РСК на фасциолез ставили по общепринятой методике. Комплемент и гемолизин использовали в рабочих титрах, эритроциты барана – 2,5 % от осадка. Испытуемые сыворотки инактивировали в течение 30 мин при температуре 60 – 62о С.
Комплемент титровали в бактериологической системе. При массовых исследованиях сывороток РСК ставили с одной дозой сыворотки – 0,04 мл в разведение 1:5. Сыворотки, показавшие положительные и сомнительные результаты в этой реакции, переставляли до предельного титра.
Данные изучения активности фасциоловых антигенов, полученных разными методами, представлены в таблице 12.
Из таблицы видно, что наиболее активным оказался антиген, полученный комбинированным методом. Этот диагностикум с позитивной фасциоловой сывороткой в разведении 1:20 реагировал на 4 креста в разведении антигена 1:20, а с негативной сывороткой в разведении 1:5 и 1:10 реакция была отрицательной во всех разведениях антигена.
Антиген, полученный методом замораживания и оттаивания, также был специфичным и реагировал отрицательно с негативной сывороткой в разведении 1:5 и 1:10 во всех испытуемых разведениях антигена. Однако он по активности уступал первому диагностикуму. Так, в разведении позитивной сыворотки 1:20 при разведении антигена 1:20 реагировал лишь на 2 креста.
Антигены, полученные эфирным, ацетоновым и ультразвуковым экстрагированием, были наименее активными в РСК и с позитивной фасциоловой сывороткой в разведении 1:20 реагировали только на 1 крест. Кроме того, эти диагностикумы показали неспецифические результаты, то есть с негативной сывороткой в разведении 1:5 реагировали на 2 креста (антикомплементарное свойство).
Антиген, полученный методом экстрагирования
диметисульфоксидом был специфичным, но по активности также уступал
антигенов в РСК
| № п/п | Метод приготов- ления антигена | Позитив- ная сыворот ка (титр) | Разведения антигена | Негатив- ная сыворот- ка (титр) | Разведения антигена | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1:10 1:20 1:30 1:40 | 1:10 1:20 1:30 1:40 | ||||||||||
| 1. 2. 3. 4. 5. 6. | Комбинир ованный Повторно- го замора- живания и оттаива- ния Ацетоно- вый Эфирный Ультра- звуковой Диметиль- сульфо- ксидный | 1:5 1:10 1:20 1:40 1:5 1:10 1:20 1:40 1:5 1:10 1:20 1:40 1:5 1:10 1:20 1:40 1:5 1:10 1:20 1:40 1:5 1:10 1:20 1:40 | ++++ ++++ ++++ ++ +++ +++ ++ + +++ ++ ++ – ++ ++ + – +++ ++ ++ – +++ +++ ++ + | ++++ ++++ ++++ ++ +++ +++ ++ + +++ ++ + – ++ + + – ++ ++ + – +++ +++ ++ – | ++++ ++++ ++++ ++ ++ ++ + + ++ + – – + – – – + + – – ++ ++ + – | ++++ ++++ ++++ + – + – – – – – – – – – – + – – – – – – – | 1:5 1:10 1:5 1:10 1:5 1:10 1:5 1:10 1:5 1:10 1:5 1:10 | – – – – ++ – ++ – ++ – – – | – – – – ++ – ++ – ++ – – – | – – – – + – + – + – – – | – – – – – – – – – – – – |
диагностикуму, приготовленному комбинированным методом. В разведении позитивной фасциоловой сыворотки 1:20 реагировал лишь на 2 креста.
Таким образом, данные контроля активности и титрации антигенов показали, что наиболее активным и специфичным в РСК является фасциоловый антиген, полученный комбинированным методом. Предельным титром антигена является разведение 1:40, а рабочим титром – двукратное увеличенная концентрация в разведении 1:20. Поэтому в дальнейших своих исследованиях
мы работали только с этим диагностикумом. В последующем мы будем называть его фасциоловый антиген.
Данные испытания фасциолового антигена на специфичность отражены в таблице 13.
- Результаты испытания специфичности фасциолового антигена в РСК
| № | Сыворотка | Количество | Реагировало | в РСК |
|---|---|---|---|---|
| п/п | проб | положительно | отрицательно | |
| 1. | Фасциолезная | 25 | 25 | – |
| 2. | Негативная | 50 | – | 50 |
| 3. | Дикроцелиозная | 20 | – | 20 |
| 4. | Эхинококкозная | 22 | – | 22 |
В дальнейшем фасциоловый антиген испытывали в производственных условиях. В этих целях отобрали 4 благополучных по фасциолезу крупного рогатого скота хозяйства: агрофирма «Бирюли», «Идел», КП «Алга» и «Новая жизнь» Высокогорского района РТ. Эти хозяйства в течение последних двух лет были благополучными по фасциолезу.
При исследовании фекалий в Высокогорской ветеринарной лаборатории и ветеринарно-санитарной экспертизе печени при убое животных на Казанском мясокомбинате в указанных хозяйствах диагноз на фасциолез не был обнаружен.
