сроком, уменьшилась на 0,85см², а температура кожи зоны раны понизилась на 1,72º и соответствует исходному показателю, степень достоверности обеих показателей определяется по третьему порогу вероятности.

Гистологически и гистохимически под эпителием располагается тонкий слой рыхлой незрелой соединительной ткани, со слабой фуксинофильностью и незначительным количеством капилляров, этот слой без резкихъ границ переходит в зрелую соединительную ткань с более выраженной фуксинофильностью, а многочисленные сосуды муфтообразно окружены круглоклеточными элементами с пониженной реакцией на РНК и ДНК. Реакция по Шабадашу выражена слабо, преимущественно в поверхностных слоях эпидермиса и коллагеновых волокнах зрелой соединительной ткани.

При сопоставлении с контрольными ранами, к этому сроку площадь ран, обработанных МАОП-гелью, меньше на 1,03см² (Р>0,05), ежедневное уменьшение площади их составляет 7,94%, а местная температура ниже на 0,63º (Р<0,001).

Гистологически и гистохимически структура неэпителизированной зоны контрольных ран представлена менее зрелой соединительной тканью с большим количеством переполненных кровью сосудов и наличием отдельных кровоизлияний.

Таким образом, на основании проведенных исследований установлено, что пиримидиновые производные благоприятно влияют на заживление экспериментальных ран в области пальцев у крупного рогатого скота.

Таблица 2.

Гематологические показатели

Таблица 3.

Таблица 5.

• • 1. Морфофункциональные показатели заживления экспериментальных ран в области пальцев, при применении мази левомеколь, с использованием электронной и сканирующей электронной микроскопии

Через трое суток после нанесения ран, электронно-микроскопическими исследованиями установлено, что клеточный состав соответствует элементам формирующейся грануляционной ткани, находящимся в различном морфофункциональном состоянии. Отмечаются клетки в состоянии некроза, у которых местами отсутствует плазмолемма, цистерны гранулярного эндоплазматического ретикулума (ГЭР) расширены (рис.61). Характерной особенностью ядер клеток является отсутствие гетерохроматина, при наличии эухроматина, это свидетельствует о том, что генетический аппарат ядра функционирует. Отмечается активное расширение перинуклеарных пространств, ядра клеток неправильной формы, что характерно для компенсаторно приспособительных реакций. Отмечается обширная вакуолизация цитоплазмы, которая постепенно переходит в межклеточное вещество, вокруг клетки образуется материал средней электронной плотности.

Значительные изменения отмечаются в межклеточном веществе, коллагеновые волокна отсутствуют, в результате их деструкции образуются тельца различной электронной плотности.

Таким образом, через трое суток после нанесения ран, клеточные элементы и межклеточное вещество, находятся в состоянии некротических и деструктивных изменений, но при этом ядра сохраняют генетический потенциал, некоторые находятся в активном функциональном состоянии, выявляются элементы компенсаторно-приспособительных процессов.

Через семь суток после нанесения ран в клеточных элементах и межклеточном веществе сохраняются значительные некротические и деструктивные процессы. Но при этом отмечается более четкая дифференциация клеток. Наиболее часто встречаются фибробласты, в различном функциональном состоянии, иногда их фрагменты, при отсутствии плазмолеммы, с различной степенью расширения цистерн ГЭР, что является свидетельством о синтезе белка в этих клетках (рис. 62).

Кроме этого встречаются фибробласты, с ядрами неправильной формы, при наличии нескольких ядрышек, что свидетельствует об увеличении синтеза РНК, встречаются фибробласты с фрагментированными ядрами. Вокруг некоторых клеток отмечается наличие светлого межклеточного вещества, что по нашему мнению, является скопление отечной жидкости (рис. 63).

В исследованных микрофотографиях отмечаются парно контактирующие клетки, при этом в одной клетке выявляется кариопикноз, в другой ядро активно функционирует, при отсутствии цитоплазмы. Клетки окружены волокнистой гомогенной структурой, возможно, по нашему мнению, это фибрин.

В эти сроки в исследованных микрофотографиях выявляются кровеносные капилляры, стенка которых образована умеренно расширенными эндотелиоцитами, содержащими множественные вакуоли и рибосомы, имеющие набухшие базальные мембраны, в некоторых участках с нарушенной их целостностью.

