Методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота

кова, А.Р. Орлова, Л.К. Эрнст (1999), С.П. Павленко (2000) отмечают связь между определенными аллелями гена BoLA DRB 3 главного комплекса гистосовместимости и восприимчивостью к лейкозу.

Анализ генотипов, определяющих различную чувствительность к лейкозу в группах больных и здоровых коров (n = 372), показал, что животные, несущие хотя бы один аллель, обуславливающий устойчивость к заболеванию, попадают в группу здоровых, что подтверждает сведения о доминантном типе наследования устойчивости к лейкозу (Л. К. Эрнст и др., 1997).

Предполагается, что вирусоносители, несущие DRB 3 аллели, ассоциированные с устойчивостью к персистентному лимфоцитозу, имеют лимфоциты с антигенами ТН 1 - типа, эффективно связывающие вирусные антигены, успешно представляющие их Т - лимфоцитам и способствующие их уничтожению. Напротив, животные, имеющие аллели, связанные с чувствительностью не способны обеспечить эффективный иммунный ответ (антигены ТН 2 - типа), что приводит к развитию персистентного лимфоцитоза. В работе R. Meirom, J Brenner, Z.Trainin. (1993) показано, что количество лимфоцитов с несвязанными рецепторами значительно выше у гематологически больных животных, чем у животных без проявлений персистентного лимфоцитоза.

В работе M. L. Mirsky, H. A. Lewin (1998) приведены экспериментальные данные, показывающие подавление пролиферации вирус - содержащих клеток в крови коров, несущих в генотипе аллели, обуславливающие устойчивость к лейкозу.

Однако некоторыми авторами ставится под сомнение абсолютный характер связи между генотипом по локусу BoLA DRB 3 и устойчивостью к персистентному лимфоцитозу. Так M. Zanotti at al. (1996) сообщает о случае обнаружения клинических проявлений лейкоза у животного, несущего аллель BoLA DRB 3*28. Теоретически подобные факты могут быть связаны как с возможностью подавления влияния гена BoLA DRB 3 при определенном сочетании у некоторых животных других генов, отвечающих за иммунный ответ, так и со сложностями дифференцировки генотипа, так и с возможными ошибками в диагностике персистентного лимфоцитоза. Учитывая наличие спорных вопросов, следует в настоящее время говорить все же об относительной, а не об абсолютной зависимости от генотипа устойчивости к заболеванию лейкозом.

Частота встречаемости различных вариантов по локусу BoLA DRB 3 значительно варьирует в зависимости от породы, типа, популяции крупного рогатого скота. Так S. Sharif et al. (2002) сообщают о преобладании у голштинов аллели DRB 31201 (BoLA DRB 38); S. Takeshima, Y. Nakai, M. Ohta and Y. Aida (2002) - о высокой частоте встречаемости (до 49%) аллелей DRB31201, 0301, and 0801 в популяциях японского скота; в популяции бразильского скота наиболее часто встречались аллели DRB 33601, DRB 32201, DRB 32101, соответственно в 18, 14 и 11 % случаев (A. F. Mota . et al., 2002). В группе коров из Индии в 71% случаев встречались BoLA-DRB3.2 *34, *15, *06, *20, 37 и20 аллели (I.D. Behl et.al., 2007).

Интересен тот факт, что распределение аллелей (чувствительных, устойчивых, нейтральных) в популяциях крупного рогатого скота далеко от расчетного. Так, в большинстве стад голштинского скота отмечается повышенная частота встречаемости чувствительных аллелей. В связи с этим, интересен вопрос о взаимосвязи присутствия чувствительных аллелей в генотипе и повышенной продуктивности животных. Наибольшее давление искусственного отбора популяции испытывают именно в сторону повышения продуктивных качеств, поэтому резонно предположить, что существует сцепленное наследование признаков повышенная продуктивность/наличие Ч-аллелей и наоборот (пониженная продуктивность/наличие У-аллелей). В литературе встречаются подтверждающие это предположение данные. Так в работе S. Sharif, B.A. Mallard, B.N. Wilkie, J.M. Sargeant, H.M. Scott, J.C.M. Dekkers, K.E. Leslie (1999) на значительной выборке (n=835) показана достоверная взаимосвязь наличия BoLA DRB3*8 аллели и повышенного уровня молочной продуктивности. О возможности взаимосвязи присутствия той или иной аллели в геноти-

пе и молочной продуктивности сообщается так же в работе R Rupp et al. (2007). Наличие BoLA DRB311 и BoLA DRB323, по мнению авторов, ассоциировано с высокой молочной продуктивностью. Интересная взаимосвязь выявлена между наличием в генотипе *3, *9, *11 и *26 и высоким уровнем содержания белка в молоке у норвежского скота (S. Kulberg, B. Heringstad, O.A. Guttersrud, I. Olsaker, 2007).Интересно, что в этой работе прослеживается гипотеза о том, что следует рассматривать взаимосвязь присутствия не отдельно взятых аллелей и продуктивных качеств, а взаимосвязь таковых с генотипами в целом.

Установлено, что ген пролактина находится в непосредственной близости с геном BoLA DRB 3 на 23 - ей хромосоме, в большинстве случаев эти гены наследуются сцеплено (R. Fries, A. Eggen, J.E. Womack, 1993). Об участках, непосредственно маркирующих на 23 – ей хромосоме хозяйственно-ценные качества крупного рогатого скота сообщается так же в работе E. Casas, S. D. Shackelford, J. W. Keele, M. Koohmaraie, T. P. L. Smith and R. T. Stone (2003).

