Современные технологии получения и сохранения телят

Продолжение · 7

В практике имеют место случаи, когда некоторые техники осеменаторы и даже специалисты оценивают качество спермы не по активности спермиев, а по количеству их в поле зрения микроскопа и дают оценку - «сперма ред­кая». После чего предъявляют претензии племпредприятию, что сперма сильно разбавлена или необоснованно увеличивают дозу спермы для введе­ния корове или телке. В этой связи следует напомнить, что данные, полу­ченные еще в первые годы применения искусственного осеменения, показа­ли, что увеличение дозы спермы свыше 1 мл вызывают не повышение, а снижение оплодотворяемости. Причины этого парадокса двоякие (В.К. Ми-лованов, 1964).

Во-первых, введение спермы вызывают активную реакцию половых пу­тей самки - гиперемию, слущивание эпителия, массовый выход лейкоцитов, усиление мышечных сокращений половых путей и т.д. При больших дозах спермы реакция получается чрезмерно сильной, неблагоприятной как для продвижения и созревания спермиев в половых путях, так и для питания и развития продукта оплодотворения-зиготы.

Во-вторых, доказано, что если к яйцеклетке подходит слишком большое число спермиев, то они своими весьма активными ферментами разрушают и убивают её. При несколько меньших, но тоже чрезмерных дозах оплодотво­рение происходит, но эмбрион отмирает на ранних стадиях развития, либо отстает в росте от нормальных.

По научным данным, оптимальное число спермиев для глубокого церви-кального осеменения коровы или телки составляет около 10-20 млн. ак­тивных спермиев. Это подтверждается как опытом стран с развитым живот­новодством, так и исследованиями отечественных авторов. Так в США при­меняют более чем 100-кратное разбавление спермы при 10 млн. активных спермиев в дозе и получают оплодотворяемость от первого осеменения 74-77% (Р.Фут и др., 1982). По данным А.П. Песковатского, уменьшение числа спермиев в дозе с 40-20 млн. до 6-8 млн. с соответствующим 40-50-кратным разбавлением спермы (вместо 10-20-кратного) в условиях глубокого замора­живания позволяет на 8-10% повысить оплодотворяемость коров от первого осеменения.

Таким образом, при проведении искусственного осеменения коров и те­лок необходимо тщательно контролировать количество и качество спермы.

Время осеменения коров. Правильно выбранное время осеменения, одно из важнейших условий высокой оплодотворяемости животных. При этом не­обходимо решить такие вопросы: когда осеменять коров после родов, во время охоты и по отношению к доению?

Когда нужно осеменять коров после родов? Этот вопрос изучали многие исследователи. В 1960 г. специалисты Башкирской АССР Кудрявцев и Акчу-рин сообщили, что коров можно осеменять через 50-54 ч, а ветврач Н.Г. Акименко (Дагестанская АССР) даже через 10-12 ч после родов (цит. по В.А. Морозову и др., 1966). Комиссионная проверка показала полную несостоя­тельность таких рекомендаций.

Л.П. Студенцов (1970) продолжал утверждать, что «у нормального ор­ганизма после нормальных родов быстро проявляется стадия полового цикла, поэтому самок всех сельскохозяйственных животных можно успешно осеме­нять в первые дни, а крольчих даже в первые часы после родов».

Л.И. Смирнов (1968), Э.Л. Горев (1981), А.И. Сергиенко (1968), B.C. Павлов (1984), B.C. Шипилов и др. (1986), И.И. Полянцев и В.В. Подберез-ный (2001) и другие считают целесообразным осеменять коров в первый ме­сяц после отела. По мнению авторов, только при таком подходе имеется ре­альная возможность предупредить бесплодие и значительно поднять продук­тивность коров. Пропускать же половые циклы, которые наступают до 30-45 дней после отела, значит искусственно создавать яловость.

По мнению В. Мартынова, А. Усольцева (1971) и др., с физиологической точки зрения наилучшие условия для оплодотворения имеются в первый ме­сяц после родов. В этот период коровы только начинают раздаиваться и из их организма не выносится с молоком такого большого количества пластиче­ских питательных веществ, как на втором или третьем месяце лактации, ко­гда молокоотдача достигает максимума. B.C. Шипилов (1970) сообщает, что корова с удоем 20 кг в сутки за месяц выделяет с молоком не менее 75 кг жизненно важных веществ (белка, жира, кальция, фосфора, сахара и др.), а месячный плод весит лишь 0,3-0,6 г.

Низкие результаты при осеменении коров в первый месяц после отела сторонники ранних осеменений объясняют серьезными погрешностями в кормлении, содержании и эксплуатации животных.

В то же время ряд отечественных и зарубежных авторов ( И.И. Соколов­ская, Е.Н. Грекке (1967), А.В. Бесхлебное (1976), Р.Х. Хантер (1984), А.Е. Болгов и др. (2003) приво­дят данные, показывающие вред ранних осеменений коров после отела. По мнению указанных авторов, низкие результаты при осеменении коров в пер­вый месяц после отела объясняются следующими двумя причинами.

1. Слизистая оболочка матки в течение первого месяца после отела еще не успевает восстановиться (трансформироваться) до нормального состоя­ния. Поэтому покровный эпителий не секретирует эмбриотроф - маточное молочко - основную пищу для зигот, бластоцист и ранних эмбрионов. Матка становится способной обеспечить образование эмбриотрофа только через 40-45 дней после отела. В то же время процессы роста и созревания фолликулов в яичниках, выделение эстрогенных гормонов и зрелых яйцеклеток происхо­дит независимо от завершения трансформации матки. Отсюда возникает про­тиворечие между готовностью коровы проявить охоту и овуляцию после оте­ла (через 14-20 дней) и невозможностью нормального питания эмбриона.

2. Преждевременное введение спермиев в необновленные после родов половые пути может приводить к обострению иммунных реакций в организ­ме коров. Как известно, спермии выполняют роль антигена. После осемене­ния антигены способны попадать в кровяное русло самки и стимулировать образование специфических антител. В 1928 г. М.П. Тушнов установил, что при соблюдении определенной дозировки и последовательности подкожных инъекций спермы в женском организме удается создать такую концентрацию сперматоксинов, при которой все поступающие во влагалище спермии уби­ваются. Следовательно, этим способом можно получить своеобразное искус­ственное бесплодие - прививку против беременности. По данным В.И. Весе-лова (1966), спермоиммунизация возможна при осеменении коров в первые 30 дней после отела, когда слизистая оболочка матки еще не восстановилась и спермии могут проникать в кровяное русло. Чем выше титр спермоантител в организме коровы, тем больше условий для гибели зиготы, понижения оп-лодотворяемости и развития бесплодия (К. Братанов и др., 1984).

По данным Г.У. Солсбери и Н.Л. Ван-Демарка (1966), А. Гордона (1988) оптимальными сроками осеменения коров в США считается 60-85 дн. В Гол­ландии - стране с высокоразвитым животноводством, где годовой удой со­ставляет 4200 кг, жирностью 4,5% коров не осеменяют раньше двух месяцев после отела.