Значительные деструктивные изменения отмечаются в межклеточном веществе, при этом тонкая структура волокнистого материала не просматривается.

В то же время надо отметить, что в межклеточном веществе встречаются ядра клеток, в которых преобладает эухроматин, что является показателем деконденсации ДНК, возможно, по нашему мнению связано с образованием молодых соединительно-тканных клеток. По литературным данным, эухроматин показатель активности ДНК, гетерохроматин выявляет неактивность ДНК.

Таким образом, через семь суток после нанесения ран, в тканях сохраняются некротические и деструктивные процессы. В тоже время отмечается активное функциональное состояние клеточных элементов, их дифференциация, особенно фибробластов, в которых выявляется активный синтез РНК и ДНК и идет интенсивное формирование молодых соединительно-тканных клеток. Выявляется процесс развития капиллярной сети формирующейся грануляционной ткани. Сохраняется серозно-фибринозный отек тканей.

Через 14 суток после нанесения ран выявляются клеточные элементы, входящие в состав грануляционной ткани.

Надо отметить, что в этот срок продолжают встречаться соединительно-тканные клетки с пикнотичными ядрами и различной степенью деструкции цитоплазмы и цитоплазматических органелл, вакуолизации митохондрий, с дальнейшим образованием множественных вакуолей. В межклеточном пространстве этих клеток находится аморфное вещество средней электронной плотности, а также протофиламенты небольшой длины, в некоторых участках они образуют небольшие пучки (рис. 64).

В данные сроки встречаются фиброциты, в которых отмечается уплотнение кариоплазмы, увеличение перинуклеарного пространства, цитоплазма содержит полисомы, мелкие митохондрии с светлым матриксом. Вокруг клетки имеются бесструктурные пустотные зоны, возможно образовавшиеся в результате гибели клеток. В межклеточном пространстве накапливаются тельца высокой электронной плотности, коллагеновые волокна в поле зрения отсутствуют (рис.65).

Исследованные макрофаги имеют электронноплотные фаголизосомы, остаточные тельца. В ядре выявляются ядрышки средней электронной плотности.

По сравнению с предыдущим сроком встречается большее число гранулоцитов. Эти клетки в различной степени заполнены гранулами, они различной электронной плотности, в некоторых случаях мембраны окаймляющие гранулы хорошо видны. У отдельных клеток плазмолеммы имеют перерывы. Кроме гранул имеется небольшое количество митохондрий. Ядра гранулоцитов средней электронной плотности, правильной формы, отмечается незначительная конденсация хроматина, перинуклиарные пространства расширены. Такие признаки, по нашему мнению, имеют юные клетки. За пределами этихлеток наблюдается образование небольших пучков коллагеновых волокон.

Исследованные зрелые формы гранулоцитов имеют несколько сегментов ядер – до 3-х, гранулы различной электронной плотности, цитоплазма содержит плотный материал, концентрические образования, а также остаточные тельца образовавшиеся в результате фагоцитоза.

Кроме гранулоцитов встречаются клетки с очень активными крупными ядрами, имеющие небольшие изгибы, полностью состоящие из эухроматина, с несколькими ядрышками и интенсивным образованием рибосом. В цитоплазме их имеются полирибосомы, митохондрии, в большинстве митохондрий кристы укорочены. Отсутствие цистерн ГЭР или наличие их в небольшом количестве и укороченных вариантах, указывает на малодифференцированный характер этих клеток.

В данные сроки выявляются контактирующие эпителиальные клетки, имеющие сложную форму, и образующие отростки, цитоплазма содержит расширенные цистерны ГЭР, внутреннее содержимое светлое, имеется умеренное содержание свободных полисом. По литературным данным известно, что белок синтезируемый полисомами используется для функционирования самой клетки.

Таким образом, исследования, проведенные на 14 день после нанесения ран, показывают, последовательность формирования структуры грануляционной ткани ран, за счет формирования и дифференциации клеточных элементов, волокнистых структур и межклеточного вещества. Эти изменения протекают на фоне усиления синтеза белка используемых для формирования компонентов грануляционной ткани, и белков обеспечивающих активное функционирование самих клеток.

Через 21 сутки после нанесения ран клеточные элементы и волокнистые характерны для структуры зрелой грануляционной ткани.

