полевых условиях влагалищное зеркало, корнцанг, стеклянные палочки, ножницы и другие инструменты, можно обеззараживать обжиганием их поверхности не коптящим пламенем походной газовой плитки, примуса, спиртовки или тампона, смоченного 960 -ным спиртом.
4.5. Растворы хлористого и лимоннокислого натрия приготавливают ежедневно. В 100 мл дистиллированной или кипяченой профильтрованной воды растворяют 1 г хлористого натрия. Раствор лимоннокислого натрия (трехзамещенного пятиводного) готовят путем растворения в 100 мл дистиллированной воды 3 г лимоннокислого натрия, подогревают до 90-95°С и разливают в стерильные пронумерованные банки.
Для приготовления раствора фурацилина берут 1 л кипящей воды, вносят 10 г хлористого натрия и 0,2 г фурацилина, охлаждают и фильтруют. Раствор хранят не более 2 дней в затемненном месте или в банке из темного стекла с притертой пробкой.
Применяемый 70°-ный раствор спирта готовят путем добавления к 73 мл 96°"ного спирта-ректификата 27 мл прокипяченной дистиллированной воды. Правильность приготовления раствора проверяют спиртометром.
4.6. Во время каждой 12-й заправки из сосуда Дьюара полностью удаляют жидкий азот и заправляют его свежим жидким азотом, при этом семя на период замены азота помещают в другой сосуд с азотом.
5. ПОДГОТОВКА ИНСТРУМЕНТОВ, ОТТАИВАНИЕ СПЕРМЫ
5.1. Подготовка инструментов к работе Техник надевает белый халат, колпак или косынку. Моет стол и руки. Оператор снимает с микроскопа чехол, по необходимости протирает, подключает электроосветитель, регулирует освещенность в микроскопе, делая её неяркоматовой; предметные и покровные стекла кладет на обогревательный столик микроскопа.
Готовит термостатированную водяную баню температурой 38о С, опускает в неё термометр.
На чистый стол ставит тампонницу с тампонами, пропитанными 96%-ным спиртом.
На край стола кладет перчатки, канцелярские скрепки, пипетки, ампулы, салфетки и другие необходимые для осеменения инструменты согласно технологии.
Пинцетом достает первый спиртовой тампон, обрабатывает пальцы рук от кончиков пальцев к ладони, свободную часть стола и выбрасывает тампон. Пинцетом берет второй тампон, обрабатывает подставку для инструментов, протирая сначала среднюю часть, а затем боковые и нижнюю (всё в одном направлении), ставит на стол, тампон выбрасывает. Третьим тампоном обрабатывает стеклянную палочку, пинцет, корнцанг, ножницы, осеменительный инструмент, ампулу с цитратом (всё по направлению сверху вниз), выбрасывает его.
Обработанные инструменты кладет на подставку, а ампулу цитрата вскрывает резаком, так, чтобы в отверстие свободно входила гранула. Помещает её в водяную баню или на столик Морозова для подогрева на 2-3 мин. Нельзя вскрывать ампулы, разбивая их по наружной стенке, так как стекло, попавшее в циртат, может травмировать слизистую оболочку матки. 5.2. Оттаивание спермы в открытых гранулах. Четвертым тампоном оператор обрабатывает пакет с пипетками (чехлами). Угол пакета надрезают стерильными ножницами или прорывают концом пипетки.
Выдвигает пипетку на 1/3 длины, соединяет её со стерильным шприцем (или с полиэтиленовой ампулой) с помощью муфты.
Техник надевает защитные очки и перчатки, открывает сосуд Дьюара, быстро подтягивает к верхней третьи горловины (не более 5 с.) канистру с тубой и вскрывает её. Извлекает стерильным, предварительно охлажденным в азоте, пинцетом(корнцангом) гранулу и переносит её в подготовленную ампулу или флакон с раствором цитрата. Тубу с оставшимся семенем сразу закрывает и опускает с сосуд Дьюара в положение хранения. Закрывает сосуд крышкой. Эти манипуляции должны занимать не более 5 с.
Оттаивать гранулу необходимо при температуре +38о С в течении 8-10 с, осторожным вращательным движением перемещая ампулу со спермой в водяной бане до тонкого ледяного стерженька. После оттаивания ампулу со спермой насухо вытирают стерильной салфеткой, ставят в штатив из теплоизолирующего материала и определяют качество спермы. Категорически запрещается оттаивать в одной ампуле более одной гранулы, а так же оставлять оттаянную сперму в водяной бане. При заправке пипетки поршень шприца, соединенного с ней, следует отвести на 1/3, создав тем самым достаточный запас воздуха для выталкивания всей спермы из пипетки. Только после этого набирают сперму, не допуская её попадания в шприц. Для проверки герметичности инструмент располагается вертикально: столбик семени должен остаться на месте.