Учитывая противоречивость выводов исследователей о наилучшем вре­мени осеменения коров после отела, нами (В.И. Коровко и др., 1973) изучал­ся этот вопрос в 14 лучших хозяйств Приморского края. Работа проводилась в племзаводе «Комсомолец», ОПХ «Степное», колхозе «Коммунар» и других хозяйствах. Проведенный нами анализ результатов осеменения более 18 тыс. коров показал, что в условиях Приморья хуже всего оплодотворяются жи­вотные в первом после родов месяце - всего 25,5% из числа осемененных. Во второй месяц беременности после отела оплодотворяемость повышается до 41,9%, а в третьем - до 48,1%.

Установлена прямая зависимость между числом осеменении на зачатие и временем первого осеменения после отела. Так, в группе коров осеменен­ных, до 30 дн. после отела, требовалось на зачатие в среднем 2,9 осеменения, в группе животных, осемененных в период с 46 до 90 дня, - только 1,8 осе­менения.

При ранних осеменениях увеличивается число запоздалых (повторных осеменений - через 30-60 дн). Если у коров, осемененных через 61-90 дней, она составляла 17,1%, то у коров, осемененных до 45 дней - 32,9%. Это гово­рит о высокой эмбриональной смертности у коров, осемененных в ранние сроки после отела.

Автор данной брошюры привел доводы противоположных сторон, вы­сказал свое мнение и надеется, что читатель сам сделает нужный вывод.

Время осеменения во время охоты. Известно, что у 60-70% коров и те­лок охота начинается утром и продолжается в течение 12-18 ч. Овуляция происходит через 10-12 ч. после конца охоты. При выборе времени осемене­ния необходимо учитывать, что в половых путях коров и телок спермии со­храняют оплодотворяющую способность до 24 часов. Яйцеклетка же утрачи­вает способность к нормальному развитию в первые 6 ч после выхода из по­лости фолликула. Исходя из этих физиологических закономерностей, луч­шим временем для осеменения считается вторая половина охоты. Установле­но, что у 80% коров овуляция происходит ночью. Поэтому вечернее осеме­нение пропускать не следует.

Время осеменения по отношению к доению. Моторика матки является необходимым фактором продвижения спермиев в половых путях коров. Соб­ственная подвижность спермиев в процессе их продвижения в матке и яйцеводах не играет существенной роли, так как они не в состоянии пройти рас­стояние, равное длине половых органов. Если бы это и случилось, то спер­мии израсходовали бы свою энергию и погибли к моменту входа в яйцеводы. Окситоцин, который выделяется из задней доли гипофиза во время охоты и во время доения, вызывает ритмические сокращения матки, которые продви­гают спермии к яйцеводу. Поэтому коров нужно осеменять до дойки или че­рез 2 ч после доения.

Ветеринарно-санитарные правила при проведении осеменения. Искусст­венное осеменение - это не просто механическое введение спермы в половые пути самки, а сложная гинекологическая операция, оказывающая влияние на весь организм. Выяснилось, что при искусственном осеменении во много раз увеличивается возможность инфицирования матки по сравнению с естественным, т.к. сперма вводится, минуя канал шейки матки, служащий своеоб­разным биологическим фильтром. Поэтому поддержание строжайшей чисто­ты во всей работе техника имеет решающее значение для получения высоких результатов при искусственном осеменении и предупреждения разноса за­разных болезней. Спермии необходимо предохранять и от непатогенных микроорганизмов, которые широко распространены в воздухе животновод­ческих помещений, в кормах, на кожном покрове. Они оседают на влагалищ­ном зеркале, осеменительных инструментах и вносятся на их поверхности во влагалище и шейку матки коровы или телки в момент осеменения. Много микробов попадает в половые пути из воздуха при раскрытии влагалища.

Заселение половых путей микрофлорой из внешней среды и несоблюде­ние санитарно-гигиенических правил при осеменении является одной из при­чин эмбриональной смертности. Причем, если гибель происходит на самых ранних стадиях развития (стадия зиготы), то она бывает незамеченной, но влечет за собой повторную охоту, которая наступает почти в нормальные сроки. Если же гибель произошла на стадии бластоцист или эмбриона, то по­вторная охота у животных проявляется через 30-60 дн. (И.И. Соколовская, 1989).

В связи с этим категорически запрещается осеменять коров и телок в стойлах скотного сарая (особенно визоцервикальным методом). Эту работу надо проводить только в типовых, хорошо оборудованных пунктах. Пункты для осеменения коров и телок необходимо строить по типовым проектам, № 807-6 и 807-7 (Н.Е. Козло, Г.П. Легошин). Пункт должен находится вблизи места содержания скота, потому что когда корову ведут на пункт, она упира­ется, ее подталкивают, а это отрицательно действует на оплодотворяемость. Его рекомендуется располагать подальше от ветеринарных помещений, так как запахи медикаментов губительны для спермиев. К пункту необходимо иметь хорошие подъездные пути для автомашин, оборудованных транспорт­ным резервуаром (ТРЖК) для своевременной заправки сосудов Дьюара жид­ким азотом.

Само помещение пункта должно состоять из манежа, моечной и лабора­тории. Для поддержания чистоты в помещении пункта столы желательно иметь в виде полок, покрытых легко дезинфицирующим материалом и легко крепится на брусках или кронштейнах к стене. Пол лаборатории покрывают линолеумом или метлахской плиткой. Стены всех помещений пункта обли­цовывают глазурованной светлой плиткой или, как и потолок, красят белой масляной краской.

В манеже устанавливают станок для фиксации животных, умывальник и стол. Наиболее простой, и удобный станок состоит из дугообразно изогнутой трубы, закрепленной на шарнирах к стене. Дугу опускают на корову так, что­бы она ограничивала ее движение. Удобное положение дуги по высоте регу­лируют ремнем, лежащим на пояснице коровы.

В лаборатории устраивают оборудованное рабочее место для проверки качества спермы, подготовки инструментов и для ведения документов учета.

Оборудование моечной состоит из стола и приспособления для мытья и стерилизации посуды, инструментов, халатов, полотенец и т.д.

Пункт искусственного осеменения необходимо содержать в абсолютной чистоте. Один раз в неделю полы во всех помещениях пункта, а также стены, станок, столы, табуреты, дезинфицируют 2-3%-ным раствором двууглекис­лой соды. При входе на пункт должен быть дезоковрик. В зимнее время его располагают внутри помещения для предотвращения замерзания дезраство-ра. Дезоковрик ежедневно заправляют 1-2% раствором едкого натрия. Тем­пература воздуха в помещении пункта должна быть в пределах 16-20° С. По­сторонним лицам, не имеющим отношения к работе пункта, вход запрещен.