В исследованных участках наиболее часто встречаются фибробласты, в них по сравнению с предыдущим сроком, увеличен объем цитоплазмы и количество цистерн ГЭР, усиливается синтез белка. Плазмолемма слабо различима. В цитоплазме имеются вакуоли различных размеров, иногда в клетках остаточные тельца, в виде электронно-плотных образований. Результатом усиленного синтеза белка является образование коллагеновых волокон, которые формируются в пучки, но в пучках располагаются рыхло.

Некоторые фибробласты имеют сильно измененную форму из-за многочисленных изгибов, в ядре гетерохроматин локализуется у кариолеммы, кроме цистерн ГЭР в цитоплазме имеются тельца с материалом средней электронной плотности (рис. 66).

В исследованных микрофотографиях выявляются контакты фибробластов и фиброцитов, при этом в фибробластах происходит значительное расширение цистерн ГЭР и набухание митохондрий.

В тоже время отмечается наличие клеток, с признаками кариопикноза, сильным расширением цистерн ГЭР, большим количеством вакуолей.

Межклеточное вещество на периферии ран представлено однородной серой массой, что затрудняет обмен веществ, но способствует, по нашему мнению, полной изоляции и барьеризации зоны воспаления от здоровых тканей (рис.67).

Продолжение · 9

Таким образом, через 21 сутки после нанесения ран клеточный состав, волокнистые структуры и межклеточное вещество соответствуют зрелой грануляционной ткани. Клетки находятся в активном функциональном состоянии, усиленно синтезируют белок, отмечается барьеризация зоны воспаления.

Через 28 суток после нанесения ран, выявленные клеточные элементы и волокнистые структуры свидетельствуют о завершающей стадии заживления ран. В этот срок клеточный состав преимущественно представлен фибробластами, отличающиеся друг от друга степень активности ядра, которые имеют извилистую форму, ядрышки находятся в активном функциональном состоянии. В большинстве фибробластов цистерны ГЭР сильно расширены, что свидетельствует о значительном напряжении функциональной деятельности, наблюдаются случаи амитоза ядра.

В межклеточном пространстве располагаются коллагеновые волокна, в которых наблюдается поперечная исчерченность.

По периферии раны выявляются активно функционирующие эпителиоциты, свидетельствующие о интенсивной эпителизации раны.

Ув.12000

Ув. 10000.

Ув. 10000

Ув. 16000

Ув.16000.

Таким образом, в этот срок происходит завершающая стадия заживления раны, заканчивающаяся ее полной эпителизацией. Тем не менее, клеточные элементы сохраняют высокую степень активности, восстанавливаются волокнистые структуры соединительной ткани.

4.1.3 Морфофункциональные показатели заживления экспериментальных ран в области пальцев, при применении гелевой мази (МАОП-гель), с использованием электронной и сканирующей электронной микроскопии

Через сутки после нанесения ран, в периферических участках наиболее часто регистрируемой и сохранившейся клеточной структурой является кератиноцит.

В кератиноцитах из шиповидного слоя, в цитоплазме содержатся пучки тонофиламентов, идущих в различных направлениях, имеются бесструктурные участки цитоплазмы, плазмолемма клеток отсутствует. Незначительные участки содержат рибосомы и полисомы, которые осуществляют синтез белка. Отмечается наличие гранул средней электронной плотности, возможно образовавшиеся в результате деструкции тонофиламентов (рис. 68). Кератиноциты из зернистого слоя содержат зерна кератогеалина, на периферии сохраняются тонофиламенты, клетки осуществляют контакты между собой с помощью десмосом. Встречаются кератиноциты округлой формы, также сохранившие тонофиламенты и зерна кератогеалина по периферии клетки. В межклеточном веществе вокруг них имеются скопления группы микробов. Отдельные микробы представляют интерес тем, что они кружены оболочкой средней электронной плотности, они палочковидной и кокковой формы (рис.69). Кроме этого, в некоторых из них отмечается увеличение морфофункциональной активности, в их телах имеются участки различной электронной плотности (рис. 70). Микробы обнаруживаются и в самих клетках, например в кератиноцитах они располагаются среди пучков тонофибрилл, плазмолемма при этом сохранена только участками.

В межклеточном веществе отмечается лизис компонентов коллагеновых волокон, в отдельных участках сохранены только их очертания, электронная плотность их уменьшена, сохраняются фрагменты цитоплазматических отростков и элементы значительно измененных клеток, среди которых также наблюдаются скопления групп микробов.

