——
ВВЕДЕНИЕ
Е:
В Постановлении ЦК КПСС и Совета Министров СССР № 402 от 27 апреля 1981 г. «О мерах по развитию коневодстза», Приказе министра сельского хозяйства СССР (№ 164 от 20 сентября 1981 г.), других директивных документах указывается на необходимость увеличения воспроизводства молодняка лошадей. ° Важную роль в успешном решении данной проблемы итрает своевременная и надежная диагностика зажеребляемости кобыл. В настоящее время для определения жеребости специалисты пользуются ректальным методом. Однако сложность и трудоемкость проведения ректального исследования, необходимость затраты длительного времени для выработки практических навыков, субъективность оценки, возможность абортов у кобыл в результате механического воздействия на половые пути являются серьезными недостатками ректального метода диагностики жеребости. Из лабораторных методов, используемых для выявления зажеребляемости, продолжительное время наибольшим признанием пользовался метод биологического тестирования гонадотропной активности сыворотки крови кобыл на инфантильных самках мышей, основанный на реакции, предложенной Aschheim— Zondek (1927 г.). Однако, этот метод характеризуется низкой чувствительностью, значительным процентом ошибок при исследовании, длительностью реакции (72 часа), требует большого количества лабораторных животных для проведения исследования. Все это ограничивает его производлственное применение. Развитие биологических наук, и в первую очередь эндокринологии, иммунологии, биохимии, биофизики и ряда друTHX, позволяет ‘использовать их достижения для разработки более современных методов диагностики зажеребляемости, из которых наиболее приемлемыми для коннозаводства являются иммунологические, газохроматографические ‘и ультразвуковые. Основными достоинствами указанных методов 3
являются быстрота и простота определения жеребости,| возможность использования их как при конюшенном, так и при табунном содержании лошадей, объективность результатов, высокая точность получаемых данных. Задачи настоящих рекомендаций Задачами указанных рекомендаций являются ознакомлениеременнымиспециалистов,иммунологическими,работающих в газохроматографическимиобласти коневодства, с сов-и ультразвуковыми методами определения жеребости кобыл, сообщение ветеринарным врачам и зоотехникам основных положенийственной подеятельности.использованию данных методов в своей производ-
| 1. ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ ЭКСПРЕСС-МЕТОД РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ ЖЕРЕБОСТИ КОБЫЛ
1.1. Принцип метода
В основе применения предлагаемого нами метода лежит быхповышение)‘кобыл, уровняпо16) сравыениюгонадотропных‘Ona: сi холостыми.гормоновПоэтомув.в кровивыявление} у жереереуровняферментнойзатель длягонадотролинадиагностикитест-системывзажеребляемостикровипозволяеткобылиспользоватьприкобыл.помощиэтотиммуно-пока-
1.2. Получение сыворотки крови от кобыл для проведения Для полученияисследованиясыворотки у накобылжеребостьр берут из яремной вены в центрифужную; пробирку 5—107 мл крови. Затем кровь отстаивают в течение 30 минут при комнатной температуре. отделенияПосле чего следует обвести иглой по стенкам пробирки для три 1000 об/мин.,фибриновогов течениесгустка,10 минут.а затем отцентрифугировать Если сыворотка не предназначена для немедленного исследования, то после центрифугирования пробирка помещается на ночь в холодильник при температуре 4°С. Утром сыворотка сливается в пластмассовые пробирки емкостью 2 мл, которые замораживаются при —20°C и хранятся до проведения анализа.
4
1.3. Получение полиспецифических иммунных сывороток
(антисывороток) к.гонадотропину
Получение иммунных сывороток осуществляется путем пипериммунизации лабораторных животных (кроликов, петухов, морских свинок) высокоочищенными коммерческими препаратами гонадотропного гормона (ГТГ) с концентрацией по ‘белку в растворе 10 мг/мл.
`Иммунизацщия проводится по следующей схеме: 1-й день— 0,1 мл ГТГ вводится под конъюнктиву левого глаза и 2 мл смеси ГТГ + полный адъювант Фрейнда (ПАФ) {1--1) — подкожно в область подколенных и подлопаточных лимфоузлов. - глаза.2-й день— 0,1 мл ГТГ вводится под конъюнктиву. правого
3-й день. — 0,1 мл ГТГ —под конъюнктиву левого глаза; 4—6-й день— перерыв; 7-й день— 0,2 мл ГТГ вводится под конъюнктиву левого глаза и 0,4 мл смеси ГТГ + ПАФ — подкожно, как в 1-Й день; 8-й день— 0,2 мл ГТГ — под конъюнктиву правого глаза; 9-йts день— 0,2 мл ГТГ —под конъюнктиву левого глаза; 10—12-й день— перерыв; 13-йты 03‚о Мл ГТГ ВВОДИТСЯ MON. KOHGIONRTABY лезоро глаза и 0,6 мл смеси ГТГ + ПАФ подкожно, как 1 день; 14-й день— 0,3 мл ГТГ— под конъюнктиву правого глаза; 15-йй день— 0,3 мл ГТГ — под конъюнктиву левого глаза; ИС45-Й-й день4 и — реиммунизац Wt vpes 2 aac, Taeй Tir НЕ"ров: нутр MI I 1! внутривенно; 51—53-й день— взятие крови из краевой вены уха и получение сыворотки. В дальнейшем реиммунизации можно позторять не ра: " рн5 ранеер чемр черезр 30 днейднем шооле ‘последней,ле рввятия PORE. Примечание: В качестве антигенного препарата гонадотропного порн (ГТГ) используется высокоочищенный гонадотропия сыворотки оребых кобыл.
5