Для работы в летних условиях целесообразно строить передвижные пункты (на санях) и закрытого типа размером 2,5-3 м. Стены делают из 20 мм досок в пазы, чтобы не было щелей. Изнутри пункт обивают полиэтиленовой пленкой или обоями. В помещении имеется лаборатория и манеж. В лабора­тории размещают стол, сосуд Дьюара, шкаф для хранения инструментов, а рядом с дверью в манеж - умывальник. Кроме того, на стене лаборатории ук­репляют календарь для техника осеменатора, а также полку для ящика с кар­точками на коров.

В манеже размещают станок для осеменения животных, который делают из деревянных брусьев (10 х 10 см) или железных труб диаметром 3-4 см. Между станком и перегородкой, отделяющей манеж от лаборатории делают проход шириной 40 см, в который входит доярка или скотник, чтобы помочь технику при осеменении, а затем открыть дверь для выхода коровы или телки из манежа. В манеже имеется две двери. В одну дверь корову заводят, через другую - выводят.

При входе и выходе из манежа делают прочные деревянные трапы, ко­торые на шарнирах крепят к полу манежа. При перемещении пункта трапы убирают внутрь манежа. На передвижных пунктах указанной конструкции очень удобно работать в любое время пастбищного периода независимо от погодных условий. Рядом с пунктом устраивают навес, где выдерживают ко­ров и телок после осеменения. Очень удобны для работы в летних условиях передвижные навесы (на санях). Указанные пункты и навесы применялись в работе хозяйств Черниговского, Пограничного, Хорольского и других рай­онов.

Хранить инструменты нужно в плотно закрытых, застекленных шкафах, окрашенных изнутри и снаружи белой масляной краской. Нельзя хранить ин­струменты на столе под марлей, так как марля не предохраняет от пыли и микробов, а создает только видимость чистоты.

На летних пунктах искусственного осеменения удобно хранить инстру­менты в специальных ящиках-термостатах. Размер термостата: длина 80 см, ширина 64 см, высота передней стенки 18 см, задней стенки - 24 см. Внутри его размещают электролампу для обогрева. Такие термостаты очень удобны для работы, особенно ранней весной и поздней осенью.

Техники по искусственному осеменению должны работать в чистых бе­лых халатах, колпаках или косынках, а в неблагополучных по заразным бо­лезням хозяйствах - в фартуках и резиновых сапогах. Спецодежду хранят только на пункте искусственного осеменения. При стирке халаты обязатель­но кипятят, а после стирки их проглаживают горячим утюгом.

Перед каждым осеменением и после него, техник должен мыть руки с мылом и щеткой, а затем дезинфицировать ватным тампоном, смоченным 70%-ным спиртом, или 3%-ным раствором перекиси водорода. При обра­ботке наружных половых органов нескольких животных нельзя пользоваться одним и тем же ватным тампоном. Все указанное выше необходимо делать для того, чтобы предупредить перенос заразных болезней от одного живот­ного к другому или от животных к человеку.

Техника осеменения коров и телок. При доставке животных на пункт, а также при осеменении необходимо избегать грубого обращения с ними, т.к. при этом ухудшается кровоснабжение половых органов, снижается моторика матки, задерживается овуляция. По данным ученых Одесского сельхозинсти­тута, при грубом обращении с животными оплодотворяемость составила 48%, в то же время коровы и телки, доставленные на пункт без насильствен­ных действий и которых кормили там концентратами, имели оплодотворяе­мость более 70%. В случае привода на пункт беспокойного животного, его необходимо выдержать перед осеменением 20-30 минут.

При осеменении животное должно быть хорошо зафиксировано в стан­ке, иначе затрудняется правильное введение шприца-катетера или осемени-тельной пипетки в канал шейки матки, травмируются половые пути. Травмы нарушают барьерные функции слизистых оболочек, что приводит к заболе­ванию эндометритом. Кроме того, при неправильной фиксации животное может нанести травму человеку.

При введении спермы в шприце-катетере или в осеменительной пипетке не должно быть пузырьков воздуха, иначе сперма после введения вытекает во влагалище. По этой же причине сперму необходимо вводить в канал шейки матки на глубину 4-7 см и выталкивать из осеменителного прибора мед­ленно (в течение 5 секунд). При введении спермы во влагалище корова часто остается неоплодотворенной. Объясняется это тем, что лишь 5% спермиев, попавших во влагалище, достигает шейки матки. Разбавление и дозирование спермы проводится на станциях искусственного осеменения и рассчитывает­ся на введение именно в канал шейки матки. Однако в практике нередки слу­чаи, когда сперму невозможно глубоко ввести в канал шейки матки (из-за анатомических особенностей полового аппарата, травмирования при родах). В таких случаях сперму нужно вводить в глубокую часть влагалища, но в ко­личестве 2-3 мл (2-3 дозы замороженной спермы).

Продолжение · 8

Сперму перед введением необходимо подогревать до температуры 38°С. Наблюдениями сотрудников Детскосельской станции искусственного осеме­нения (Ленинградская область) установлено, что подогревание спермы по­вышает оплодотворяемость коров на 12%.

После осеменения корову или телку необходимо оставить на некоторое время в станке, иначе при движении или прыжках сперма может вытечь из канала шейки матки. С этой же целью осеменяемых животных ре­комендуется выдерживать в стойле до конца охоты. В летнее время на паст­бище животных следует держать под навесом, чтобы они не перегревались. Установлено, что повышение температуры тела всего на 1°С приводит к без­результатному осеменению.

Выстойка также необходима для наблюдения за послетечковыми выде­лениями и определения эффективности осеменения.

Учет и отчетность на пункте. Получать высокие результаты при искус­ственном осеменении невозможно без хорошо организованного учета. Необ­ходимо вести учет физиологического состояния животных, особенностей ро­дов, послеродового периода, феноменов полового цикла, а также расхода спермы и ее оплодотворяющей способности.

В Приморском крае широкое применение получила карточная система учета. Сущность ее в том, что на каждое животное заводится специальная карточка, в которую заносятся данные о животном и его воспроизводитель­ной функции, о ветеринарных обследованиях и мерах по лечению больных коров. Карточная система учета позволяет в любое время года получить дан­ные о работе по воспроизводству стада (общее поголовье животных, сколько стельных коров, в каком месяце и сколько будет родов, сколько животных не осеменено, количество больных животных и т.д.).

ТРАНСПЛАНТАЦИЯ ЭМБРИОНОВ

Под трансплантацией эмбрионов (зародышей) понимают процесс извле­чения их из матки животных - доноров и перенос в матку животным-реципиентам.

Краткая история и значение метода

Впервые в истории биологии анг­личанину Вальтеру Хипу в 1891 г. удалось получить беременность после пересадки 2 эмбрионов от крольчихи ангорской породы крольчихе породы бельгийский чемпион.

В нашей стране много работали по пересадке эмбрионов животных в 40-50-х годах: А.И. Лопырин - на овцах, И.И. Соколовская - на кроликах. В 1950 г. нашему соотечественнику профессору Квасницкому А.В. впервые в мировой практике удалась пересадка эмбриона свинье.

История трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота начинается с 1951 г., когда О. Уиллем (США) пересадил хирургическим путем яйцеклет­ку от одной телки другой и получил живого теленка. В 1964 г. в США родил­ся первый теленок после нехирургической пересадки. Это ознаменовало но­вый поворот в развитии дальнейшей работы по трансплантации эмбрионов, бескровный метод значительно упростил и удешевил получение трансплан­тантов и позволил перейти к практическому его использованию в животно­водстве наравне с искусственным осеменением.

В нашей стране первого теленка от хирургической пересадки эмбриона получил И.Н. Григорьев в 1977 г., а от нехирургической - Н.И. Сергеев в 1978 г.

Современный этап биотехнологии связан с открытием основных за­кономерностей в процессах жизнедеятельности организмов на молекулярном уровне. Важную роль в этом сыграли работы Д. Уотсона и Ф. Крика (1955) и М. Ниренберга (1963), которыми было расшифровано строение ДНК и от­крыт универсальный механизм синтеза белка, заложенный в генетическом коде.

Мы теперь знаем, что все наследственные свойства организмов закоди­рованы в длинных цепочках ДНК - дезоксирибонуклеиновой кислоты. У че­ловека, например, длина обеих цепей ДНК, содержащихся в одном спермато­зоиде или ядре яйцеклетки, около 180 см. Эта двойная нить на протяжении своего существования подвергается непрерывным воздействиям, ведь она окружена молекулами, находящимися в состоянии непрерывного теплового движения. Есть в клетке и химически активные молекулы - свободные ради­калы и многие другие, также способные нарушать первичную структуру це­пей ДНК. Не следует забывать и о квантах вездесущей радиации.

Практическое значение метода трансплантации эмбрионов началось в 70-е годы прошлого столетия. В ряде стран Западной Европы и на Американ­ском континенте. Несмотря на то, что техника эмбриопересадок была не­безопасной для здоровья животных и весьма дорогостоящей, фермеры охот­но соглашались на их проведение, так как видели огромные потенциальные возможности, заложенные в этом методе. Наибольший размах эта работа по­лучила в США, Канаде, Дании, ФРГ, Великобритании, Франции. Стреми­тельный прогресс в этой области можно проследить на примере США и Ка­нады, где в 1979 г. было получено 15 тыс., в 1986- 50 тыс. телят и в 1990 г. -500 тыс. телят.

Первой европейской страной, занимающейся трансплантацией эмбрио­нов крупного рогатого скота на торговой основе стала Дания, где эта работа проводится с 1982 г. В том же году был разработан метод глубокого замора­живания эмбрионов.

Выживаемость эмбрионов после замораживания и оттаивания составля­ла 85-90 %, а оплодотворяемость - 50-60 %, то есть такая же, как при транс­плантации свежих эмбрионов.

В нашей стране эта работа была развернута в 1984 г. Для ее проведения было создано 30 центров по пересадке эмбрионов. В 1987 г. было сделано около 2000 эмбриопересадок.

Последовавшие затем годы перестройки, сопровождавшиеся разруши­тельными тенденциями в экономике, привели, в числе прочего, к свертыва­нию работ по трансплантации эмбрионов, резкому сокращению производст­венной базы для их проведения.

Трансплантация эмбрионов позволяет значительно увеличить число по­томков от лучших коров и создать наиболее однородное, однотипное стадо высокопродуктивных животных в более короткий срок. Так, от одной коровы за жизнь можно получить 10-12 телят, в среднем 3-5. А от одного донора можно получать эмбрионы 4-5 раз в год, поэтому реальная возможность по­лучать по 20-25 телят. В США от одной коровы получили 136 телят за год. Таким образом, используя для получения эмбрионов 20 коров в течение од­ного года можно создать стадо в 200 коров. Естественным путем можно по­лучить не более 10 телочек и 10 бычков.

Особое значение метод пересадки эмбрионов имеет для получения вы­дающихся по племенной ценности производителей, так как увеличивается возможность отбора быков от матерей с рекордной молочной продуктивно­стью. В США и Канаде более 70 % быков-производителей, работающих на станциях искусственного осеменения, получены таким методом.

Полученные в результате заказных спариваний телочки - трансплан­танты являются хорошим селекционным материалом для выбора среди них рекордисток нового поколения и использования их в качестве матерей быков.

Пересадка эмбрионов значительно увеличивает эффективность селек­ционной работы. Так как при естественном или искусственном осеменении теленок наследует лишь часть полезных свойств и признаков быка и при­обретает многие наследуемые черты коровы. А при пересадке оплодотво­ренных яйцеклеток коровам - "инкубаторам" их влияние на потомство сво­дится практически к нулю.

Метод трансплантации эмбрионов имеет огромную ценность для уско­рения создания определенных семейств, линий и типов животных в обычных стадах, распространения в природе мутантных генов (например, устойчи­вость к какому-либо заболеванию) или, напротив, выявления носителей ре­цессивных генов и своевременного выбраковывания таких животных из ста­да.

При выведении новых пород или улучшении существующих практику­ется международный обмен животными. В 1974 г. в США было организовано Международное общество по трансплантации эмбрионов (МОТЭ). Обмен эм­брионами удешевляет и упрощает проблему транспортировки животных. В этом случае почти полностью отпадает необходимость сложных карантин­ных ветеринарных требований, так как эмбрионы практически свободны от бактерий и грибов вследствие многократной процедуры промывания в сте­рильных средах, обогащенных антибиотиками, трансплантация эмбрионов является высокоэффективным методом акклиматизации импортируемых жи­вотных.

Большое значение имеет этот метод для оздоровления стад молочного скота от заболеваний лейкозом, болезни Ауески, инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи крупного рогатого скота, так как вирусы этих болезней не передаются через эмбрион.

Трансплантация эмбрионов является единственным возможным спосо­бом получения потомства от ценных в племенном отношении коров, утра­тивших способность к размножению в результате болезни, несчастного слу­чая или по возрасту.

Удивительные перспективы, которые открывает метод пересадки эм­брионов в разведении животных, стали реальностью в результате таких вы­дающихся открытий как методы суперовуляции, стимуляции и синхрониза­ции охоты, нехирургической пересадки эмбрионов и др.

Отбор доноров и реципиентов

Коров-доноров выбирают из племенно­го стада, хорошо реагирующих на гормональную обработку и дающих биоло­гически полноценные эмбрионы. При отборе коров-доноров учитывают по­казатели молочной продуктивности, экстерьер и конституцию, желательный тип, линейную и породную принадлежность, что особенно важно для полу­чения от этих животных высокоценных быков. Кроме того, корова-донор должна иметь известное происхождение, подтвержденное по группам крови.

Молочная продуктивность коров-доноров должна составлять 7-12 тыс. кг молока в год, жирностью 3,6-4,3%.