Таким образом, через сутки после нанесения ран, в дерме отмечается значительная деструкция клеток, волокнистых структур, межклеточного вещества, отсутствие отдельных видов клеток – фибробластов, макрофагов. В тоже время сохраняется активность некоторых эпителиальных клеток, осуществляющих синтез белка. Выявляется большое количество микроорганизмов, в межклеточном веществе, в самих клетках, находящихся в активном функциональном состоянии усугубляющие деструктивные и некротические процессы в ране.

Через трое суток после нанесения ран, и первого применения мази МАОП-гель, по сравнению с предыдущим сроком, состав клеточных элементов в ране значительно изменился – это нейтрофильные лейкоциты, лимфоциты, эритроциты, макрофаги, фиброциты.

В исследованных микрофотографиях встречаются нейтрофильные лейкоциты, имеющие 6 сегментов ядер, при этом вся цитоплазма заполнена зернами высокой электронной плотности, они имеют разнообразную форму – овальную, удленненную. В некоторых нейтрофилах находятся митохондрии, их плазмолемма имеет волнистый вид. Здесь же могут располагаться эритроциты с равномерной электронной плотностью цитоплазмы, фиброцит с ядром гомогенной зернистости, с 1-2 лизосомами в цитоплазме, фрагмент цитоплазмы макрофага с фагосомами различной электронной плотности (рис. 71).

В часто встречающихся сигментоядерных нейтрофилах содержатся лизосомы, митохондрии с большим количеством крист, что является показателем их активности. В сегментах ядер преобладает гетерохроматин, однако они друг от друга отличаются плотностью, а цитоплазма заполнена гранулами, в некоторых нейтрофилах цитоплазма относительно свободна. Здесь же встречаются эритроциты с пониженной электронной плотностью цитоплазмы.

Исследованные макрофаги заполнены пузырьковыми структурами, вакуолями, митохондриями, их плазмолемма разрушена. Некоторые макрофаги окружены материалом высокой электронной плотности. В этот период эксперимента в исследованных образцах отмечается наличие относительно большого количества макрофагов находящиеся в различной степени деструкции (рис. 72).

В исследованных макрофагах микробы включены в состав фаголизосомы, в которых хорошо видима капсула. В большей части фаголизосом содержится материал высокой электронной плотности, который находится в различной степени лизиса, плазмолемма видима на всем протяжении (рис. 73).

В этот срок исследования часто отмечаются контакты между отдельными клетками и группами клеток. При контакте двух лимфоцитов отмечается, что один находится в состоянии кариоптикноза и лизиса цитоплазмы. Другой лимфоцит находится в лучшем состоянии, однако в ядре гетерохроматина много, а в цитоплазме наблюдается мелкая зернистость. Здесь же находится кератиноцит, с обилием свободных рибосом, которые обеспечивают синтез белка и восстановление субклеточных структур, в ядре отмечается большее количество эухроматина, что также является признаком активного синтеза белка. В этой же зоне отмечаются контакты макрофагов и нейтрофильных лейкоцитов, между клетками обнаруживаются цитоплазматические отростки (рис. 74).

Таким образом, через трое суток после нанесения ран и первого применения мази МАОП-гель, значительно изменился клеточный состав грануляционной ткани по сравнению с предыдущим сроком, наиболее функционально активными клетками в этот срок являются нейтрофильные лейкоциты и макрофаги. Значительно подавлена активность микробов, за счет фагоцитарной деятельности макрофагов. Усиливаются контакты между отдельными клетками и группами клеток.

Через 7 суток после нанесения ран и повторного применения мази МАОП-гель, по сравнению с предыдущим сроком, на периферии раны выявляются процессы эпителизации, отмечается отсутствие микробов, как в межклеточном веществе, так и в клеточных элементах. Исследованные ткани соответствуют структуре грануляционной ткани.

В исследованных участках, в данный срок, в большом количестве встречаются кератиноциты, которые находятся в различном морфофункциональном состоянии, иногда это группа клеток, в которых различаются тонофибриллы и зерна керагогеалина, выявляющиеся в виде телец различной электронной плотности, в результате клетки приобретают пятнистый вид. Между кератиноцитами расширяются межклеточные пространства, содержащие материал средней электронной плотности. Также встречаются кератиноциты с наличием свободных рибосом, с расширенными цистернами ГЭР и пузырьками, образовавшимися путем отделения от цистерн комплекса Гольджи (рис. 75).