Для осеменения коров спермой, замороженной в открытых гранула, используют стерильные одноразовые полистироловые пипетки, соединенные полиэтиленовым переходником или эластичной трубкой длиной 30-50 мм со шприцом на 2-5 мл. 5.3. Оттаивание спермы в облицованных гранулах Гранулы объемом 0,25-0,33 мл осуществляют без разбавления в 2,9%-ном растворе цитрата натрия. Техник надевает защитные очки и перчатки, открывает сосуд Дьюара, быстро подтягивает к верхней третьи горловины (не более 5 с) канистру с тубой и вскрывает её. Извлекает стерильным, предварительно охлажденным в азоте пинцетом (корнцангом) облицованную гранулу и быстро переносит её пинцетом с широкими браншами в водяную баню температурой 38-40о С, оттаивает до появления тонкого стерженька льда. Через 8-10 с гранулу извлекает, насухо вытирает стерильной салфеткой, проверяет на герметичность путем легкого сжатия между двумя пальцами:
герметичной считается спермодоза, у которой не обнаружена утечка содержимого. После этого оценивает качество спермы на подвижность. 5.4. Оттаивание спермы в соломинках, укупоренных стеклянными шариками (литовская технология).
Техник надевает защитные очки, перчатки, подтягивает к верхней трети горловины сосуда Дьюара (не более 5 с) канистру с тубой, быстро извлекает стерильным, предварительно охлажденным в азоте, пинцетом (корнцангом) соломинку, встряхивает её 2-3 с и погружает в воду термостата для оттаивания. Встряхивание способствует испарению жидкого азота и предупреждает возможное растрескивание соломинок и выдавливание укупорочных шариков. Канистру с семенем опускает в азот. Сосуд закрывает крышкой. Оттаивать соломинку необходимо в течении 10 с при температуре 38о С, перемещая её круговыми движениями в воде.
Затем соломинку извлекают из термостата и, тщательно осушая стерильной марлевой или бумажной салфеткой, проверяют запись клички и номера быка на соломинке, энергично встряхивают, чтобы воздушный пузырек переместился в конец соломинки. Поршень осеменительного шприца оттягивают примерно на 90 мм, в трубку до упора вставляют соломинку, чтобы кончик её с воздушным пузырьком был снаружи. Конец соломинки обрезают стерильными ножницами строго перпендикулярно через воздушный пузырек на расстоянии около 7 мм от конца соломинки. Ножницы должны быть острыми и использоваться только для обрезания соломинок. Тупые ножницы деформируют соломинку, при этом может нарушаться плотность соединения её с внутренней частью конусного конца (адаптера) защитного чехла. На шприц с соломинкой надевают защитный чехол, который тщательно закрепляют фиксатором. Надежность закрепления проверяют слабым надавливанием большого пальца на поршень: чехол не должен сдвигаться. При этом удаляется воздушный пузырек и появляется капелька спермы, которую можно исследовать под микроскопом. 5.5. Оттаивание спермы в пайетах (французская технология).
Техник надевает защитные очки, перчатки, подтягивает к верхней трети горловины сосуда Дьюара (не более 5 с) канистру с тубой, быстро извлекает стерильным, предварительно охлажденным в азоте, пинцетом (корнцангом) соломинку за запаянный конец, встряхивает 2 раза, чтобы удалить остатки азота в текстильной пробке, и быстро погружает в термостат для оттаивания. Встряхивание способствует испарению жидкого азота из текстильной пробки и предупреждает возможное выдавливание пробки из соломинки. Канистру с семенем опускают в азот. Сосуд закрывает крышкой. Оттаивать соломинку необходимо в течении 10 с при температуре 38о С, перемещая круговыми движениями в воде.
Затем соломинку извлекают из термостата, тщательно осушают стерильной марлевой или бумажной салфеткой. Проверяют запись клички, номер быка местонахождение пузырька воздуха (должен находиться с той стороны соломинки, которая запаяна в лаборатории). Поршень шприца оттягивают на 12 см (стержень поршня слегка искривлен, что удерживает его в одном положении). С помощью фильтровальной бумаги или стерильной марлевой
