салфетки необходимо согреть полость (камеру) шприца, установить соломинку со стороны текстильной пробки в полость (камеру) шприца. Конец соломинки со стороны запайки обрезают в середине воздушного пузырька стерильными ножницами строго перпендикулярно. Ножницы должны быть острыми, так как тупые ножницы деформируют соломинку, при этом может нарушиться плотность соединения её с внутренней частью конусного конца защитного чехла. На шприц с соломинкой надевают защитный чехол, который закрепляют. Надежность закрепления проверяют слабым надавливанием большого пальца руки на поршень шприца: чехол не должен сдвигаться. При этом удаляется воздушный пузырек и появляется капелька спермы, которую можно исследовать под микроскопом на подвижностью
6. ОЦЕНКА СПЕРМЫ ПО ПОДВИЖНОСТИ (АКТИВНОСТИ)
6.1. Для проверки качества спермы необходимо использовать подогретые предметные и покровные стекла, находящиеся во время работы на обогреваемом столике микроскопа. Для взятия пробы на исследование вращательными движениями сперму смешивают, приоткрывают пробку флакона и берут стерильной стеклянной палочкой или пастеровской пипеткой каплю спермы и помещают на предметное стекло. Флакон со спермой немедленно закрывают пробкой. Дают сперме нагреться до 38°С на обогревательном столике микроскопа. После чего при увеличении микроскопа в 120-200 раз отыскивают в поле зрения спермии.
Подвижность спермиев оценивают по десятибалльной шкале. Высшую оценку (10 баллов) получает сперма, в которой практически все спермии имеют прямолинейно-поступательное движение. При оценке 9 баллов таких спермиев 90%, 8 баллов - 80, 7 баллов - 70% спермиев движутся прямолинейнопоступательно и т.д.
Из каждой партии проверяют сперму из 1-2 доз на активность под микроскопом.
В соответствии с ГОСТ 26030-83 (Изменение №1) «Сперма быков замороженная» к использованию допускается сперма быков-производителей, имеющая следующие характеристики:
-
подвижность спермиев, баллы (%), не ниже 4 (40);
-
число спермиев с прямолинейно-поступательным движением (ППД) в дозе, млн., не менее 15;
-
объем дозы, см3 , 0,1 - 1,0;
-
выживаемость спермиев при 38°С, не менее 5 часов;
-
коли-титр отрицательный;
- микроорганизмы, вызывающие инфекционные заболевания, не допускаются. От быков-производителей, проверенных по качеству потомства и признанных улучшателями, а также от быков мясных пород, допускается к использованию сперма с подвижностью не ниже 3 баллов (30%) и числом спермиев с прямолинейно-поступательным движением в дозе не менее 10 млн.
7. ТЕХНИКА БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С СОСУДАМИ ДЬЮАРА И ЖИДКИМ АЗОТОМ
Оператор искусственного осеменения должен пройти инструктаж по технике безопасности, иметь допуск на работу с сосудами Дьюара. При этом необходимо руководствоваться «Рекомендациями по технике безопасности и эксплуатации сельскохозяйственного криогенного оборудования» и "Правилами по охране труда в животноводстве, утвержденными Министерством сельского хозяйства Российской Федерации. Персонал, работающий с сосудами Дьюара и жидким азотом, обязан надевать защитные очки (лучше щитки из органического стекла) и перчатки (или рукавицы). Одежда должна быть без карманов, брюки - без манжет и закрывать верх обуви, рукавицы - свободные, чтобы при необходимости их можно было легко сбросить. При попадании жидкого азота на кожу пораженный участок следует немедленно обильно обмыть водой.
Помещение, где работают с жидким азотом или хранят сосуды Дьюара, следует оборудовать приточно-вытяжной принудительной вентиляцией.
Нельзя заглядывать в сосуд для определения уровня заполнения азотом.
Не закрывать горловину сосуда герметически, так как это может привести к повышению давления паров во внутреннем сосуде и взрыву; использовать только крышку, входящую в комплект.
