7. Методы диагностики мастита

7. Методы диагностики мастита

Для профилактики маститов и предупреждения получения мо­лока низкого качества необходимо своевременно проводить диагно­стические исследования.

Как отмечено выше, по клиническим признакам маститы у коров подразделяют на серозный, катаральный, фиброзный, гнойный и геморрагический. Показатели дифференциальной диагностики клини­чески выраженного мастита представлены в таблице 5.

Субклинический мастит диагностируют путем исследования молока с одним из быстрых диагностических тестов (БМТ), исполь­зуя при этом пробу молока с димастином, мастидином, мастотестом Воронежским, или с помощью анализатора Экотест-303 и маститоизмерителя фирмы «Драмински». Действие быстрых маститных тестов основано на выявлении увеличенного количества лейко­цитов и изменения рН молока.

Более эффективно исследовать цистернальное (первые порции) и паренхимное (последние порции) мо­локо. Исследования проводят обычно на молочно-контрольных пла­стинах (МКП-1 или МКП-2), которые имеют по четыре (числу чет­вертей вымени) лунки с углублением, объемом 1 мл или 2,5 мл.

5. Дифференциальная диагностика клинически выраженного мастита у коров

Субклинический мастит диагностируют путем исследования молока с одним из быстрых диагностических тестов (БМТ), исполь­зуя при этом пробу молока с димастином, мастидином, мастотестом Воронежским, или с помощью анализатора Экотест-303 и маститоизмерителя фирмы «Драмински». Действие быстрых маститных тестов основано на выявлении увеличенного количества лейко­цитов и изменения рН молока.

Более эффективно исследовать цистернальное (первые порции) и паренхимное (последние порции) мо­локо. Исследования проводят обычно на молочно-контрольных пла­стинах (МКП-1 или МКП-2), которые имеют по четыре (числу чет­вертей вымени) лунки с углублением, объемом 1 мл или 2,5 мл.

Методы выявления маститов у коров можно разделить на следующие группы:

– физико-химические,

– цитологические,

– микробиологические.

Физико-химические методы диагностики мастита. Исполь­зуются как вспомогательные наряду с другими тестами. К ним отно­сятся индикаторные методы, каталазная проба, определение хлорсахарного числа, плотности и электропроводимости молока, а также опсонофагоцитарная реакция лейкоцитов молока.

Индикаторные методы чаще используют при определении рН молока. Они основаны на изменении цвета индикатора при тех или иных изменениях рН молока. Наиболее чувствительными являются: бромтимоловый синий, бромкрезоловый пурпурный, феноловый красный, нейтральный красный, крезоловый и другие. Молоко здоровых коров имеет слабокислую реакцию (рН 6,3-6,9). При заболевании коров маститом реакция молока в большинстве случаев становится щелочной (рН 7,0 и выше) и очень редко кислой (рН 6,0 и ниже). Кислая реакция молока также бывает

после отела, а щелочная – у стародойных и у коров, находящихся в запуске.

Для контроля за состоянием молочной железы руководствуются «Методическими указаниями по диагностике, лечению и профилак­тике маститов у коров».

Для диагностики скрыто протекающих мас­титов используют 10%-ный раствор мастидина или 10%-ный раствор мастотеста Воронежского, или 20%-ный раствор сульфанола (кото­рый перед анализом разводят водой до 10%-ной концентрации), или 5%-ный раствор димастина, мастоприма или 4%-ный раствор гидро­окиси натрия (проба Уатсайда), а также пробу отстаивания.

Все диагностикумы содержат поверхностно-активные вещества, которые, взаимодействуя с лейкоцитами, образуют сгусток, а инди­катор изменяет цвет в зависимости от реакции среды (рН).

Проба с димастином является одним из широко применяемых методов исследования молока с целью выявления субклинического мастита.

Для диагностики заболевания необходимы пластинки с углублениями, пипетки на 1 мл, стеклянная палочка, 5%-ный раствор димастина (приготов­ленный на дистиллированной воде), автомат-пипетка на 1 мл.

При исследовании в луночки пластинки от каждой доли вымени наливают по 1 мл молока последней порции удоя, добавляют по 1 мл 5%-ного раствора димастина. Содержимое луночки перемешивают стеклян­ной палочкой. Молоко, полученное от коров, больных маститом, образует плотный тягучий сгусток ярко-красного цвета. Если обра­зуется сгусток желеподобной консистенции красного цвета, то счи­тают, что молоко получено от коров, подозрительных по заболева­нию маститом. Нормальное молоко остается однородным, цвет его оранжево-красный.

