Методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота

заболевания у взрослых животных характеризуется на начальной стадии появлением специфических антител к вирусу ВЛКРС (В.М. Нахмансон, М.И Гулюкин, Е.А. Дун, 1997). На этой стадии сохраняется удовлетворительная упитанность, а так же уровень молочной продуктивности. Такие животные приносят внешне здоровых телят (Т. П. Кудрявцева, 1980). У 30% животных, имеющих высокий титр антител к ВЛКРС, болезнь переходит в следующую стадию – персистентный лимфоцитоз (Ю. П. Смирнов, 1999).

При этом значительно (на 22–30%) снижается молочная продуктивность коров (А.П. Кузнецов, И.Н. Никитин, 1993, А.И. Кузин, Е.Н. Закрепина, 1997, Y. Da, R.D. Shanks, J.A. Stewart, H.A. Lewin, 1993), нарушаются физиологические процессы в клетках (C. Debacq, B. Asquith, M. Reichert, A. Burny, , R. Kettmann, L. Willems, 2003). По действующему законодательству (Приказ № 359 Минсельхозпрода РФ от 11 мая 1999 года) животные с такой стадией болезни изолируются и сдаются на убой. Американскими исследователями установлено, что ежегодные экономические потери, связанные с лейкозом крупного рогатого скота сельскому хозяйству США обходятся в 91 миллион долларов ежегодно (Yang D., 1993). У 3 – 5% вирусоносителей болезнь переходит в опухолевую стадию, которая характеризуется появлением злокачественных образований в органах кроветворной системы и за ее пределами, и заканчивается смертью животного (V. J. Stear, C. K. Dimmock, 1988, Н.С. Мандыгра, 1995; Е.А. Маринин, А.П. Кузнецов, 1997).

Развитие лейкоза у крупного рогатого скота, как правило, сопровождается гипоальбуминемией и диффузной гипергаммаглобулинемией. Снижается содержание в сыворотке крови альбуминов до 1,72% (норма около 4%), что связано со сложным комплексом изменений их метаболизма, с патологическим нарушением паренхимы печени, проницаемости и целостности стенок кровеносных и лимфатических сосудов в различных частях тела, специфическим влиянием злокачественного процесса, а в ряде случаев и с нарушением обменной функции желудочно-кишечного тракта (А.А. Кудряшов, Н.И Петров, 1999).

У больного лейкозом крупного рогатого скота, в связи с гликоальбуминемией, вызывающей комплекс недостаточности важных функций, выполняемых альбуминами как переносчиков метаболитов, гормонов (жирных кислот, билирубина, кальция, тироксина, гидрокортизона, эстрогенов и т.д.) и белков, усугубляется дискоординация физиологобиохимических процессов в организме, обусловливая комплекс вторичных расстройств у животных. В некоторых случаях повышается уровень альфа-глобулинов, в основном гликопротеидов, принимающих активное участие в ответной реакции организма.

При развитии лейкозного процесса происходит нарушение иммунных реакций (С.И. Джунина, 1994, А.Н. Деринов, Н.П. Овдиенко, А.Х. Найманов, 2006).

Выявлено нарушение метаболизма аминокислот, проявляющееся в изменении состава свободных аминокислот сыворотки крови, органов, а также плазмы и лейкоцитов. На глубокие расстройства нормального обмена аминокислот при лейкозе указывают результаты исследований, выявившие характерные изменения в содержании триптофана и его метаболитов. При этом указывается, что некоторые метаболиты триптофана обладают лейкозогенными свойствами.

Молоко и мясо животных с гематологической и опухолевой стадиями заболевания, как показали проведенные исследования, обладает токсичностью по отношению к культуре клеток перевиваемой почки поросенка, причем эффект токсичности возрастает по мере развития лейкозного процесса (В. Н Смирнова, 2000). Установлено, что продукты, полученные от больных лейкозом животных, содержат вредные метаболиты триптофана и других циклических аминокислот и, следовательно, являются экологически опасными для человека (П.Н. Смирнов, 1998). Потенциальную опасность для здоровья человека представляет наличие вируса или его фрагментов в продуктах питания.). Есть данные о способности некоторых онкогенных вирусов преодолевать межвидовые барьеры (K. Klintevall , 1991; М.И. Гулюкин, Е.А. Дун, Н.В. Баркова, Н.И. Петров, С.М. Пау, 2000).

При производстве молочных продуктов используются различные режимы пастеризации. При производстве сметаны, масла, кисломолочных напитков, йогуртов чаще всего применяют пастеризацию при 85-87 °С с выдержкой 5-7мин или 90-95 °С с выдержкой 2- 3мин. Однако при производстве сыров такие температурные режимы пастеризации не приемлемы, так как ухудшают способность молока к сычужному свертыванию. В сыроделии используется режим - 72 °С с выдержкой 15с., что может быть недостаточно для инактивации ВЛКРС (Свириденко Г.М., 2003).

Существует мнение о том, что возможна активация «молчащих» вирусов, встроенных в геном человека и утративших участки генов gag, pol, env при поступлении этих участков с другим не дефектным вирусом (В.Н. Сюрин., Р.В. Белоусова, Н.В. Фолина, 1991, Б.С. Сенченко, А.Н. Трошин, Я.М. Кавунник, 1998).

Опасность присутствия ВЛКРС в продуктах питания подтверждается данными Y. Aida, M. Miyasaka, K. Okada (1989), показавшими, что при экспериментальном заражении овец развитие лимфосаркомы происходит чаще и быстрее, чем при аналогичном заражении крупного рогатого скота. Аналогичные данные приведены в работе F. Dequiedt, G. Cantor, Т. Valerie (1999).