Оператор обязан следить за уровнем жидкого азота и периодически проверять его. Для определения уровня жидкого азота рекомендуется пользоваться деревянной мерной линейкой или деревянной палочкой длиной, соответствующей высоте сосуда. Предварительно продезинфицированную спиртовым тампоном линейку или палочку опускают внутрь до дна сосуда на 5- 6 секунд. После извлечения на воздухе часть линейки или палочки, которая была погружена в жидкий азот, покрывается инеем, по высоте которого определяют уровень азота в сосуде.
8. ТЕХНИКА ОСЕМЕНЕНИЯ КОРОВ И ТЕЛОК
8.1. Для осеменения коров и телок сперму вводят в шейку матки (цервикальный метод). Существует 3 способа цервикального осеменения: ректоцервикальный, маноцервикальный и визоцервикальный.
Независимо от способа введения спермы оператор обязан:
-
проводить осеменение коров и телок на пункте или в месте расположения животных с соблюдением санитарных правил;
-
быть в чистой спецодежде, с коротко подстриженными ногтями рук;
-
следить, чтобы привод коров и телок на пункт и фиксация их в станке были безболезненными и не вызывали стрессовых реакций;
-
подготовить наружные половые органы у животных для осеменения;
-
перед осеменением осторожным вращением флакона или другой упаковки со спермой кратковременного хранения или оттаянную в растворе
лимоннокислого натрия сперму в ампулах, флаконах хорошо смешать и проверить на подвижность спермиев. 8.1.1. Ректоцервикальный способ. Корове или телке сперму вводят с помощью стерильных инструментов через влагалище в шейку матки, фиксируя ее рукой через прямую кишку.
Положительное влияние на оплодотворяемость коров и телок оказывает массаж половых органов в процессе осеменения, который снимает ответную реакцию самки на введение инструментов в половые пути, а также усиливает моторику матки, что способствует продвижению спермиев к яйцеводам и наступлению овуляции.
Для осеменения коров и телок спермой в облицованных гранулах применяют специальный инструмент, который состоит из металлического трубчатого корпуса, проволочного стержня с дисковым упором и защитного чехла. Один конец корпуса снабжен круглым фланцем для фиксации удлинителя пальцами, а другой - наружной резьбой для соединения с инструментом.
Перед осеменением инструмент собирают в такой последовательности. Подготовленную гранулу со спермой вкладывают в канал одноразового катетера, который присоединяют к удлинителю. Поршнем толкателя спермодозу досылают до переднего упора. В таком виде удлинитель с наконечником помещают в тонкостенный полимерный чехол, один конец которого запаян и имеет сужение, а другой - фиксируют в подвижном замке. Через выходное отверстие наконечника инструмента делают прокол гранулы со спермой стерильной иглой.
Подготовленный инструмент вводят в половые пути самки. После прохождения влагалища наконечник устройства освобождают от чехла, одновременно вводя его в цервикальный канал самки. Снятие чехла производят путем сдвигания его в направлении, противоположном движению инструмента при помощи подвижного замка, в котором зафиксирован свободный конец полимерного чехла.
При введении наконечника в цервикальный канал на достаточную глубину выдавливают сперму путем нажатия на упорную кнопку толкателя. После осеменения катетер вместе с чехлом удаляют, а удлинитель используют для последующих осеменений в том же порядке без дополнительной стерилизации. При использовании упрощенного удлинителя защитный чехол не применяют.
Если сперма расфасована во флаконы или другие емкости, из них в пипетку набирают дозу объемом 1 мл.
Перед осеменением оператор берет пакет с одноразовыми пипетками, протирает тампоном, смоченным 96°-ным спиртом, один из углов пакета и надрезает его стерильными ножницами или прорывает концом пипетки. Выдвинув пипетку да 1/3 длины, соединяет ее со стерильным шприцем при помощи муфты (полиэтиленовой, резиновой) или с полиэтиленовой ампулой, предварительно срезав ее колпачок. Затем он пипетку извлекает полностью, а надрезанный край пакета герметично закрывает.
