Бактериологическая диагностика заключается в микроскопии мазков, получении чистых культур возбудителя и при необходимости проведении биологической пробы на морских свинках. Мазки отпечатки из патологического материала окрашивают по Граму и специальными методами (по Козловскому, Шуляку – Шину, Кюстену, Стампу, модифицированному методу Циля – Нилъсона), позволяющими дифференцировать бруцелл от сходных бактерий. При всех способах окраски бруцеллы красные, фон препарата и другие микроорганизмы в зависимости от метода зеленою или синею цвета. Выделение чистой культуры при посеве патматериала на специальной питательной среде является убедительным подтверждением диагноза.
Для постановки биопробы используют морских свинок массой 350 – 400 г, предварительно исследованных на бруцеллез по РА. Заражают их подкожно в область паха или внутрибрюшинно. На 10, 20 и 30-й дни у них берут кровь для серологического исследования. Наличие у зараженных животных противобруцеллезных антител в титрах 1:10 и выше указывает на заболевание их бруцеллезом. Независимо от результатов серологического исследования животных на 30-й день убивают, вскрывают и из их внутренних органов (лимфоузлы, кровь, костный мозг, печень, почки, селезенка) делают посевы с целью выделения культур, при необходимости проводят гистологическое исследование. Биопроба – ценный метод диагностики бруцеллеза. Разработан и используется при бруцеллезе метод иммунофлюоресценции.
Серологические исследования. Для массовых профилактических и диагностических обследований скота на бруцеллез широко используют РА, РСК и РДСК. Кроме этих реакций применяют РБП (роз бенгал пробу) и кольцевую реакцию (КР) с молоком коров.
На ранних стадиях бруцеллезном процесса наиболее чувствительна РА. Агглютинины в сыворотках крови больных животных в низких титрах можно выявить уже с 10 – 15-м дня, а затем в течение 1 – 3 мес после инфицирования. В более поздние сроки диагностическая ценность РА снижается. Но четкость и чувствительность ее можно повысить путем использования при постановке 5 – 10 %- ного раствора поваренной соли. Ставят РА пробирочным и пластинчатым (на стекле) методами в разведениях сыворотки от 1:25 до 1:200 для свиней, овец, коз, оленей, собак и от 1:50 до 1:400 для
крупного рогатого скота, лошадей, верблюдов, зебу и буйволов; от 1:10 до 1:80 для пушных зверей и морских свинок.
Наличие среди обследуемого поголовья животных, реагирующих по РА в разведениях 1:50 для мелких, 1:100 для крупных и 1:10 для пушных зверей и морских свинок с оценкой более чем в два креста, указывает на заболевание животных бруцеллезом. Обнаружение антител в более низких титрах оценивается как сомнительный результат. Такие животные подлежат повторному исследованию через 15 – 30 дней. Если титры РА нарастают, то животные признаются больными, если же уровень их не изменяется или снижается – животные считаются здоровыми.
Роз бенгал пробу (РБП) применяют при плановых профилактических исследованиях животных на бруцеллез. Сыворотки крови животных благополучных хозяйств, дающие положительную РБП, сразу же исследуют в РА и РСК для установления титра агглютининов и наличия комплементсвязывающих антител.
РСК и РДСК по времени выявления зараженных животных несколько отстают от показаний РА у крупного рогатого скота, но являются более ценными и чувствительными при диагностике бруцеллеза у овец и свиней. Обе реакции стабильны, специфичны и существенно дополняют показания РА у всех видов животных.
Для контроля за благополучием стад по бруцеллезу за рубежом широко применяют кольцевую реакцию (КР) с молоком. В некоторых странах эту реакцию используют и при оздоровлении скота от бруцеллеза. В России эта проба рекомендуется для контроля эпизоотического состояния животных по бруцеллезу в зонах, стабильно благополучных по этой болезни. Но ценность КР снижается в связи с тем, что она может давать положительные реакции при исследовании молока коров, больных маститами и другими болезнями, сопровождающимися лихорадкой, а также в первые 2 нед после отела. Поэтому всех животных, реагирующих по КР в свободных от бруцеллеза стадах, необходимо перепроверять по РА и РСК (РДСК).
Для диагностики бруцеллеза разрабатываются реакции Кумбса, РНГА, связывания конглютинирующего комплекса (РСКК) и другие серологические тесты.
Аллергические исследования. Наибольшую диагностическую ценность они имеют в поздних стадиях развития болезни. Для аллергических исследований применяют бруцеллин ВИЭВ. Препарат
вводят пальпебрально под кожу нижнего века овцам, козам и оленям в дозе 0,5 мл, крупному рогатому скоту и буйволам – в дозе 1 мл, свиньям – внутрикожно с наружной стороны основания уха в дозе 0,2 мл. Реакцию учитывают через 36 – 48 ч. Воспаление на месте введения аллергена расценивается как положительная реакция, животные признаются больными и подлежат убою. Повторно животных исследуют аллергическим методом через 25 – 30 дней. Не разрешается вводить бруцеллин под кожу века животным, имеющим травматические повреждения, абсцессы и другие поражения глаз. Животных с заболеванием глаз или с густым шерстным покровом в области век метят и вводят им бруцеллин в середину одной из подхвостовых складок, внутрикожно в дозах: овцам и козам 0,2 мл и крупному рогатому скоту 0,3 мл (внутрикожная проба).
Дифференциальная диагностика . Бруцеллез дифференцируют от других инфекционных болезней, которые сопровождаются абортами, – кампилобактериоза, трихомоноза, инфекционного эпидидимита, сальмонеллеза, хламидиозного аборта и лептоспироза, а также от незаразных болезней с симптомами аборта.
Лечение. Животные, больные бруцеллезом, подлежат убою.
Иммунитет и специфитческая профилактика. Переболевание бруцеллезом ведет к образованию специфических бруцеллезных антител, выявляемых при серологических исследованиях. Однако наличие антител в сыворотках крови животных не предохраняет их от повторного заражения. В защите животных определенное значение отводится клеточному иммунитету. У переболевших животных макрофаги обладают более выраженной фагоцитарной активностью, чем у здоровых. Полное выздоровление, сопровождающееся освобождением организма от возбудителя, довольно редкое явление среди животных. Иммунитет не стернильный.
Для профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота широко используют вакцину из штамма Вr. abortus штамм №82 (К. М. Салмаков). Вакцина безвредна, обладает слабыми агглютиногенными свойствами и используется как в угрожаемых, так и в неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах. Рекомендованы схемы иммунизации животных с применением вакцин из штаммов №19 и №82.
Для профилактики болезни у овец и коз рекомендована противобруцеллезная вакцина из штамма Рев-1. Вакциной прививают