Однако на протяжении многих лет сотрудники различных научных учреждений проводили обширные эпидемиологические и эпизоотические исследования, в результате которых взаимосвязи заболеваемости лейкозом животных и естественным инфицированием человека установлено не было, несмотря на то, что по структурному строению и функциональным особенностям ВЛКРС схож с вирусом Т-клеточного лейкоза человека. Длительные наблюдения за людьми, обслуживающими скот в неблагополучных по лейкозу хозяйствах, а также занятых на убое и переработке больного или инфицированного скота, повышенного риска заболеваемости не выявили (В. Мадисон, Л. Мадисон, 2006). В ряде работ иностранных авторов также получены отрицательные результаты при обследовании людей, работающих с больными животными и вирусным материалом. Так, в одном эксперименте при обследовании 400 больных лейкозами и опухолями были получены отрицательные результаты с антигеном вируса лейкоза КРС (Н.И. Петров, 2001). В исследованиях J. Lee, Y. Kim, Kang C.S. (2005) пробы крови от 517 больных различными онкологическими заболеваниями методом ПЦР были проанализированы на наличие ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота. Ни в одном случае положительный результат не получен.

В большинстве стра - членов Евросоюза приняты и выполняются на национальном уровне программы по искоренению наиболее распространенных инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных: инфекционного ринотрахеита, диареи, лейкоза КРС. Так, например, в Швеции программа по искоренению лейкоза была начата в 1990 году. На тот момент ситуация с распространением лейкоза в Швеции была наихудшей среди стран Западной Европы: 10% всех коров, возраст которых составлял более 2 лет были инфицированы ВЛКРС. В результате 10 – летнего выполнения программы по искоренению лейкоза Швеция имеет возможность объявить себя свободной от лейкоза (А. П. Лиманский, О. Ю. Лиманская, 2001).

Во Франции в 1988 г. была разработана и реализована новая программа ликвидации лейкоза. В течение года по результатам массового серологического исследования на лейкоз (85% скота в 79% стад страны) было выявлено и забито 110 тыс. животных. Общая стоимость программы составила 177,7 млн. франков (более 30 млн. долларов).

В последние 5 лет в Соединенных Штатах Америки была принята Национальная программа борьбы с лейкозом, которая субсидируется Федеральным правительством. Поводом данному событию послужили: тенденция роста заболеваемости, требования ужесточения мер борьбы с лейкозом со стороны стран ЕЭС, отказ от импортных закупок США племенного молодняка, спермы и эмбрионов.

Цель этой программы - через систему сертификация благополучия стад по лейкозу создать фермерам максимум благоприятствования при осуществлении импортноэкспортных операций.

Говоря о стратегическом подходе к проблеме лейкоза крупного рогатого скота в США, следует отметить, что в научных центрах соответствующего профиля рассматривались три возможных принципиальных подхода к решению проблемы:

• использование активных средств специфической защиты.

• серологическая диагностика (иммунодиффузия в геле агара (РИД) и иммуноферментный анализ (ИФА)) и удаление или убой инфицированных ВЛКРС животных.

• изменение технологии ведения животноводства, предусматривающее нейтрализацию основных факторов и путей передачи ВЛКРС от инфицированных животных.

Все три варианта отрабатывались на крупном рогатом скоте, содержащемся на экспериментальных базах Луизианского, Мичиганского университетов, Национального центра болезней животных (США), а также в отдельных научных центрах других стран.

По результатам проведенных исследований были сделаны выводы о том, что использование вакцины против лейкоза крупного рогатого скота (экспериментальный вариант) в настоящее время не представляется возможным. Появившиеся в печати сообщения об удачном испытании противолейкозных вакцин, подтверждены не были (А.Д. Альштеин, 2000, W.H. Ward, C.K. Dimmock, F.W. Eaves, 1992; R.C. Daniel, M.H. Gatei, M.F,Good, D.B. Boyle, M.F. Lavin, 1993). Наиболее эффективный (рекомбинантный) тип вакцины, разрабатываемый в Японии, находится сегодня в стадии экспериментальной проверки.

Второй вариант оздоровления был основан на применении серологического метода диагностики. Этот метод (РИД) достаточно хорошо отработан в производственных условиях и нашел широкое применение, прежде всего, в странах ЕЭС.

Третий вариант предполагал своевременное выявление инфицированных животных и выполнение технологических (хозяйственных) и специальных (ветеринарных и др.), мероприятий в строго определенной последовательности, предотвращающей распространение ВЛКРС от источника инфекции к восприимчивым животным.

Следует отметить, что последний вариант сопряжен с минимальными экономическими издержками, однако предполагает более длительные (до 5 лет) сроки оздоровления ферм от лейкоза.

Добровольные программы борьбы с лейкозом крупного рогатого скота разработаны и приняты в свое время в Канаде, Японии и некоторых других странах мира (Р.Ф. Галлиев, А.А. Руденко, Ф.Р. Валиев, 2003).

Основные положения этих программ включают ежегодное 2-3-х кратное исследование животных в РИД, отдельное (но не изолированное) содержание инфицированных животных, выбраковку коров (в том числе и по причине возраста, продуктивности) и интенсивную замену маточного стада неинфицированным молодняком. Такая программа при исключении горизонтальной передачи ВЛКРС, позволила за относительно короткое время вести эффективную оздоровительную работу в этих странах, причем с минимальными экономическими издержками. Однако программа подтвердила свою эффективность только в случае не высокой инфицированности стад ВЛКРС.