среды вызывают гибель спермиев. В гипотонических средах спермии погибают от набухания, в гипертонических растворах — от обезвоживания. Спермии хорошо сохраняют свою жизнеспособность в изотонических растворах многих солей и сахаров: 0,9% растворе натрия хлорида, 2,9% растворе цитрата натрия, 1% растворе бикарбоната натрия, 6% растворе глюкозы и др.
Микроорганизмы. В сперму они попадают из половых органов самца и из внешней среды. Апатогенная микрофлора ухудшает качество спермы, патогенная — служит источником возбудителей заболеваний, передаваемых половым путем. Сперма, в 1 мл которой содержится более 5000 апатогенных микроорганизмов или контаминированная любым количеством патогенных микроорганизмов, к использованию не допускается. К патогенным микроорганизмам в сперме жеребцов отноcat Taylorella equigenitalis, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas auregenosa, Equine arteritis virus, Equine herpesvirus 1. Препараты, используемые при искусственном осеменении. По безвредности их подразделяют на абсолютно безвредные (глюкоза, цитрат натрия и др.), безвредные (лактоза и др.), относительно безвредные (натрия хлорид, бикарбонат натрияи др.), условно безвредные (трис-буфер, глицерин, антибиотики и др.) и вредные (спирт, перекись водорода и др.). В практике искусственного осеменения используют вещества, относящиеся к первым четырем группам. Абсолютно безвредные, безвредные и относительно безвредные препараты можно использовать в изотонических концентрациях; условно безвредные препараты вводят в состав сложных искусственных сред в небольших количествах для повышения устойчивости спермиев к действию различных внешних факторов (замораживание, микроорганизмы и др.).
пическиОценка сразуэякулята. же послеКачество ее получения.спермы Приисследуют макроскопическоммакрои микроско-исследовании определяют ее объем (до и после фильтрации), цвет, запах и консистенцию, при микроскопическом — активность спермиев, их конценспермиев,нымиграцию,телами.процентное а также степеньсоотношение загрязнениянормальных спермы непатогеннымии патологических микроб-форм
В норме сперма жеребца — водянистой консистенции (консистенция обезжиренного молока), белого цвета с синеватым оттенком, без запаха. Сперму с неприятным запахом, загрязненную кровью (гемоспермия), мочой (уриноспермия), гноем (пиоспермия), выбраковывают. При по-
в
___ ФИЗИЮЛОГИЯ И БИОТЕКНИКА РАЗМНОЖЕНИЯЛОШАДЕЙ |
лучении такой спермы самца-производителя тщательно обследуют, назначают соответствующее лечение и не допускают к использованию до полного выздоровления.
Активность спермиев определяют под микроскопом при температуре 38-39 °С, используя специальный обогревательный столик. Для оценки активностимы, 2-3 каплиэякулята 0,9% растворана чистое хлоридапредметное натриястеклои накрываютнаносят покровнымкаплю сперстеклом. Раздавленную каплю исследуют под микроскопом в неярком свете при увеличении 200—300 раз. Сперму оценивают глазомерно по десятибалльной шкале, определяя количество спермиев с прямолинейнопоступательным движением. Высшую оценку — 10 баллов — получает сперма, в которой практически все спермии имеют прямолинейно-поступательное движение либо передвигаются дугообразно. При оценке 9 баллов примерно 90% спермиев двигаются прямолинейно-поступательно либо по большой дуге, при оценке 5 баллов — 50% ит. д. Сперму, не содержащую спермиев, обозначают буквой А (аспермия), мертвую сперму — буквой H (некроспермия). Активность нормальной спермы составляет 6—10 баллов.
Концентрацию спермы высчитывают при помощи счетной камеры Горяева (рис. 2.8), используемой для подсчета эритроцитов и лейкоцитов, а также при помощи фотоэлектрического колориметра или автоматического счетчика клеток. Камера Горяева — наиболее простой и достаточно надежный способ определения концентрации спермы. Она состоит из толстого предметного стекла, разделенного поперечны-
м ЕЕННЕЕННЕЕННЕЕНННЕТЕН
а No TTT
СЕЕЕ ЕЕ
—— Te aioli
(y—1) ЕЕНЕЕНЕЕН ЕН Е:
{| utЕАО| 1 5ГЕi ГЕПАТИТ
Е ПЕРРИЕЕНЕЕННЕЕЕЕЕННЕЕНЕНЫНАРА
4 et | ЕЕ
ЕBil CtПАЩЕНОЕtm ttНИР ТИНИНАГ
6 в
Рис. 2.8. Счетная камера Горяева: а — вид сбоку; 6 — вид сверху; в — сетка
ми прорезями на три площадки. Средняя площадка ниже боковых на 1/10 мм. Она разделена продольной прорезью на 2 площадки, каждая из которой имеет выгравированную сетку, состоящую из 225 больших квадратов, 25 из них разделены на 16 маленьких квадратиков. Площадь маленького квадратика составляет 1/400 мм?. Если площадку накрыть шлифованнымвит 1/400 ммз.вит 1/400 ммз. 1/400 ммз. ммз. стеклом, то объем объем камеры маленького квадратика соста-
шлифованнымвит 1/400 ммз.вит 1/400 ммз. 1/400 ммз. ммз. стеклом, то объем объем камеры маленького квадратика соста| Для подсчета спермиев пробу спермы предварительно разбавляют в 3% (гипертоническом) растворе натрия хлорида. В таком растворе натрия хлорида спермии становятся неподвижными (погибают), что об| легчает технику подсчета. Cnepmy разбавляют в 100 раз при помощи | | эритроцитарного меланжера. Для этого вначале набирают в меланжер | | сперму до отметки 1, затем — раствор натрия хлорида до деления 101. Чтобы равномерно смешать сперму с раствором, концы меланжера за| | жимают между пальцами руки (большим и указательным) и встряхива) ют в течение 2-3 мин. Из пипетки меланжера удаляют первые четыре | капли, не содержащие спермиев. Следующую каплю вносят под заранее | притертое шлифованное стекло. Заряженную камеру Горяева кладут | на столик микроскопа и исследуют под большим увеличением микро| скопа. Спермии подсчитывают в 5 больших квадратах (80 малых) по | диагонали. Считают только головки спермиев, расположенные внутри || | малых квадратиков, а также на их левых и верхних линиях. Число спер| миев, подсчитанных в 5 больших квадратах, суммируют и делят на 200. | у При делении получается цифра, выражающая концентрацию спермиев | | (млрд/мл). | ноеЦенным соотношение показателем нормальных при оценке и патологических качества спермы форм является спермиев. процент- Для определения их соотношения наносят на край обезжиренного сухого | чистого и теплого предметного стекла каплю спермы и 2-3 капли 0,9%т : | раствора натрия хлорида. Капли быстро перемешивают стеклянной па| лочкой и делают при помощи шлифованного стекла тонкий мазок. Ма; x : | зок высушивают, фиксируют несколько мипут 96% спиртом и окраши| ваютй не менеев5 мин 1-2%oy раствором эозина. Раствор краски готовят | на 2,9% растворе натрия цитрата. Краску на стекле смывают дистилли| рованнойгривают подводой микроскопоми высушивают при увеличении 400—600Ha воздухе. Подсохший раз и подсчитываютмазок просма| в нескольких полях зрения не менее 200 спермиев. Количество нормаль| ных и патологических форм спермиев по каждому полю зрения сумми1 руют и высчитывают их процентное соотношение. |
