1:1000.

Ход опыта.

1. Находящееся в термосе рубцовое содержимое профильтровать через 4 слоя марли в стаканчик, находящийся в сосуде с водой температуры 39-40 С. Нанести на часовое стеклышко несколько капель фильтрата и добавить 1 каплю раствора метиленовой сини 1:1000. Пипеткой нанести каплю окрашенного фильтрата на покровное стекло, быстро перевернуть его и наложить на предметное стекло с круглым отшлифованным углублением. Края покровного стекла окаймить вазелином. В полученном препарате «висячей капли» наблюдать за движением инфузорий сначала под малым, затем под средним увеличением микроскопа. Обратить внимание на инфузории, расщипывающие стебли корма (рис. 10).

2. Притереть к камере Горяева шлифованное покровное стекло, рассмотреть сетку под малым увеличением микроскопа и заполнить камеру фильтратом рубцового содержимого из смесителя, как это делается при подсчете форменных элементов крови. Инфузории подсчитать в 100 больших квадратах сетки, как при подсчете лейкоцитов. Количество инфузорий (х) в 1 мл содержимого вычислить по формуле

х=п * 250 * 2 * 1000 или п * 5000,

100

где п – число инфузорий в 100 больших квадратах сетки (оно составляет в среднем 90-180);

микробную экосистему преджелудков. Видовой состав микрофлоры и микрофауны меняется при смене рационов. Это необходимо учитывать при включении в рацион нового корма, т.е. замену одного корма другим надо проводить постепенно, на протяжении 3-4 дней.

П р о с т е й ш и е. Микрофауна преджелудков представлена реснитчатыми и равнореснитчатыми инфузориями (около 50 видов). Общее их количество более 10⁹ в 1 мл содержимого.

Заселение простейшими преджелудков происходит постепенно, в начале потребления грубого корма. У ягнят ресничные инфузории появляются на 8-12-й день, у телят – позднее. Есть данные, свидетельствующие о том, что у телят инфузории становятся постоянными обитателями рубца с 2-3-месячного возраста. Количество и видовой состав инфузорий в содержимом рубца зависит от условий питания животных.

В процессе жизни инфузории измельчают и разрыхляют частицы корма, ферментируют сахара, накапливают полисахариды, участвуют в азотистом обмене. В них содержится около 20% азота, тогда как в бактериях – 12%. Они синтезируют незаменимые аминокислоты. Белок простейших имеет высокую биологическую ценность.

Г р и б к и . Имеющиеся в содержимом рубца грибки (дрожжи, плесени, актиномицеты (Absidia corumbifera, Ab. Ramose, Mucor pusillus, Geotrichum candidum, Aspergillus fumigates)) обладают целлюлозолитической активностью, сбраживают сахара, синтезируют гликоген, аминокислоты, витамины группы В.

Переваривание углеводов

В рубце клетчатка под влиянием целлюлозолитических бактерий, которые выделяют ферменты целлюлазу и целлобиазу расщепляется до моносахаридов (рис. 2). Крахмал занимает второе место после клетчатки в углеводном питании жвачных животных. Скорость переваривания крахмала зависит от его происхождения и физико-химических свойств. Усваивая сахар, бактерии выделяют продукты его превращения - летучие жирные кислоты (ЛЖК): уксусную (45-76%), пропионовую (12-29%), масляную (6-19%), валериановую (0,6-3,3%), муравьиную (0-5,0%). За сутки в среднем образуется до 4-х литров ЛЖК. Корма растительного происхождения, с большим содержанием клетчатки (сено), активируют образование уксусной и пропионовой кислот, а концентрированные - уксусной и масляной. Всосавшиеся кислоты используются организмом для энергетических и пластических целей. Уксусная кислота является предшественником молочного жира, пропионовая - участвует в углеводном обмене и идет на синтез глюкозы, масляная - используется как энергетический материал и для синтеза тканевого жира. При сбалансированном рационе концентрация ЛЖК в рубце крупного рогатого скота колеблется от 6 до 14 мг/100 мл и у овец от 5 до 15 мг/100мл.

