высевают в пробирки с соответствующими средами для определения сахаролитических (среды Pucca), протеолитических (MIDK, лакмусовое молоко), гемолитических (кровяной мясопептонный агар), восстанавливающих свойств (нитратная среда), а также на каталазную и оксидазную активность.
О протеолитических свойствах культур бактерий судят по их способности разжижать желатин. Для обнаружения протеолитических ферментов производят посев чистой культуры бактерий методом укола в столбик мясопептоного желатина. Посевы выдерживают при комнатной температуре (20-22°С) в течение трех суток. Разжижение бывает слоистое, в основном в верхней части пробирки, которое при длительной инкубации спускается ниже, образуя воронку.
Для установления способности микроорганизмов вырабатывать оксидазу на поверхность 18-часовой агаровой культуры бактерий наносят каплю 1%-ного раствора парааминодиметиланилина гидрохлорида и каплю 5%-ного спиртового раствора а-нафтола. При положительной реакции через 1-3 мин культура бактерий окрашивается в ярко-синий цвет. Положительная проба на оксидазу является характерным признаком для микроорганизмов семейства Moraxellaceae и роду Moraxella.
Для определения ферментации каталазы изучаемой культурой бактерий на поверхность 24-часовой культуры на скошенном МПА наливают 1-2 мл 1%-ного раствора перекиси водорода. Появление пузырьков газа при наклонном положении пробирки регистрируется как положительная реакция. Культуры бактерий рода Moraxella являются каталазаотрицательными.
При выявлении образований индола культурой бактерий предполагаемого возбудителя ИКК крупного рогатого скота используют способ Мореля. Узкие полоски фильтровальной бумаги смачивают горячим насыщенным раствором щавелевой кислоты (индикаторная бумага). При выделении индола на первый-третий день нижняя часть полоски бумаги вследствие соединения индола со щавелевой кислотой приобретает розовый цвет. Как правило, бактерии рода Moraxella не образуют индола.
В средах Гисса культуры бактерий Moraxella не оказывают ферментирующего действия на сахара. При посеве их в нитратную сре-
ду изменения также не наблюдаются, это означает, что они не редуцируют нитраты в нитриты.
Бактерии Moraxella патогенны для белых мышей: вызывают их гибель в течение 24 ч при внутрибрюшинном введении им суточной агаровой культуры в дозе 500 млн микробных клеток.
Основные критерии для идентификации выделенных культур бактерий — предполагаемых возбудителей ИКК крупного рогатого скота: они неподвижны, не образуют спор, окрашиваются грамотрицательно, факультативные аэробы, не ферментируют сахаров, не редуцируют нитраты в нитриты, не образуют индол, разжижают желатин, пептонизируют лакмусовое молоко, показывают положительную реакцию на оксидазу.
В ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» разработан «Набор препаратов для выявления антител к бактериям Moraxella bovis методом иммуноферментного анализа» (ИКК-серотест) [12], предназначенный для выявления специфических антител к бактериям Moraxella bovis в сыворотке крови методом ИФА с целью диагностики инфекционного кератоконъюнктивита у невакцинированных животных и оценки напряженности поствакцинального иммунитета. Набор реагентов рассчитан на проведение на одном планшете одновременного анализа 46 исследуемых и двух контрольных сывороток (в двух повторах каждая).
Окончательный диагноз на ИКК устанавливают по результатам бактериологических исследований клинического и патологического материалов, полученных от телят в острой стадии болезни. Диагноз считают подтвержденным, если:
— выделена чистая культура бактерий Moraxella bovis и Moraxella bovoculi с зоной В-гемолиза;
— определена родовая и видовая принадлежность их на основе результатов испытания морфологических, тинкториальных, культуральных и ферментативных свойств;
— выявлено их антигенное родство относительно референтных штаммов бактерий Moraxella bovis и Moraxella bovoculi в иммунологических реакциях с позитивными сыворотками;
— подтверждена патогенность гемолитических форм бактерий Moraxella bovis и Moraxella bovoculi в отношении белых мышей.
Инфекционный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота, вызываемый бактериями Moraxella bovis и Moraxella Боуосий, дифференцируют от таких сходных с ним болезней, как инвазионный конъюнктивокератит, вызываемый телязиями; конъюнктивит, вызываемый герпесвирусом типа 1 крупного рогатого скота; злокачественная катаральная горячка крупного рогатого скота, возбудителем которой является Herpesvirus bovis-3; конъюнктивит, вызываемый хламидиями, относимые к виду Chlamydophila pecorum; конъюнктивит, вызываемый Mycoplasma Боуосий; конъюнктивит, кератит и помутнение роговицы, развивающиеся при вирусной диареи крупного рогатого скота и кератоконъюнктивит, вызываемый риккетсиями.
Телязиозы — гельминтозные заболевания крупного рогатого скоTa, проявляющиеся конъюнктиво-кератитами, вызываются паразитированием нематод подотряда Spirurata, семейства Thelaziidae в протоках слезной железы, слезно-носовом канале, под третьи веком и в конъюнктивальном мешке. Телязии — это круглые нематоды белого цвета, длиной до 21 мм. Возбудители телязиоза — биогельминты, т.е. в их жизненном цикле участвуют промежуточные хозяева — зоофильные мухи и дефинитивный хозяин — крупный рогатый скот. Срок паразитирования телязий 10-12 месяцев.
Энзоотии телязиоза среди крупного рогатого скота наблюдаются в июне — августе. Животные заражаются при непосредственном контакте с промежуточными хозяевами на пастбище или водопое. Заболевание характеризуется развитием конъюнктивитов, кератоKOHBIOHKTHBHTOB и язвой роговицы. При появлении первых подобных признаков животных считают подозрительными по заболеванию телязиозом. С целью подтверждения диагноза исследуют жидкость, полученную при промывании конъюнктивального мешка. Проводят ирригацию конъюнктивального мешка глаз из спринцовки теплым (28-30°С) изотоническим раствором или 2-3%-ным раствором борной кислоты в количестве 80-100 см? на один глаз. Для лучшего промывания наконечник спринцовки в момент ирригации перемешают от внутреннего угла глаза к наружному. Раствор собирают в кюветы, разливают в пробирки или мензурки, отстаивают 10-15 мин, верхний слой сливают, а нижний центрифугируют. Полученный осадок исследуют под микроскопом. Подтверждают или ис-