Животные, признанные донорами, должны быть здоровыми, иметь среднюю или заводскую упитанность и ненарушенный обмен веществ, нор­мально циклировать. Тщательным клинико-гинекологическим исследовани­ем у них исключают патологические процессы в репродуктивных органах (эндометрит, цервицит и др.), а также структурные изменения на почве пере­несенных болезней. Идеальный возраст коров для включения в группу доно­ров - 4-5 лет. По достижении 8-летнего возраста суперовуляторный ответ на­чинает снижаться.

На суперовуляцию коров-доноров обычно ставят не раньше 60 дней по­сле отела. На протяжении всего срока использования в качестве донора коро­вам организуют полноценное кормление при умеренной даче силоса и кон­центрированных кормов, ежедневно предоставляют активный моцион.

В качестве реципиентов можно использовать как коров, так и телок. При составлении плана пересадок эмбрионов следует учитывать вероятность вы­браковки 20-25% животных реципиентов из-за непригодности к воспроиз­водству вообще или из-за отсутствия активного желтого тела в яичниках в конкретно намеченные сроки пересадки. Телки - реципиенты должны иметь хорошо развитые органы воспроизведения с нормальными половыми цикла­ми.

Для наиболее распространенных молочных и молочно-мясных пород телки - реципиенты в 16-18 мес. должны иметь живую массу не ниже 350-380 кг. Коровы-реципиенты должны быть клинически здоровыми и не старше 7 лет. Минимальный срок пересадки - не ранее 60-го дня после отела.

Суперовуляция

Известно, что количество первичных фолликулов в яичниках половозрелой телки колеблется от 100 тыс. до 1 млн. Однако в про­цессе онтогенеза лишь небольшая часть из них реализуется в виде потомков. Остальные же овоциты подвергаются атрезии (обратному развитию) и в вос­производстве не участвуют.

Суперовуляцией (множественной овуляцией, полиовуляцией) называют состояние, вызванное гормонами, когда в яичниках животных развивается и овулирует в несколько раз больше яйцеклеток, чем при естественных усло­виях.

Метод суперовуляции разработал наш соотечественник М.М. Завадов-ский (1934). Он установил, что при введении сыворотки жеребых кобыл /СЖК/ у самок возрастает количество созревших фолликулов. В настоящее время все методы индукции овуляции основаны на использовании гормо­нальных препаратов. В зависимости от вида животных число овулирующих яйцеклеток может быть увеличено в 3-8 и даже в 50 раз. С помощью супер­овуляции становится возможным получение большого количества эмбрионов от лучших по продуктивности животных.

Гонадотропин СЖК лучше всего применять в середине полового цикла: с 8-го по 15-16 день. Препараты вводят однократно в дозе от 2 тыс. до 3 тыс. ИЕ. Через 48 ч после введения ГТЖК инъецируют простагландин ПГФ₂ или одно из его синтетических аналогов. Обычно через 2 дня наступает ста­дия возбуждения полового цикла с проявлением течки, охоты и овуляции. В этот период осеменяют коров-доноров.

С целью вызывания множественной овуляции применяют препараты фолликулостимулирующего гормона /ФСГ/. Отечественный препарат ФСГ супер по биологической активности и степени очистки не уступает им­портным препаратам подобного назначения. Хороший эффект достигается при обработке ФСГ супер с 9-х по 12-е сутки полового цикла. ФСГ супер инъецируют дважды в сутки - утром и вечером с интервалом в 12 ч по 4-8 мг. На третьи сутки после начала обработки инъецируют эстрофан в дозе 500 мкг /2,0 мл/, через 12 ч половинную дозу. Применяя эту схему, получают в среднем 5,3 полноценных эмбриона на донора.

Синхронизация охоты и овуляции у донора и реципиентов

Благода­ря глубокому изучению нейрогуморальной регуляции функции вос­произведения сельскохозяйственных животных (В.К. Милованов, Д.В. Смирнов-Угргомов 1940; А.А. Ухтомский, 1950) на основе учения академика И.П. Павлова стало возможным регулировать эти процессы.

В настоящее время хорошо известны связи гинофиз-яичники-матка, хо­рошо изучен высший регуляторный механизм на уровне гипоталамуса, кото­рый является частью центральной нервной системы, где интегрируются сигналы как о концентрации гормонов в крови, так и о нервных импульсах от рецепторов внутренних органов, а также от раздражения сенсорных органов факторами внешней среды.

Установлены и изучены в чистом виде так называемые релизинг-факторы гипоталамуса, благодаря которым происходит регуляция выделения и выработка в гипофизе гормонов: адренокортикотропного /АКТГ/, фоллику-лостимулирующего /ФСГ/, лютеинизирующего /ЛГ/, лютеотропного /ЛТГ/, сомотропного /СТГ/ и др. Релизинг гормоны обладают высокой би­ологической активностью. В настоящее время все они получены синтети­ческим путем и могут быть широко применены в практике для регуляции функции размножения.

Из других биологически активных веществ важную роль играют про­стагландины. Они впервые были обнаружены нью-йоркскими гинекологами Р. Курцюном и Ц.С. Лембом в 1931 г. в семенной жидкости человека. В 1935 г. доктор Морис Голдблат в Англии и физиолог Ван Эйлер в Швеции откры­ли, что вытяжка из половых желез барана, а также из семенной жидкости че­ловека может стимулировать сокращение мышечной ткани. Профессор Эй­лер окрестил это вещество простагландином, ошибочно предположив, что оно вырабатывается предстательной железой - простатой.

Широкое изучение простагландинов началось с 1957 г., когда шведско­му профессору Суну Бергстрему удалось выделить в чистой кристалличе­ской форме два из четырнадцати известных на сегодня простагландинов. Го­ворят, что С. Бергстрему пришлось переработать несколько сот тысяч семен­ников баранов, чтобы получить всего пару миллиграммов этого вещества. Если бы кто-нибудь из лаборантов, находившихся с ним рядом, чихнул в то время мир, видимо, не знал бы еще долгие годы, что такое простагландины.

Простагландины - это ненасыщенные жирные кислоты с длинной моле­кулярной цепью, содержащей 20 атомов углерода. Один из предшественни­ков простагландинов - арахидоновая кислота, главный источник которой фосфолипиды - основные компоненты клеточной мембраны. В настоящее время предполагают, что превращение этой кислоты в простагландины игра­ет роль регулятора в функциях клеточной мембраны, а эта мембрана и есть самая главная мастерская по выработке простагландинов.

Особое значение для воспроизводства потомства играют простаглан­дины группы Ф_2а, которые образуются в матке и через маточную вену прони­кают путем диффузии в яичниковую артерию, вызывают лютиолиз желтого тела, тем самым, давая возможность прерывать лютеолитическую фазу полового цикла и вызывать синхронный приход в охоту животных.

