разуется осадок, который при взбалтывании разрушается на грубые частицы. При инкубации в условиях реактора бульон мутнеет через 24 ч с образованием небольшого количества осадка. В дальнейшем рост усиливается при добавлении 5%-ного объема сыворотки кролика или крупного рогатого скота.
На мясопептонном агаре бактерии Moraxella bovis формируют два типа колоний. Колонии К-типа обычно преобладают у свежевыделенных культур. Они имеют шероховатую поверхность и неровный край, отчетливую зону В-гемолиза. При переносе колонии на ее месте остается небольшое углубление, обусловленное разжижением среды. При последующих субкультивированиях после четырехпяти пассажей на искусственных питательных средах наблюдается уменьшение колоний в диаметре до 0,5-0,8 мм («карликовые колонии»). Спонтанная диссоциация происходит даже при оптимальных условиях инкубирования. vis —Бактерии это короткие Moraxella толстыеboк.t hy - =” грамотрицательные палоч{ & 2$ ки (1,0-1,5 x 1,5-2,5 мкм) с a “eg ‘ г ` округленными концами, [78 $ se - 5 4 чаще расположены параAY oe of ми или в виде коротких ats 15 цепочек (рис. 2), для них я, ae$0 ‘ характерен полиморфизм. К 4? С. Клетки свежевыделенных > >> # ьх культур бактерий могут й % Se быть окружены капсулой. _ 2% / Бактерии неподвижны, но Puc. 2. 24-часовая культура бактерии благодаря наличию по. . м Moraxella bovis, выделенная лярных фимбрий (тилий) от крупного рогатого скота, Ha IVIOTHBIX средах AA о KK. Окраска no Граму (x 320) них характерно движение
рывками (так называемая «дёргающаяся» подвижность).
Биохимическая активность у бактерий Moraxella bovis слабо выражена, что создает трудности при идентификации. Они не ферментируют сахаров, не восстанавливают нитраты, не образуют индола
из триптофана, разжижают желатин, т.е. обладают протеолитической активностью, дают положительный результат на оксидазную пробу. При 24-часовой инкубации в лакмусовом молоке образуют темно-синюю полосу в верхней части пробирки, а при дальнейшей инкубации среда прогрессивно становится более щелочной. В течение шести дней появляются три отчетливо выраженные зоны: в верхней части — темно-синяя жидкость, средняя зона — лилового цвета, творожистая по консистенции, а нижний слой — коагулированный казеин бледно-лилового цвета.
Долгое время считалось, что возбудителем ИКК бактериальной этиологии являются только Moraxella bovis. Однако не всегда применение вакцин на основе антигенов данных бактерий было эффективно. Предполагалось, что это связано с существованием других бактерий, причастных к возникновению ИКК.
Летом 2002 г. при проведении испытаний эффективности антибиотиков на быках и молочных телках в Северной Калифорнии Angelos Т.А. выделил гемолитические грамотрицательные кокки от телят трех-девятимесячного возраста с признаками изъязвления роговицы глаз [17, 18]. С целью определения связи гемолитических грамотрицательных кокков с известными представителями рода Moraxella, были проведены обширные бактериологические, биохимические тесты и молекулярно-генетические анализы. Исследование последовательности 16$ рРНК и филогенетические анализы позволили отнести их в группу, объединяющую Moraxella bovis и Moraxella ovis. Процент гомологии между выделенными грамотрицательными кокками и бактериями Moraxella bovis и Moraxella ovis был высок — 96%. Angelos J.A. с соавторами предложили отнести их новому виду — Moraxella bovoculi, номенклатура которого опубликована 5 апреля 2005 г.
Инфекционный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота, вызванный бактериями Moraxella bovoculi, наблюдали на одном из молочных комплексов Республики Татарстан. Клинические признаки болезни были схожи с таковыми при поражении бактериями Моraxella bovis. При бактериологическом исследовании смыва из конъюнктивального мешка глаза семимесячного больного теленка с признаками острого кератоконъюнктивита выделены гемолитические
изоляты бактерий, идентифицированные в дальнейшем как бактерии Moraxella Боуосий. Результаты изучения морфологических, культурально-биохимических, серологических и биологических свойств выделенного штамма позволили депонировать его во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве (Россия, 123022, Москва, Звенигородское шоссе, 5, ФГБУ «ВГНКИ») под регистрационным номером: «Штамм Moraxella bovoculi «CX-46 №-ДЕП» инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота». Предварительно была определена нуклеотидная последовательность фрагмента 16$ pPHK штамма (с 246 по 1121 п.н. по полной нуклеотидной последовательности данного гена). При помощи программы Blast был проведен сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей штамма «СХ-Ч6 № -ДЕП» Moraxella bovoculi с последовательностями микроорганизмов, представленных на базах данных нуклеотидных последовательностей GenBank. При этом была установлена наибольшая гомология анализируемых последовательностей с геном 16S pPHK Moraxella Боуосий (99,9%).
Ha штамм получен патент РФ на изобретение №2521651 от 12.05.14, он признан производственным и предназначен для изготовления вакцины против ИКК КРС и диагностикумов. Штамм характеризуется следующими свойствами:
® клетки штамма при культивировании в течение 24 ч при температуре 37°C Ha кровяном мясопептонном агаре с содержанием 6-10% дефибринированной крови барана формируют колонии белого цвета диаметром< 1 мм, круглые, выпуклые, с ровными краями, влажной поверхностью и зоной В-гемолиза (рис. 3);
® в мазках, окрашенных по Граму, представляют собой грамотрицательные диплококки, с редко встречающимися кокками, диаметр клеток 0,7-1,3 мкм, смежные стороны клеток уплощены (рис. 4).
- i
:
fu
j
|
1
I
WS : Ta
Рис. 3. Колонии бактерий
Moraxella bovoculi после 24-часовой инкубации на кровяном агаре