В литературе встречаются данные о существовании связи BoLA DRB 3 генотипа не только с устойчивостью к лейкозу, но и с устойчивостью к некоторым другим заболеваниям (например, маститу и дерматофилезу). Так A. Lunde´n, S. Sigurdardottir, I. EdforsLilja, B. Danell, J. Rendel (1990) сообщают о наличии значимых ассоциаций между BoLA DRB 3 аллелями и развитием клинического мастита у шведского скота. A.B. Dietz, N.D.

Conen (1997), S.A. Ledwidge, B.A. Mallard (2001), S. Sharif, B.A. Mallard (2000) отмечают связь присутствия в генотипе аллелей DRB 38, DRB 3 16, DRB 322, DRB 323, DRB 3*24 с возрастанием риска заболевания маститом.

Не отрицая важности экспрессии гена BoLA DRB3 в развитии иммунного ответа против ряда инфекций, следует отметить, что этот ген является лишь одним из звеньев его определяющих. По мнению H. Kabeya, K. Ohashi, M. Onuma (2001) наличие длительного латентного периода у лейкоза свидетельствует о тесном и многогранном взаимодействии вируса с иммунной системой хозяина. Поэтому актуальным представляется поиск других генов и факторов, влияющих на эффективность обезвреживания попадающих в организм патогенов (M.I. Amadori, L. Archetti, R. Verardi, C. Berneri, 1995).

Имеются данные о связи цитокининовых генов с восприимчивостью/устойчивостью к лейкозу (В. А. Белявская, Е. А. Дурыманова и др., 2003, R. Meirom, S. Moss, J. Brenner, D. Heller, and Z. Trainin, 1997). P. Lundberg and G. A. Splitter (2000) установили, что у инфицированных коров с отсутствием гематологических проявлений лейкоза, количество цитотоксических Т – лимфоцитов значительно превосходит таковое у неинфицированных и у коров с гематологией.

Отмечена связь генетического полиморфизма α-фактора некроза опухолей с частотой развития лимфомы, индуцированной BLV у овец ( S. Konnai, T.Usui, M.Ikeda, 2006).

Таким образом, устойчивость является сложным признаком, поэтому основным направлением в современной селекции и генетике КРС является поиск наилучших производителей, сочетающих высокие продуктивные показатели с устойчивостью к инфекциям.

Естественно, что помимо наследственной предрасположенности существует ряд других факторов, видимо, способствующих развитию лейкозного процесса. Э.М.Ныым и др. (1970) отмечают взаимосвязь заболеваемости животных лейкозом с особенностями местности и кислотностью почв.

По мнению Б.Г.Панкова и П.Д.Шатько (1977) на заболеваемость лейкозом определѐнное влияние оказывает дисбаланс в кормовом рационе, дефицит отдельных питательных и биологически активных веществ, а также нарушение обмена веществ у животных.

С.М.Фѐдорова и др.(1985), Т.П.Сторожилова, С.М.Федорова (1986) высказали мнение, что заболевание лейкозом вызывают у животных канцерогенные нитраты кормов в самой низкой концентрации (до 0,14%).

3. Методы диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота

Для диагностики лейкоза применяют клинический, патологоанатомический, гистологический, гематологический, серологический и молекулярно – биологический методы.

Всѐ разнообразие клинических признаков лейкоза можно подразделить на специфические и неспецифические. Большинство исследователей указывают на первичное появление неспецифических признаков, а затем появляются специфические, по которым можно поставить диагноз (Н. В. Румянцева, Т.М. Шатерникова, 1963, Г.А. Симонян, 1963; Э.М. Ным и др., 1970). По мере развития заболевания у отдельных животных развивается понижение реактивности, вялость. Сравнительно рано у больных лейкозом животных регистрируют нарушение сердечно – сосудистой деятельности (глухие тоны сердца, иногда их раздвоенность), пульс слабого наполнения, возможна аритмия. К числу неспецифических признаков лейкоза относятся нерегулярная жвачка, поносы, запоры. Специфические клинические признаки характеризуются прогрессирующим увеличением поверхностных (околоушных, подчелюстных, предлопаточных, коленной складки, надвыменных),а также внутренних лимфатических узлов, экзофтальмии (В. М. Лемеш и др., 1987). Гематологический метод позволят диагностировать лейкоз на более ранних стадиях развития заболевания. Сущность его заключается в обнаружении в периферической крови повышенного числа лейкоцитов (в основном лимфоидного ряда), слабо дифференцированных клеток, а также полиморфных, атипичных клеток кроветворных органов (Б.Г. Панков, 1980; М. И. Гулюкин и др., 1996).

Для оценки результатов исследований в различных странах предложено несколько вариантов «лейкозных ключей». Все лимфоидные диагностические «ключи» основаны на количественных показателях. В СССР в результате многочисленных исследований в 1977 г. был разработан модифицированный «лейкозный ключ» (Т.П. Кудрявцева, 1980; Л.Г. Бурба, 1988), который приведен в таблице 1.

Таблица 1

Модифицированный лейкозный ключ

Данный «лейкозный ключ» был включен в стандарт СЭВ «Методы лабораторной диагностики лейкозов крупного рогатого скота», используемый при импорте и экспорте животных, а также в государственный стандарт СССР «Крупный рогатый скот, методы лабораторной диагностики лейкозов» (ГОСТ 25382 – 82). Этот ГОСТ используется и в настоящее время.

Достаточно чувствительным является метод биопробы. Инфицированных животных можно выявлять путем постановки биопробы на овцах. С этой целью овцам обычно