Проба с мастидином. Пробу проводят так же, как с димастином.

Реакцию учитывают главным образом по густоте желе. Положи­тельная реакция – сгусток похож на белок куриного яйца, фиолето­вого или

темно-сиреневого цвета, отрицательная – однородная жид­кость или слабый сгусток светло-сиреневого или дымчатого цвета. В таком же порядке исследуют молоко другими диагностиками (мастограм, сульфанол).

Проба с отстаиванием. В пробирку наливают 10-15 мл молока, отстаивают в течение 16-18 ч на холоде и на второй день учитывают реакцию. В молоке коров, больных маститом, на дне пробирки обра­зуется осадок с желтоватым или синеватым оттенком высотой 0,1 см и более, а также уменьшается слой сливок. Молоко от здоровых коров осадка не образует. Если проба с отстаиваиванием дает сомнительные результаты, то для уточнения диагно­за, молоко направляют на исследование в ветеринарную лаборато­рию, где определяют число лейкоцитов, активность каталазы и лизоцима, исследуют бактериологически.

Каталазная проба. Каталаза содержится в молоке здоровых коров в небольшом количестве, при воспалительных процессах ее содержание увеличивается. Данная проба основана на определении в молоке увеличенного содержания фермента каталазы, которая про­дуцируется клетками тканей, соматическими клетками, а также некоторыми микроорганизмами. Наибольшее количество каталазы вырабатывают лейкоциты. Проба основана на принципе расщепления каталазой перекиси водорода с выделением газообраз­ного кислорода. Ставят ее в специальных каталазных или градуиро­ванных пробирках. Известны и более упрощенные, ускоренные мо­дификации пробы в виде смешивания молока и раствора перекиси водо­рода в углубленной черной пластинке или обычных пробирках, где в положительных случаях сразу после перемешивания появляется пенообразование.

Заслуживает внимания очень простой метод каталазной пробы путем

погружения в раствор перекиси водорода бумажных дисков, смоченных исследуемым молоком. По времени обнаружения диска на поверхности смеси судят об активности каталазы или о количестве соматических клеток в молоке. Каталазная проба является чувствительным тестом, хотя в ряде случаев, обнару­живается положительная реакция с молоком здоровых коров.

Определение хлорсахарного числа. Хлоросахарное число – это соотношение хлоридов и лактозы (молочного сахара). В нормальном молоке в середине лактации содержится около 0,07% хлоридов и 4,5-4,7% лактозы. Наиболее приемлемым показателем является число Кестлера (процент хлоридов, умноженный на 100 и деленный на процент лактозы). Для нормального молока это число составляет 2 или меньше, а для анормального молока превышает 3.

Лактоза и хлориды имеют важное значение в регулировании осмотического давления молока. Данный показатель является вели­чиной постоянной и характеризует состояние физиологических процессов в организме. Уровень осмотического давления молока зависит от количества растворимых в нем молочного сахара и хло­ристых солей.

При воспалительных процессах вымени вследствие нарушения секреции в молоке значительно уменьшается количество лактозы, ко­торая не поступает в готовом виде из крови, а синтезируется в молоч­ной железе. В результате снижается осмотическое давление молока. Так как молоко и кровь изотоничны, то для выравнивания осмотиче­ского давления из крови в молоко усиленно начинают диффундиро­вать соли, главным образом – хлористый натрий. Содержание лактозы в молоке при воспалительных процессах в молочной железе является первичным, а солей – вторичным. Границы содержания хлоридов в нормальном молоке – 0,05-0,12%, а в анормальном (при мастите) – 0,30% и более. Содержание лактозы в молоке при ранней форме мас­тита всегда ниже нормы (в среднем 1,5%).

Массовую долю лактозы можно определить с помощью препа­рата ЛУМ. Он представляет собой порошкообразную смесь, в состав которой входит лимоннокислый натрий (50%), углекислый натрий безводный (25%) и сернокислая медь (25%). Перед исследованием готовят 4%-ный раствор

препарата ЛУМ на дистиллированной воде. Раствор имеет синее окрашивание. В пробирки наливают по 2 мл раствора, до­бавляют по 2 капли исследуемого молока, перемешивают и ставят в кипящую водяную баню на две минуты. По истечении этого времени пробирки вынимают и учитывают результаты по цвету жидкости. Для сравнения цвета оставляют одну контрольную пробирку. Если цвет реактива с молоком после выдерживания в водяной бане оста­ется синим, молоко содержит в среднем 3% лактозы, при темно-зеленом (сине-зеленом) цвете – 3,45%, при зеленом – 4,4%, а при желто-зеленом или салатном цвете – выше 5%.