Контактирующие кератиноциты находятся в различном функциональном состоянии, например, в исследованном участке одна клетка содержит пучки тонофиламентов и тонофибрилл, другая имеет более плотное ядро, по нашему мнению, ядро находится в состоянии кариопикноза, зерна кератогеалина характерны для зернистого слоя эпидермиса (рис. 76).

В исследованных макрофагах цитоплазма заполнена фагосомами, митохондриями, пузырьками различной электронной плотности, содержит много волокнистого материала, отростки заполнены рибосомами, таким образом, в клетке имеются участки, где преобладают деструктивные изменения, в других компенсаторные.

В некоторых исследованных участках выявляются выраженные деструктивные изменения, в межклеточном пространстве находятся фрагменты цитоплазматических отростков различной электронной плотности с гранулами рибосом, они электронно-плотные, их довольно много, плазмолемма большей частью разрушена.

Таким образом, через 7 суток после нанесения ран, и повторного применения мази МАОП-гель, выявляется формирующаяся грануляционная ткань, со всеми активно функционирующими структурами и некоторыми элементами деструктивных изменений. В грануляционной ткани не выявляются микробы.

Через 14 суток после нанесения ран и трехкратного применения мази МАОП-гель, исследованные ткани соответствуют формирующейся зрелой грануляционной ткани со всеми присущими ей элементами, как клеточных структур, так и волокнистых компонентов и межклеточного вещества.

Наиболее активными клеточными элементами в этот срок являются фибробласты, макрофаги, гранулоциты, эпителиальные клетки, в них отмечается активный синтез белка, идущего на формирование волокнистых структур и белков, обеспечивающих функционирование самих клеток.

Выявляются элементы формирования волокнистых структур.

Через 21 сутки после нанесения ран, по сравнению с предыдущим сроком, структура грануляционной ткани более зрелая, наиболее активными ее компонентами являются фибробласты, клеточные элементы крови, коллагеновые волокна.

Выявленные фибробласты находятся в активном морфофункциональном состоянии, в цитоплазме находятся расширенные цистерны ГЭР, содержащие материал низкой электронной плотности, большое количество митохондрий, часто наблюдается просветление матрикса, такие фибробласты имеют четкие контуры тела. Иногда во внеклеточном матриксе находятся гранулы высокой электронной плотности, образовавшиеся в результате дегрануляции нейтрофила. Здесь же может отмечаться контакт фибробласта с нейтрофилом, сегменты ядра нейтрофила и плотные гранулы располагаются свободно, что по нашему мнению также связано с его дегрануляцией (рис. 77).

Наряду с эти выявляются фибробласты с выраженными деструктивными изменениями, которые содержат волокнистый материал, в результате чего увеличивается электронная плотность цитоплазмы.

В исследованной микрофотографии находится кровеносный капилляр, в просвете которого находится эритроцит, ядро эндотелиоцита небольших размеров, сморщенное с неровными контурами, в цитоплазме много расширенных цистерн ГЭР.

Интерес представляет изучение структуры группы рядом расположенных фибробластов. В одном из них хорошо видно ядро, содержащее эухроматин и РНП гранулы, ядро имеет извилистую поверхность, перинуклеарное пространство расширено. Цитоплазма у фибробластов высокой электронной плотности, степень расширения цистерн ГЭР у них различная, у одних выражена больше в других меньше, эта тенденция отмечается и внутри отдельных клеток. Вдоль плазмолеммы цитоплазма приобретает гомогенный вид. В одном из фибробластов вдоль плазмолеммы располагаются микропиноцитозные везикулы, что свидетельствует об активных взаимоотношениях с межклеточным веществом (рис.78).

В этот срок, среди исследованных фибробластов выявляются клетки с сильно расширенными цистернами с материалом низкой электронной плотности. В цитоплазме этих клеток имеются прикрепленные рибосомы и свободные. Митохондрии разнообразной формы и размеров – в виде палочек или овальные, в отдельных из них видимы кристы. Внутренняя структура митохондрий разнообразна. Вокруг фибробласта выявляется полоса гомогенного материала, вокруг него располагаются пучки коллагеновых волокон идущих в различных направлениях. В коллагеновых фибриллах видна поперечная исчерченность. Между волокнами имеются остаточные тельца высокой электронной плотности.