Для того чтобы обеспечить синхронную охоту и овуляцию у донора и реципиентов применяют лютеолитические гормоны (эстрофан, супер-фан и др.) путем двойной (с интервалом 2 суток) внутримышечной инъекции реципиентам с таким расчетом, чтобы повторное введение приходилось на 3-й день от начала обработки ФСГ супер коров - доноров.

За обработанным поголовьем ведут наблюдения для своевременного об­наружения течки, общей половой реакции, охоты. Реципиента закрепляют за донором когда полностью совпадают сроки начала охоты.

В США для синхронизации охоты у телок выпускается препарат под названием "Синхро - мейт - В". Он представляет собой совокупность двух гор­монов, один из которых имплантируется под кожу, а другой инъецируется внутримышечно. Имплантант помещается под кожу уха телки и сразу же по­сле этого следует инъекция другого гормона. Под действием этих двух гор­монов эстральный цикл телки прерывается и временно останавливается. Че­рез девять дней имплантант удаляют из уха животного. Начинается новый эстральный цикл. Так как имплантант удаляется одновременно у всех телок, то цикл начинается в одно и то же время. Через 48-54 ч у всех телок данной группы можно проводить случку или искусственное осеменение.

Кроме новых препаратов стимуляции половой функции животных, име­ют значение и старые приемы - применение гестагенов, эстрогенов, гонадо-тропинов и нейротропных препаратов.

С применением гормональных препаратов для стимуляции охоты, от­падает необходимость ежедневного контроля за состоянием половой актив­ности животных, открывается возможность осеменять соответствующие группы животных в короткие сроки, формировать однородные группы, луч­ше планировать и контролировать производственные процессы.

Осеменение доноров

Для осеменения коров-доноров отбирают быков, положительно оцененных по качеству потомства. Оцененные быки не долж­ны иметь хромосомных аномалий, а их потомство - наследственно обу­словленных экстерьерно-конституционных недостатков. Производителей подбирают в соответствии с селекционной программой для конкретного ста­да животных или в эксперименте по специальной методике.

Продолжение · 9

При проведении искусственного осеменения необходимо иметь в виду, что гормональное стимулирование донора затрудняет продвижение спермиев в половых путях самки. Поэтому полиовуляция у суперовулированных коров наступает примерно через 36 ч. после появления у донора признаков полово­го возбуждения, тогда как естественная овуляция происходит спустя 30 ча­сов. Донора следует осеменять 2-3 раза с 12-часовым интервалом, используя двойную дозу замороженно-оттаяной спермы, содержащей не менее 40 млн. активных спермиев. Наилучшее время для осеменения - 8-9 и 16-17 ч. Инст­румент рекомендуется проводить через шейку матки как при обычном искус­ственном осеменении.

Лучшим способом считают введение спермы поровну в каждый из рогов матки (В.В. Мадисом, В.Л. Мадисон, 1988).

Допускают осеменение доноров без выявленных признаков охоты через 60-72 ч после инъекции эстрофана (Н.И. Полянцев, В.В. Подберезный, 2001).

Извлечение эмбрионов

В настоящее время в мире почти повсеместно хирургический метод вымывания зародышей из яйцеводов и рогов матки вытеснен нехирургическим. Техника нехирургического извлечения эмбрионов (через цервикальный канал) с использованием 2- или- 3-х канального катете­ра Фоллея была предложена в середине 70-х годов Р. Елдсеном и Я. Хаслером.

Лучший срок для нехирургического извлечения эмбрионов - 7-8-е сутки (отсчет ведут от первого осеменения); в это время они находятся в передней и средней частях рогов матки, а сфинктер яйцепровода плотно закрыт.

Вымывание эмбрионов проводят в манеже, оборудованном фиксацион­ным станком. Подготовка включает фиксацию животного, обмывание за­грязненных мест и чистку кожного покрова, 12-часовую голодную диету и обследование яичников на наличие желтых тел. Извлечение эмбрионов про­водят при наличии в обоих яичниках не менее трех хорошо развитых желтых тел.

Для расслабления канала шейки матки и снятия напряжения прямой кишки делают низкую эпидуальную анастезию - вводят 5 мл 2%-ного рас­твора новокаина. Строптивым животным инъецируют миорелаксант (рампун или рометар).

Вымывание проводят при помощи резинового катетера Фоллея с при­способлением в виде надувного резинового баллона для фиксации его в роге матки. При подготовке к работе катетер Фоллея стерилизуют 96% спиртом-ректификатом, а внутрь вставляют стальной стилет.

Левую руку вводят в прямую кишку и освобождают ее от фекалий. Ка­тетер вместе со стилетом, заключенным в санитарный чехол, направляют в наружное отверстие-шейки матки и расчехляют.

Ладонью левой руки захватывают шейку матки и, поворачивая ее влево-вправо, натягивают на катетер, после чего катетер направляют в один из ро­гов матки. Как только верхушка катетера достигнет середины рога, дальней­шее его продвижение осуществляют по мере извлечение стилета. Убедив­шись в том, что конец катетера находится вблизи верхушки рога, а баллон впереди бифуркации, стилет полностью вынимают из катетера.

При помощи 20-граммового шприца баллон заполняют воздухом в объ­еме 10-15 см , что обеспечивает фиксацию катетера с одновременной изоля­цией промывочной полости, ограниченной передним участком рога матки.

Далее к катетеру подсоединяют специальный шприц объемом 50-60 мл, и медленно вводят в рог матки 40-50 мл фосфатного буфера Дюльбекко со­держащего 1% инактивированной сыворотки крови новорожденного теленка. Рог матки осторожно поглаживают, чтобы отделить эмбрионы от стенок мат­ки.

Промывную жидкость отсасывают шприцем и собирают в стерильный флакон. Вымывание повторяют 4-6 раз, расходуя 200-400 мл физиологической среды. При вымывании учитывают объем раствора, полученного из матки, так как с его уменьшением число вымытых эмбрионов снижается.

Потери раствора обычно связаны с недостаточной герметизацией про­мывной полости или нарушением целостности эндометрия (жидкость легко поглощается подслизистым слоем).

После окончания работы по вымыванию эмбрионов в одном роге, кате­тер переводят в другой рог и манипуляции повторяют. Процедура вымыва­ния эмбрионов обычно длится 20-50 мин. (Н.И. Полянцев, В.В. Подберезкин, 2001).

После завершения вымывания эмбрионов донору вводят через катетер Фоллея в рог матки растворенные антибиотики, например, гентамицин в дозе 500 мг, чтобы предупредить осложнения. Если планируется повторное ис­пользование коровы в качестве донора, то на 5-6-е сутки после вымывания зародышей ей инъецируют эсгрофан, что предотвращает развитие стельности и ускоряет возобновление очередного полового цикла.

Степень извлечения эмбрионов этим методом составляет 56-80%.