позвонка с левой стороны трахеи, можно легко прощупать длинный, твердый и прилегающий к трахее предмет – это пищевод с введенным в него зондом;

при правильном прохождении зонда в свободном конце его прослушиваются звуки, характерные для желудка, - урчанье, бульканье, переливание; при попадании в трахею слышно движение мощной воздушной струи, совпадающей с фазой вдоха. Эти звуки усиливаются, если у животного закрыть свободную ноздрю;

вставленная в зонд сжатая большая спринцовка не расправляется, а при нахождении зонда в трахее в момент выдоха быстро наполняется воздухом; следует иметь в виду, что это же наблюдается, если зонд уже попал в желудок, наполненный газами;

при погружении свободного конца зонда в сосуд с водой, если зонд в трахее, то во время выдоха хорошо заметны пузырьки воздуха и это усиливается при закрытии животному свободной ноздри;

зонд, попав в трахею. Как правило, вызывает кашель и беспокойство животного. Убедившись в том, что зонд находится не в трахеи, продвигают его в желудок, ориентируясь по метке. Иногда зонд встречает значительное сопротивление со стороны кардиального сфинктера. В таких случаях необходимо дождаться акта глотания и только тогда передвигать дальше.

Для извлечения содержимого преджелудков необходимо с помощью шприца Жане залить в рубец через зонд 2-3 л теплого изотонического раствора, а затем, наклонив голову животного вниз оттянуть поршень шприца.

В шприц насасывается жидкое содержимое рубца, его выливают в мерную колбу и исследуют.

Техника взятия рубцового содержимого у овец и коз аналогична таковой у крупного рогатого скота, при этом используют зевники и зонды меньших размеров.

Опыт 6. Подсчет количества инфузорий в рубцовом содержимом

Цель опыта : ознакомиться в препарате «висячей капли» с разновидностями рубцовых инфузорий, их размерами и характером движения. Произвести подсчет количества инфузорий в 1 мл рубцовой жидкости.

Подготовка опыта . У животного с фистулой рубца или интактного животного до кормления получают рубцовое содержимое. Часть полученного содержимого отфильтровывают через 4 слоя марли и фиксируют 10 %-ным раствором формальдегида (1:1), часть переливают в термос и доставляют в лабораторию.

Для работы готовят смеситель, камеру Горяева, микроскоп, предметные, покровные и часовые стекла, пипетки; мителеновую синь

Опыт 5. Получение содержимого рубца у жвачных методом зондирования

Переваривание белка

Цель: изучить методику взятия содержимого преджелудков жвачных с помощью зондов.

Материалы и оборудование : корова или овца, зонд Марека с металлической оливой или медицинский зонд, деревянный или Х- образный зевник, 70% этиловый спирт, вазелин, шприц Жане, изотонический раствор.

Ход работы: для получения содержимого рубца у КРС используют зонд Марека с деревянным зевником, который представляет собой резиновую трубку с пластмассовым стержнем внутри, для овец можно использовать медицинский зонд с Х-образным зевником (Рис. 9).

Перед зондированием животное фиксируют в стоячем положении. Зонды перед введением необходимо обработать антисептическим раствором или прокипятить. При постановке желудочного зонда Марека крупному рогатому скоту используют деревянный зевник с отверстием, для овец используют Х-образный зевник. Конец зонда смазывают вазелином и продвигают через отверстие зевника до глотки. Затем, с глотательными движениями его передвигают до рубца. После этого извлекают внутренний стержень и присоединяют шприц Жане.

Растительные протеины, поступившие в рубец расщепляются ферментами протеолитических микроорганизмов до пептидов, аминокислот и аммиака (рис. 3). В рубце происходит всасывание аммиака в кровь и он поступает в печень, где превращается в мочевину, которая частично выделяется с мочой, а частично со слюной. Значительная часть аммиака путем диффузии из крови через стенку рубца вновь возвращается в его полость и продолжает участвовать в азотистом обмене. Одновременно с процессами расщепления растительного белка в рубце происходит и синтез бактериального белка. Для этой цели можно использовать и небелковый азот. В основе усвоения азота небелковых соединений (мочевины) лежит микробиологический процесс. Выявлено, что в рубце мочевина (карбамид) быстро гидролизуется микроорганизмами с образованием аммиака, который используется ими для дальнейших синтетических процессов. Скармливание мочевины не вызывает осложнений, если дозы ее не слишком высоки. При скармливании азотсодержащих веществ небелкового происхождения рацион должен быть сбалансирован по содержанию легкопереваримых углеводов, иначе образуется большое количество аммиака, который не может быть полностью использован микроорганизмами, это вызывает нарушения функций почек и печени.

Необходимо убедиться в том, что зонд находится в пищеводе, а не в трахее. Это определяется по следующим признакам: пальпируя область яремного желоба на уровне 4-5-го шейного

Рис. 3. Схема расщепления и ферментации белка в рубце жвачных (поступление эндогенного аммиака не учтено).