При исследовании клеток расположенных рядом с кровеносным сосудом выявлено, что большая часть этих клеток это нейтрофилы, как правило, они имеют по 2-3 сегмента ядра. Цитоплазма заполнена гранулами неравномерно, они округлой или овальной формы, высокой электронной плотности. Ядро эндотелиоцита в активном морфофункциональном состоянии, так как большую часть кариоплазмы занимает эухроматин. Ядро имеет волнистые контуры и хорошо видимые поры, в цитоплазме клетки находится мелкогранулярный материал, рибосомы, небольшое количество митохондрий, кристы развиты слабо. Среди этих клеток практически в центре располагается эритроцит, характеризующийся высокой электронной плотностью, с большим темным ядром и более светлой цитоплазмой.

Кроме этого надо отметить, в эти сроки в ряде исследованных участков больше выражены деструктивные процессы. В кератиноцитах ядра сморщены, органеллы различимы слабо, в отдельных участках цитоплазмы имеются короткие трубочки ГЭР, между ними располагается небольшое количество рибосом. В дерме у фибробластов развиты цистерны ГЭР, они расширены и содержат хлопьевидный материал, в цитоплазме имеются остаточные тельца и небольшое количество лизосом. В одном из фибробластов содержится два ядра, одно из них в состоянии кариопикноза, второе небольших размеров с измененной поверхностью.

Выявлено, что в этот срок клетки грануляционной ткани активно контактируют между собой. Так при контакте двух фибробластов отмечено, что они имеют крупные ядра, в которых преобладает эухроматин, в крупных ядрышках имеется гранулярный компонент, поверхность ядра сильно измененная, цитоплазма имеет вид узкого ободка. Указанные признаки подтверждают интенсивную функциональную активность этих клеток. Между фибробластами располагаются коллагеновые волокна, идущие в различных направлениях.

Выявляются также контакты фибробластов и нейтрофилов, в таких фибробластах ядро морфо-функционально активное, имеет крупное ядрышко, в кариоплазме много РНП гранул, видимы многочисленные ядерные поры. В цитоплазме развиты цистерны ГЭР, они умеренно расширены. Контактирующий нейтрофил имеет три сегмента ядра, с небольшим количеством эухроматина и РНП гранул, в цитоплазме содержится много гранул различной формы и митохондрий. В рядом расположенных коллагеновых волокнах хорошо видна поперечная исчерченность (рис.79).

Таким образом, через 21 сутки после нанесения ран и четырех кратного применения мази МАОП-гель, ультраструктурные исследования показали, что происходит восстановление межклеточного вещества дермы, формирование зрелых коллагеновых волокон, усиливается функциональная активность клеточных структур, результатом, которого является активизация синтеза белков, обеспечивающих формирования структур соединительной ткани и нормального функционирования самих клеток. Восстанавливается капиллярная сеть кровеносных сосудов поврежденной дермы.

На 28 сутки после нанесения ран и применения мази МАОП-гель в области пальцев у крупного рогатого скота, основными активно функционирующими структурами в зоне заживающей раны являются фибробласты и коллагеновые волокна (рис. 80).

В исследованных в морфо-функционально активных фибробластах (рис.81), выявляется крупное, хорошо функционирующее ядро, с большим количеством эухроматина и РНП гранул, ядрышки этих клеток также крупные. В узком ободке цитоплазмы и имеются рибосомы, в отдельных местах плазмолемма имеет нечеткие контуры. В межклеточном веществе также встречаются фрагменты фибробластов, в которых эндоплазматическая сеть развита слабо, имеются свободные полисомы, вакуоли, плазмолемма не всегда четкая.

Коллагеновые волокна располагаются достаточно плотно друг к другу, иногда образуют толстые пучки высокой электронной плотности, по сравнению с предыдущим сроком они имеют больший диаметр (рис.82).

В некоторых исследованных зонах наряду с наличием активно функционирующего фибробласта, имеются клетки в состоянии некроза, вокруг которого располагаются гранулы нейтрофильного лейкоцита.

В межклеточном веществе среди коллагеновых волокон располагаются фрагменты клеток с цистернами ГЭР, причем большая часть клетки находится в состоянии некроза, в этих фрагментах отсутствует плазмолемма. В некоторых участках среди коллагеновых волокон располагается деструктивный материал, образовавшийся в результате некроза клеток.