Поиск и оценка качества эмбрионов

Промывную жидкость отстаива­ют в термостате при 37°С в течение 30-40 мин. Затем верхний слой объемом 100 мл жидкости отсасывают. Нижний слой объемом 100 мм разливают в 2-3 пластмассовые чашки Петри с расчерченным на полосы или квадраты дном и ведут поиск эмбрионов под стереоскопическим микроскопом МБС-10 при 25-кратном увеличении. Обнаруженные эмбрионы забирают автоматической пипеткой и переносят в чашку Петри диаметром 40 мм или на часовое стекло с небольшим объемом физиологической среды.

Качество эмбрионов определяют по морфологическим показателям, функциональным пробам, в том числе с использованием витальных красите­лей, а также культивированием.

Биологически полноценными принято считать такие эмбрионы, которые имеют правильную шарообразную форму, гомогенную светлую цитоплазму, не поврежденную прозрачную зону, одинакового размера бластомеры с плотным межклеточным компонентом. Морфологическую оценку эмбрионов проводят на инвертированном микроскопе при увеличении 50-100 раз.

Различают четыре категории качества: отличное, хорошее, удовлетвори­тельное, плохое. Для пересадки используют эмбрионы отличного и хорошего качества. Вопрос о пригодности эмбрионов удовлетворительного качества решают после 12-24-часового культивирования при 37°С. Эмбрионы плохого качества бракуют.

Хранение эмбрионов

После оценки на жизнеспособность эмбрионы дважды промывают в фосфатном буфере Дюльбекко с добавлением анти­биотиков, засасывают в мини пайету вместе с небольшим количеством сре­ды. Для пересадки используют в течение 2-4 часов после извлечения из поло­вых путей донора.

Существуют несколько способов хранения эмбрионов: кратковременное вне организма, кратковременное в организме, долговременное в сжиженных газах.

При разработке способа кратковременного хранения эмбрионов вне ор­ганизма был использован опыт культивирования тканей и клеток. Наиболее подходящей средой для культивирования эмбрионов оказалась ТСМ 199 с добавлением 20%-ной эмбриональной сыворотки или сыворотки крови оле­ней. Эмбрионы хранят в атмосфере обогащенной углекислым газом, при постоянной температуре 37°С. В таких условиях они остаются жизнеспособными в течение 24-48 ч.

Для кратковременного хранения, интерес представляет помещение эм­брионов в половые пути крольчих, с последующей их трансплантацией.

После пребывания в этих условиях в течение 3-4 дней сохранили жизне­способность 75% эмбрионов коров и 16% эмбрионов свиней.

В 1947 году советским ученым И.И. Соколовской, И.В. Смирнову и В.К. Милованову впервые в мире удалось получить потомство у животных, при осеменении спермой подвергнутой замораживанию до -20-40°С. Родились нормальные жизнеспособные крольчата. Через три года этими же учеными были получены 66 крольчат, 11 телят и 5 ягнят от спермы, хранившейся в жидком азоте (- 196°С). В то же время аналогичные опыты проводились в Англии. Эти работы явились поворотной вехой в животноводстве. Они от­крыли совершенно новые возможности сохранять генофонды ценных живот­ных-производителей, транспортировать сперму на какие угодно большие расстояния. Интенсивное животноводство сегодня немыслимо без консерва­ции генетического материала.

Дальнейшие исследования показали, что в жидком азоте можно сохра­нить не только живые клетки растений и животных, но также зародыши на ранних стадиях их развития. В 1972 г. удалось разработать метод заморажи­вания эмбрионов млекопитающих (мышей). Глубокое замораживание эм­брионов крупного рогатого скота впервые осуществили Уилраден, Полдж и Раусон в 1978 г. Предложенная ими техника в последствии была усовершенст­вована Лейбо (1984). В нашей стране работы по криоконсервации эмбрионов были начаты в 1979 г. 12 марта 1980 г. в лаборатории трансплантации эм­брионов крупного рогатого скота Всесоюзного института животноводства был получен теленок от пересадки замороженного эмбриона. После замора­живания и трехсуточного хранения в жидком азоте эмбрион был оттаян и пе­ресажен телке-реципиенту, от которой и родился бычок, по кличке Заморо­женный с массой тела 45 кг.

При внедрении в практику криоконсервации эмбрионов отпадает необ­ходимость синхронизации охоты или содержания большого количества ре­ципиентов для однодневной пересадки, появляется возможность отделить процесс получения эмбрионов от собственно трансплантации. В таких стра­нах, как Франция, США и Канада, до половины получаемых зародышей в на­стоящее время подвергается криоконсервации.

Данный метод позволяет создавать банки эмбрионов и яйцеклеток особо ценных и редко встречающихся, а также находящихся под угрозой исчезно­вения животных. По данным К.И. Сергеева и др. (1991) в мире насчитывается более 1000 пород крупного рогатого скота. Хранение в замороженном со­стоянии позволит значительно снизить затраты на сохранение этого гено­фонда и распространение по всему земному шару пород животных с оценен­ным генетическим кодом.

В настоящее время применяется два способа глубокого замораживания эмбрионов: в программированном режиме (ступенчатое охлаждение) и одно­моментный (витрификация).

При замораживании по первому способу отобранные эмбрионы после­довательно проходят через растворы криопротектора (глицерин или диме-тилсульфоксид) возрастающих концентраций, приготовленные на фосфатно-буферном солевом растворе Дюльбекко с добавлением 20%-ной фетальной сыворотки теленка. После этого эмбрионы переносят в пробирки или ампулы (по 1-4 в каждую) вместе с 0,3-0,4 мл среды с криопротектором.

Емкости с эмбрионами герметизируют (пробирки закрывают фольгой, ампулы запаивают) и помещают в камеру замораживателя, где охлаждают до -7°С в режиме 1°С/мин. После достижения указанной температуры вызывают кристаллизацию среды. Для этого в жидком азоте пинцетом касаются стенки пробирки (ампулы) в зоне "верхнего края столбика среды.

Дальнейшее охлаждение (до -28° или -35°С) ведут со скоростью 0,5°С/мин, затем скорость уменьшают до 0,1°С/мин; через 10 мин доводят до конечной температуры погружением в жидкий азот /-196°С/.

Одномоментное замораживание (витрификацию) впервые описал А. Массип в 1987 г. Установлено, что эмбрион, который на 20% состоит из твердых составных частей и на 80% из воды, подвержен двум негативным влияниям - образованию интрацеллюлярных кристаллов и воздействию высо­ких концентраций солей, что ведет к его гибели .Чтобы предотвратить гибель эмбрионов применяют высокую концентрацию криопротектора и быструю скорость охлаждения.

Замораживают быстрым методом в мини пайетах емкостью 0,25 мл. В пайету последовательно засасывают 0,5 М раствор сахарозы, воздух, 1,0 М раствор глицерина с эмбрионом, воздух, 0,5 М раствор сахарозы / для приго­товления 0,5 М раствора сахарозы в 1 л ФСБ - фосфатно-солевом буфере рас­творяют 171 г сухого вещества сахарозы; для приготовления 1,0 М раствора глицерина к 4 мл глицерина добавляют 36 мл ФСБ. Концы пайеты закрывают с обеих сторон пластиковыми пробками. После эквилибрации (26-30 мин) пайету, содержащую эмбрион, выдерживают 5 мин в парах жидкого азота, затем опускают в сосуд с жидким азотом.

