Методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота

количество лимфоцитов, исчезать и появляться вирусная РНК, количественно меняться уровень провирусной ДНК. Соответственно, в определѐнные периоды развития заболевания тот или иной метод, будь это РИД, ПЦР или гематология, будет давать ложные результаты. Сопутствующие заболевания, стельность могут так же оказывать влияние на результаты исследований.

Исходя из сказанного выше, в том случае если в стаде высок процент инфицированных животных, отсечь их необходимо на самых ранних стадиях жизни животных. Если же заниматься диагностикой у взрослых животных, необходимо комбинировать различные методы, подбирать оптимальный период взятия анализов, то есть работать индивидуально с каждым животным, а это в условиях современного производства достаточно сложно.

Учитывая то, что ПЦР обеспечивает выявление непосредственно провируса, то есть результат анализа не зависит ни от возраста, ни от состояния животного, этот метод можно использовать для разделения телят на инфицированных и здоровых в возрасте до 5 месяцев, то есть тогда, когда использовать РИД нет смысла.

Установлено, что процент инфицированных телят к возрасту 3-4 месяца (по данным ПЦР – исследований) практически соответствует проценту РИД - позитивных животных того же хозяйства, но в более позднем возрасте. Это, позволило предположить, что заражение животных происходит в возрасте до трех месяцев.

С целью установления момента инфицирования и возможного способа инфицирования был проведѐн следующий эксперимент. В хозяйствах ЗАО «Племзавод им. Чапаева» и АПФ «Нива» выделили по одной группе глубокостельных коров по 27 голов в каждой. За редким исключением все они положительно реагировали в РИД. В момент отѐла брались пробы крови у матери и телѐнка и исследовались с использованием ПЦР. Процедуру повторяли каждые полтора месяца до достижения телятами возраста 6 месяцев (табл.2).

Таблица 2

Динамика выявления инфицированных провирусом ЛКРС телят в

зависимости от возраста

Последнее ПЦР исследование совмещали с плановым серологическим исследованием. Телята до двух месяцев содержались в индивидуальных домиках, при всех зооветеринарных манипуляциях применялся только одноразовый инструмент. По результатам первого исследования (при рождении) среди телят не было выявлено ни одного носителя провирусной ДНК. Вирусоносители в каждой из групп появилоись по результатам второго исследования (в 1,5 мес.). Нами были проанализированы пробы молозива, полученного от явных носителей ВЛКРС (что было подтверждено результатами РИД и ПЦР анализов). Несмотря на присутствие в крови коров (n=10) провирусной ДНК, в пробах молозива (n=10) еѐ обнаружено не было. Однако это не является основанием считать молозиво безопасным в плане передачи вируса от инфицированных животных к здоровым. Вполне вероятно, что в молозиве вирус содержится в РНК – форме или в количестве не доступном для эффективного обнаружения провируса методом ПЦР.

Наиболее вероятным считаем путь инфицирования при прохождении родовых путей. Инфицированные телята были оставлены в группе. ПЦР анализы, проведѐнные в 3 и 4,5 месяца жизни животных подтвердили полученный ранее результат. Новых инфицированных животных выявлено не было. РИД-исследования в 6 месяцев дали

положительный результат именно у ПЦР-положительных телят.

Таким образом, метод ПЦР позволил выявить инфицированных животных в возрасте 1,5 месяцев. Это даѐт возможность сделать важный вывод: животных можно разделять на здоровых и вирусоносителей с использованием ПЦР до 2-х месячного возраста. При содержании телят в индивидуальных домиках, анализ необходимо провести до объединения их в группы, это значительно снизит риск распространения инфекции.

Проводимые мероприятия можно представить в следующей последовательности (табл.3):

Важной областью применения ПЦР является исследование импортированного скота, с целью предотвращения завоза ВЛКРС.

Так, среди импортных животных (ОАО «Племзавод «Кубань», n=354, завезены из Венгрии) методом РИД не были выявлены положительно реагирующие, а с помощью ПЦР удалось обнаружить одного носителя провирусной ДНК ЛКРС. Более того, провирусную ДНК выявили и в пробе крови теленка, полученного от ПЦР - позитивного животного. Носители провируса были удалены из стада.

Эффективно применение метода ПЦР на последних этапах оздоровления. Использование ПЦР совместно с другими методами снижает риск пропуска скрытого вирусоносителя, а, следовательно, избавляет от необходимости возвращаться к проблеме через некоторое время.

Таблица 3

Схема реализации оздоровительных мероприятий с использованием ПЦР – диагностики у телят

На примере одного из хозяйств края (ОАО «ПЗ «Дружба») продемонстрируем возможность использования ДНК диагностики для эффективного оздоровления стада от лейкоза КРС. Проведѐнные мероприятия включали два этапа:

1. Путѐм соответствующего подбора быков - производителей создание структуры стада с генетически обусловленной устойчивостью к развитию лейкоза

2. ПЦР – диагностика вирусоносительства у телят раннего возраста. На первом этапе, для подбора быков – производителей, нами были генотипированы по локусу BoLA DRB3 образцы крови от репрезентативной группы коров и тѐлок айрширской породы ОАО Племзавод «Дружба» (n=50). Основной принцип отбора этих животных заключался в том, чтобы в группу были включены пропорционально дочери разных быков. При этом анализировалась таблица № 14 «СЕЛЭКС», и если в стаде присутствова-

ло, например, 200 дочерей быка № 1, 400 дочерей – быка № 2 и 100 - № 3, то в группу для анализа (n=50) были отобраны – 14 дочерей быка № 1, 29 - № 2 и 7 - № 3. Необходимо отметить, что для анализа отбирались молодые животные: тѐлки предслучного и случного возраста (10-18 месяцев), нетели (3-6 месячной стельности), первотѐлки (животные с первой незаконченной лактацией).

В результате генотипирования было установлено, что:

1) в настоящее время генетический профиль животных ОАО Племзавод «Дружба» насыщен аллелями BoLA-DRB 37; BoLA-DRB 324; BoLA-DRB 3*27 (табл. 4);

2) низкая частота встречаемости устойчивых аллелей (в сумме BoLA-DRB3 *11, 23, 28 аллелей всего 7%) свидетельствует о генетической предрасположенности основной массы животных к лейкозу.

Следует отметить, что анализ частот встречаемости аллелей у всех использованных ранее в хозяйстве (за последние 8 лет) быков-производителей (n=24), дочери которых к моменту исследования присутствовали в стаде, показал сходные результаты (табл. 4).

Таблица 4

Результаты анализа генетического профиля стада ОАО Племзавод «Дружба»

Примечание: *значения частот округлены до целых; + У – устойчивый: Ч- чувствительный: Н – нейтральный

Очевидны аналогичные тенденции преобладания определѐнных разновидностей аллелей: BoLA-DRB 37; BoLA-DRB 324; BoLA-DRB 3*27 (профиль рассчитывался с поправкой на количество дочерей каждого из быков).

Для повышения гетерогенности животных (а, следовательно, привнесения генетических задатков гетерозиса) мы использовали быков-производителей, носителей редко встречающихся в данном стаде аллелей. Учитывая результаты анализа крови и генеалогической структуры стада, для осеменения коров мы рекомендовали следующих быковпроизводителей (табл. 5,6).

Таблица 5