Пробирки, ампулы или флаконы должны быть в теплоизолирующей обертке (ватно-марлевая слоем 1 -2 см или поролоновая) и в водонепроницаемых полиэтиленовых мешочках; - использовать сперму необходимо в течение 3 суток с момента взятия ее у быка, при этом подвижность спермиев на третьи сутки хранения должна быть не ниже 7 баллов;
- перед осеменением сперму осторожно перемешать вращением пробирки, ампулы или флакона и проверить подвижность спермиев под микроскопом при температуре нагревательного столика +38°С.
6.5. Оттаивание спермы в соломинках. Правой рукой поднимают крышку сосуда Дьюара и кладут рядом, а левой - поднимают пластмассовый стакан из канистры (со спермой нужного быка) до нижнего края горловины емкости. Правой рукой берут пинцет и концы его охлаждают в жидком азоте до прекращения кипения. Охлажденным пинцетом вынимают одну соломинку, быстро и энергично стряхивают остатки жидкого азота и немедленно переносят в воду для оттаивания. Канистру с оставшимися соломинками опускают на дно сосуда, который сразу же закрывают крышкой.
Оттаивание спермы в соломинках проводят в водяной бане при +38°С в течение 10 с. Затем соломинку вынимают, насухо протирают стерильной салфеткой. Одновременно оттаивают не более 2 доз при условии немедленного их использования (в течение 10-15 мин). Размеры водяной бани должны соответствовать размерам соломинок (высота не менее 150 мм, ширина 100-120 мм). Качество спермы определяют по общепринятой методике.
6.6. Оттаивание спермы в гранулах. Гранулы бывают трех видов: необлицованные малого объема 0,1-0,2 мл (с высокой концентрацией спермиев при разбавлении дозы перед осеменением изотоническим раствором лимоннокислого натрия); необлицованные большого объема 0,5-1,0 мл (со средней концентрацией спермиев, не требующей при оттаивании разбавления дозы раствором цитрата натрия); облицованные в полимерную оболочку объемом 0,25 мл.
Для оттаивания гранул объемом 0,1-0,2 мл необходимо иметь: стеклянные стерильные флаконы из-под пенициллина, 2,9%-ный раствор лимоннокислого натрия промышленного производства, расфасованного по 1 мл в ампулах вместимостью 3 мл; водяную
баню вместимостью не менее 1 л; мерные стеклянные пипетки на 5- 10 мл (по одной); пинцет анатомический длиной 25-30 см.
Для оттаивания гранул объемом 0,1-0,2 мл берут 1-2 ампулы или флакона с раствором лимоннокислого натрия и ставят в водяную баню (+38°С) на 2-3 мин. Быстро (за 4-5 с) подтягивают к горловине сосуда Дьюара канистру (со стаканом) или матерчатый мешочек с гранулами, извлекают стерильным и охлажденным в жидком азоте пинцетом нужное число их и опускают в подготовленные флаконы или ампулы с раствором лимоннокислого натрия.
Ампулы или флаконы с гранулами спермы оттаивают 8-10 с и сразу же вынимают из водяной бани, не допуская дальнейшего нагревания спермы, вытирают насухо полотенцем или марлевой салфеткой и ставят в штатив. У подогретой до 18-25°С спермы определяют качество. От оттаивания до введения спермы животному должно проходить не более 10-15 мин.
Оттаивание гранул объемом 0,5-1,0 мл проводят без добавления раствора лимоннокислого натрия. Флакон погружают в водяную баню, подогревают до температуры воды 38°С, выдерживают 2-3 мин, затем в него вносят 2 гранулы замороженной спермы и дают постоять до перехода их в жидкую фазу. Флакон со спермой извлекают из водяной бани, вытирают насухо наружную поверхность и оценивают качество спермы.
Сперму в облицованных гранулах объемом 0,25 мл оттаивают следующим образом. Облицованную гранулу извлекают из сосуда Дьюара пинцетом с широкими браншами, быстро помещают в водяную баню с температурой +38°С и оттаивают в течение 8-10 с. Затем насухо протирают гранулу стерильной салфеткой и проверяют ее на герметичность путем легкого сжатия между двумя пальцами. После этого сперму оценивают на подвижность.
7. ОЦЕНКА СПЕРМЫ ПО ПОДВИЖНОСТИ
Для проверки качества спермы необходимо использовать подогретые предметные и покровные стекла, находящиеся во время работы на обогреваемом столике микроскопа. Для взятия пробы на исследование вращательными движениями сперму смешивают, приоткрывают пробку флакона и берут стерильной стеклянной
палочкой или пастеровской пипеткой каплю спермы и помещают на предметное стекло. Флакон со спермой немедленно закрывают пробкой и помещают обратно в термос. Дают сперме нагреться до 38°С на обогревательном столике микроскопа. После чего при увеличении микроскопа в 100-180 раз отыскивают поле зрения с наибольшей подвижностью спермиев.
Подвижность спермиев оценивают по десятибалльной шкале. Высшую оценку (10 баллов) получает сперма, в которой практически все спермин имеют прямолинейно-поступательное движение. При оценке 9 баллов таких спермиев 90%, 8 баллов - 80, 7 баллов - 70% спермиев движутся прямолинейно-поступательно и т.д.
Замороженную сперму оценивают после оттаивания. При использовании спермы в соломинке один конец ее, закрытый специальной пробкой (стеклянный шарик и др.), отрезают стерильными ножницами и опускают во флакон с раствором 2,9%ного лимоннокислого натрия, подогретого до 38°С. Затем отрезают второй закрытый конец соломинки и оттаянную сперму выливают во флакон. Полученную смесь тщательно размешивают и с помощью соломинки берут каплю спермы для оценки на подвижность под микроскопом. Из каждой партии проверяют 1-2 соломинки.
При использовании спермы в облицованных гранулах, оболочка которых выполнена из оптически прозрачного полимерного материала, качество спермы оценивают перед осеменением животных без предварительной разгерметизации спермодозы. Для этого, предварительно протерев стерильной салфеткой, гранулу размещают на предметном стекле и прижимают ее вторым аналогичным стеклом с помощью специального зажима. Участок гранулы, расположенной между стеклами, подводят под объектив микроскопа и определяют процент спермиев с прямолинейнопоступательным движением.
В соответствии с ГОСТ 26030-83 (Изменение № 1) «Сперма быков замороженная» к использованию допускается сперма быковпроизводителей, имеющая следующие характеристики:
- подвижность спермиев, баллы (%), не ниже 4 (40);
- число спермиев с прямолинейно-поступательным движением (ППД) в дозе, млн., не менее 15;