Оттаивают пайеты в водяной бане при 37°С до исчезновения льда. Со­держимое переносят в лабораторные чашки и выдерживают в них 10 мин. При этом происходит одноступенчатое разбавление криопротектора раство­ром сахарозы. Жизнеспособные зародыши промывают 1-3 раза в растворе ФСБ с 20% -ной фетальной сывороткой теленка.

После окончания промывки эмбрионы оценивают на жизнеспособность и засасывают в стерильную пайету в такой последовательности: среда, пузы­рек воздуха, среда с эмбрионом, пузырек воздуха, среда, пластиковая пробка.

Заправленную пайету вкладывают в наконечник катетера Кассу. Гото­вый к работе прибор передают технику по пересадке эмбрионов или кладут на непродолжительное время в термостат с постоянной температурой 37° С.

Пересадка эмбрионов

До середины 70-х г. прошлого века применяли исключительно хирургический метод пересадки эмбрионов. Доступ к матке обеспечивался лапоратомией по белой линии живота или в области подвздо­ха под общим наркозом. Рог матки, прилегающий к яичникам с функциони­рующим желтым телом, подтягивали к разрезу, делали прокол стенки матки концом капиллярной трубки в нескольких сантиметрах от места соединения с яйцепроводом. При этом стремились избежать повреждения сосудов и крово­течения. Эмбрион с небольшим количеством физиологической среды вводи­ли в верхушку рога матки.

После хирургической трансплантации приживаемость эмбрионов была довольно высокая. Так, в Корнельском Университете (США) группа Л. Хас-лера за период с 1980 г. по 1986 г. осуществила хирургическим путем 7652 эмбриопересадки, приживляемость составила в среднем 71,3%.

В Японии был разработан трансвагинальный метод пересадки эмбри­онов у крупного рогатого скота: трансплантационную пипетку вводили в матку через прокол верхнего свода влагалища.

М.И. Прокофьев, В.Я.Черных (1986) предложили способ и прибор для пересадки эмбрионов через прокол тканей стенки таза. Прокол рога и введе­ние эмбриона контролируется рукой, находящейся в прямой кишке.

Описанные хирургические методы требуют высокого профессионально­го мастерства и опыта.

Нехирургический метод пересадки состоит в переносе эмбриона в рог матки по принципу искусственного осеменения - трансцервикальным путем. При этом эмбрион, помещают в пайету, которую заряжают в катетер Кассу (диаметр 3 или 4 мм) или сходный с ним по конструкции западногерманский катетер (минитуб). Иногда поверх катетера надевают защитный полиэтиле­новые чехол, который прорывают при входе инструмента в шейку матки.

Перед эмбриопересадкой реципиента фиксируют в станке, хвост бин­туют и подвязывают к шее, вульву и промежность моют теплой водой с мы­лом, дезинфицируют септонексом. Животному делают низкую сакральную эпидуральную анестезию. Для блокирования рецепторов матки и предотв­ращения реакции отторжения эмбриона сильно возбудимым животным вво­дят внутримышечно 10 мл ханегифа или другой маточный релаксант.

Пересадку эмбрионов производят следующим образом. Подготовленный катетер Кассу вводят во влагалище, затем под контролем руки, находящейся в прямой кишке, продвигают через цервикальный канал до середины рога на стороне яичника с желтым телом. Убедившись в правильности расположения прибора, медленно выталкивают содержимое пайеты в просвет рога матки.

Реципиентам после пересадки эмбрионов обеспечивают полноценное кормление ежедневно предоставляют активный моцион. Через 2-3 месяца по­сле пересадки проводят ректальное исследование на стельность.

Безрезультатная пересадка не нарушает плодовитости коров или телок. Если эмбрион не приживляется, то реципиента искусственно осеменяют и в короткий срок он становится стельным. Американские специалисты наблю­дали за 910 телками после пересадки эмбрионов. Стельными оказались 55% из них, 26% не стельных телок после пересадки вновь пришли в охоту и были осеменены в первые 24 дня после пересадки, 12 % в последующие 24 дня и 6% - в срок свыше 48 дней.

НОВЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В БИОТЕХНИКЕ РАЗМНОЖЕНИЯ ЖИ­ВОТНЫХ

Трансплантация эмбрионов создает благоприятные условия для иссле­дований в области биотехники размножения животных: получение яйцекле­ток после гибели животных, оплодотворение яйцеклеток вне организма, це­ленаправленное получение двоен, регулирование пола, получение трансген­ных животных, создание химер, клонирование животных.

Культивирование овариальных ооцитов вне организма

Известно, что после разрыва фолликула в яйцепровод поступает не зрелое яйцо, а ооцит II порядка. Заключительная фаза овогенеза имеет место уже в процессе дви­жения ооцита по яйцеводу и в процессе оплодотворения. В значительной ме­ре этот процесс инициирует проникающий в цитоплазму клетки спермий. За­ключительная фаза овогенеза состоит в том, что ооцит II порядка претерпе­вает второе мейотическое деление, с образованием временного яйца и поляр­ного тела.

Незрелые ооциты выделяют из яичников коров, преждевременно вы­бывших из эксплуатации, но очень ценных в племенном отношении. Яични­ки доставляют в лабораторию в термосе с физраствором (температура 30-35°С) не позже 1,5 ч после убоя коровы или телки. Ооциты извлекают из по­лостных фолликулов, имеющих диаметр 2-5 мм, путем вымывания средой Дюльбекко с добавлением гепарина и антибиотиков). Вылавливают пасте­ровской пипеткой под микроскопом МСБ - 9 и проводят морфологическую оценку визуальным путем.

Извлеченные из фолликулов ооциты инкубируют в висячей капле, под слоем вазелинового масла при температуре 38,5°С, срок инкубации - 24 ч. Используют культуральную среду ТС-199 с добавлением 10% -ной феталь-ной сыворотки теленка и гентамицина. Для ускоренного созревания ооцита в среду добавляют гормоны: фоллитропин + лютропин и эстрадиол.

Культивирование овариальных ооцитов вне организма в перспективе может стать важным дополнительным источников эмбрионов.

Оплодотворение вне организма

Удивительное явление природы - со­единение мужской и женской половых клеток и образование новой клетки -зиготы ( в переводе с греческого -«упряжка из двух быков»), способной расти и развиваться происходит в организме матери. Английским ученым Патрику Стептоу и Роберту Эвардсу после тринадцати лет работы удалось из яйца и спермы произвести плод в колбе и пересадить его в готовом виде в матку. В 1978 г. родилась Луиза Браун - первый на земле ребенок, зачатый вне орга­низма («ребенок из пробирки»).