Регуляция воспроизведения молочного скота

Таблица 39 – Концентрация спермиев с прямолинейнопоступательным движением (ППД) в дозе в зависимости от количества акросомных нарушений

Определение наличия акросомных нарушений проводится при помощи микроскопа с темнопольным конденсором.^∗

Чтобы получить отчетливое, не расплывчатое свечение контуров спермиев и акросом, следует отцентрировать луч света винтами конденсора прямо в линзу объектива. Затем наносят на предметное стекло каплю спермы, накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом в светлом поле при опущенном конденсоре и прикрытой ирисовой диафрагме.

∗ При отсутствии данного микроскопа возможно применение микроскопа серии « Биолам» или другого с аналогичным конденсором. Для этого в откидную кольцевую диафрагму конденсора вставляется круглая пластина из прозрачного органического стекла, затемненного в центре светонепроницаемым круглым предметом диаметром 18,5 мм (наклеивается кружок копировальной бумаги).

После наведения на фокус вводят в ход лучей кольцевую диафрагму темного поля, открывают ирисовую диафрагму и, наблюдая в окуляр, медленно вращают винт кремальеры держателя конденсора, поднимая его до момента появления в поле зрения ярко светящихся контуров спермиев на темном фоне.

Однажды правильно настроенное освещение и фокусировка конденсора приемлемы для последующих серийных определений качества спермы без дополнительной настройки. Для быстрейшего наведения на фокус при смене образцов предметные стекла подбирают одинаковой толщины.

В практических условиях важно определить наличие поврежденных акросом не только на неподвижных, но и на движущихся спермиях, непосредственно участвующих в оплодотворении ооцитов, так как обладающие прямолинейно-поступательным движением половые клетки не всегда являются биологически полноценными, т. е. способными к оплодотворению.

Потеря оплодотворяющей способности нередко связана с нарушением структуры акросомы спермиев, в которой содержатся ферменты гиалуронидаза и акрозин. С целью замедления скорости их поступательного движения и вращения по продольной оси мы применили белок куриного яйца. Движение спермиев в нем замедляется настолько, что можно отчетливо различить состояние их акросом. Белок яйца бесцветный и прозрачный, имеет слоистую структуру, компоненты биологически активных веществ в нем содержатся в изотонической для спермиев концентрации.

Для оценки на предметное стекло наносят стеклянной палочкой одну маленькую каплю оттаянной спермы и рядом с ней при помощи однограммового шприца три капли из слоя жидкого белка такого же объема.

Капли белка и спермы тщательно перемешивают стек-

лянной палочкой, накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом при температуре 38°С. Если капли получились большие, избыток жидкости удаляют, впитывая ее в бумажный фильтр. При необходимости следует сделать новый препарат.

Показатель рефракции (пД) слоя жидкого белка лежит в пределах 1,3568-1,3590. После разбавления спермы белком в соотношении 1:3 этот показатель составляет 1,35201,3550. При таком разбавлении спермы белком в поле зрения просматривается небольшое, удобное для подсчета, число подвижных спермиев, а их движение замедляется в степени, достаточной для оценки.

У отдельных, более ослабленных спермиев, наблюдается только движение жгутиков. Подсчитывают число подвижных спермиев в поле зрения микроскопа, отдельно регистрируя с неповрежденными и частично или полностью разрушенными акросомами, а затем, в этом же поле, в таком же порядке неподвижных. Подсчет спермиев ведут в 10-15 полях зрения микроскопа, результаты оценки заносят в таблицу, а затем вычисляют их процент.

В белковой среде можно определить не только состояние акросом на движущихся и неподвижных спермиях, но и оценить их подвижность в баллах и процентах. То есть проводится комплексная оценка биологической полноценности спермы быков, включая состояние акросом спермиев. Она позволяет наиболее объективно оценить спермопродукцию производителей и прогнозировать ее оплодотворяющую способность.

Контроль за количеством спермиев с нарушенными акросомами необходимо проводить по 3-5 дозам (при наличии спорных результатов – по 10 дозам) из каждой партии замороженного среднего эякулята быка-производителя. Результаты такого анализа учитываются для определения концентрации спермиев в дозе при замораживании следующей партии от данного животного.