При исследовании сывороток крупного рогатого скота в ИФА с фасциоловым антигеном в отношении негативной сыворотки коэффициент специфичности был равен 1,5 и выше, что позволяет считать реакцию специфичной.
Для изучения диагностической эффективности ИФА в сравнении с РСК исследовали сыворотки крови крупного рогатого скота, спонтанно инвазированного фасциолезом с различной интенсивностью инвазии. Результаты исследований приведены в таблице 19.
Из таблицы видно, что при интенсинвазированности одной фасциолой из 6 животных все реагировали положительно на фасциолез. Титры антител у 2 животных составляли 1:400, а у 4-х – 1:800.
При исследовании сывороток крови крупного рогатого скота, инвазированных двумя фасциолами, 2 животных показали позитивный результат в титре 1:400, а 2 – в титре 1:1600.
При интенсинвазированности 3-мя фасциолами все три животных реагировали положительно: два – в титре 1:1600, а одно – 1:800. Аналогичные результаты получены при инвазированности 4 фасциолами. При этом 2 животных реагировали положительно в титре 1:1600, а одно – 1:800.
Четыре животных, спонтанно инвазированных фасциолами в
количестве
6 – 15 экземпляров также реагировали положительно, причем титры антител у них были выше и составляли у 3-х – 1:1600, а у одного – 1:3200.
Таким образом, из 22 сывороток крупного рогатого скота, спонтанно зараженного фасциолами в количестве 1 – 15 экземпляров, положительно в ИФА реагировали 20 (90,9 %), отрицательно – 2 (9,1 %). В РСК положительно реагировали 18 голов (81,8 %), сомнительно – 2 (9,1 %) и отрицательно – 2 (9,1%). Дальнейшее испытание полученного антигена в ИФА проводили с сыворотками крови крупного рогатого скота, взятого во время убоя животных на Казанском мясокомбинате. После убоя проводили
ветеринарно-санитарную экспертизу органов, а сыворотку крови исследовали серологически и их результаты сопоставляли с данными посмертной диагностики, после чего судили об активности и специфичности фасциолового антигена. Результаты этих исследований представлены в таблице 20.
Из таблицы видно, что как молодняк до 2-х лет (50 голов), а так же нетели и коровы (80 гол.) свободные от гельминтов, показали отрицательные результаты при серологическом исследовании. Из инвазированных фасциолами 58 животных (острая форма) в ИФА положительно реагировали 56 (96,6 %), в РСК – 53 (91,4 %). При исследовании 144 голов крупного рогатого скота, инвазированного половозрелыми фасциолами, в ИФА положительно реагировали 137, что составляет 95,1 % от числа инвазированного крупного рогатого скота. В РСК реакция была положительная у 130 (90,2 %) животных.
Таким образом, диагностическая эффективность ИФА при остром течении фасциолеза равна 96,6 %, при хроническом – 95,1 %, а показатели РСК составляют соответственно 91,4 % и 90,2 %.
При изучении специфичности нами были исследованы серологически 45 инвазированных дикроцелиозом животных. При этом положительные результаты были отмечены у 1 (2,2 %), а в РСК у 2 (4,4 %) животных.
При исследовании 33 голов крупного рогатого скота, инвазированного ларвальным эхинококкозом, в ИФА позитивные показания отметили у двух (6,1%), в РСК у трех животных (9,1 %).
Таким образом, у крупного рогатого скота, инвазированного дикроцелиозом и ларвальным эхинококкозом, при исследовании сывороток их крови в ИФА, а также в РСК с фасциоловым антигеном могут быть перекрестные реакции.
Глава 8. Аллергическая диагностика фасциолеза крупного рогатого скота
При изучении сравнительной эффективности аллергической пробы, РСК и копрологического метода исследований при фасциолезе крупного рогатого скота использовали аллерген, изготовленный по методу В.Г. Эврановой (1956).
Содержание белка в аллергенах определяли спектрофотометрическим методом на СФ-4А при длине волн 280 нм.
Стерильность аллергенов устанавливали высевами на мясопептонный агар и мясопептонный бульон с выдержкой в термостате в течение 10 дней.
Токсичность аллергена проверяли на 20 белых мышах путем подкожного введения по 0,5 мл. Мыши находились под наблюдением 10 суток.
Специфичность аллергенов изучали на 10 интактных кроликах, 20 телятах 4 – 6 месячного возраста, а активность – на 200 коровах и 40 нетелях в неблагополучном по фасциолезу хозяйстве.
Препараты вводили кроликам в область брюшка (0,1 мл), а крупному рогатому скоту в среднюю треть шеи (0,2 мл), предварительно подготовив место инъекции.
Реакцию учитывали через 1,5 – 2 и 24 часа и оценивали по следующей шкале: утолщение кожной складки на 5 мм и более – положительная реакция; утолщение кожной складки до 4 мм – отрицательная реакция.
Посевы полученных аллергенов при инкубировании в течение 10 дней в термостате оставались стерильными. Подкожным введением аллергенов белым мышам была установлена их безвредность.
При внутрикожном введении аллергена 10 здоровым кроликам и 20
телятам 4 – 6 месячного возраста реакция на месте введения препарата была отрицательной.