Определение плотности молока проводят спустя 2 ч после дойки при температуре 20-25°С. Для этого молоко сначала переме­шивают, а затем наливают в стеклянный цилиндр и при помощи ареометра, который погружают в цилиндр, определяют плотность. Нижней границей нормы принята величина 1,027 г/см³. При заболе­вании коров маститом плотность молока обычно снижается.

Опсоно-фагоцитарная реакция лейкоцитов молока (ОФР) отражает состояние организма животного, ее используют для уточ­нения диагноза ранней формы мастита. Для постановки реакции го­товят взвесь суточной культуры, содержащую 1 млрд. сапрофитного стафилококка (подогретую до 80°С в течение 30 мин), 0,5 мл взвеси антигена смешивают с 0,5 мл исследуемого молока. Смесь инкуби­руют в термостате в течение 30 мин, затем делают мазки, высушива­ют их и окрашивают по Романовскому-Гимза 10 мин. Подсчитывают 50 лейкоцитов и количество находящихся в них бактерий. Учиты­вают результат по количественному показателю фагоцитоза

(АФ) и качественному показателю (ИФ). АФ равен количеству участвую­щих в фагоцитозе лейкоцитов, деленному на число подсчитанных лейкоцитов и умноженному на 100. ИФ равен количеству погло­щенных бактерий, деленному на количество лейкоцитов. Оценка показателей ОФР производится по полученным результатам: при низком уровне фагоцитоза ИФ не превышает 1,0, АФ – 52,0; при среднем ИФ – 1,0-1,5, АФ – 52,0-62,0; при высоком уровне ИФ – 1,5-2,4; АФ – 62,0-79,8.

Для диагностики маститов во многих странах мира (Япония, Голландия, Германия, Англия, Швеция) применяется прибор­ный метод, основанный на изменении электропроводимости молока. Известно, что электропроводимость молока связана с содержанием в нем ионов натрия, калия, хлора и других химических элементов. Японская фирма «Искра» разработала систему автоматического детектирования мастита «Чекгейт». Данный детектор устанавливают перед дойкой в доильный аппарат; вторую часть системы (прибор­ный блок со световой индикацией) помещают на видном для мастера машинного доения месте. Индикаторные лампочки загораются в случае, если име­ются соответствующие изменения в составе молока; другие две лам­почки сообщают об окончании выделения молока по четвертям.

Цитологические методы диагностики мастита. Методы осно­ваны на определении количества соматических клеток в молоке. Они делятся на прямые и непрямые.

В состав соматических клеток входят лейкоциты (80-85%), эритроциты, клетки плоского, цилиндрическо­го и кубического эпителия молочной железы, колостральные тельца (15-20%). В 1939 году Уайтсайд заметил, что при добавлении к молоку коровы, больной маститом, едкого натра, после помешивания обра­зуется густая тягучая масса. Открытие послужило основанием к исполь­зованию поверхностно-активных веществ для косвенного определе­ния количества соматических клеток в молоке.

Проба Тромсдорфа. Один из давно известных методов обнару­жения повышенного количества соматических клеток в молоке. Сущность ее заклю­чается в осаждении повышенного содержания лейкоцитов и других клеточных элементов при центрифугировании 10 мл молока, после чего по объему осадка судят о наличии или отсутствии заболевания.

Проба Уайтсайда основана на смешивании 4%-ного раствора едкого натра с молоком в соотношении 1:5. При наличии воспали­тельных процессов в вымени образуется тягучая густая масса с хлопьями.

В настоящее время широко применяются быстрые маститные тесты из поверхностно-активных веществ, которые отражают коли­чество соматических клеток в молоке. Действующим началом явля­ются поверхностно-активные вещества типа алкиларилсульфатов и алкиларилсульфонатов. За рубежом предложен целый ряд таких реактивов: мичиганский маститный тест, бернбург, стара загора, софия и другие.

В нашей стране использу­ются следующие препараты: димастин, мастидин, маститодиагност, универсал. Желеобразный сгусток образуется в результате раз­рушения поверхностно-активными веществами ядер клеток, содер­жащихся в молоке. Переходящая при этом в раствор нативная дезоксирибонуклеиновая кислота придает ему вязкость. Учет результатов проб проводится по характеру образования желеобразного сгустка.

Продолжение · 11

Прямой подсчет соматических клеток считается наиболее точным показателем диагностики мастита. Международная молочная федерация приняла решение считать нормальным наличие в 1мл сборного молока до 500 тыс. соматических клеток.

Метод Прескотта и Бритта считается арбитражным в междуна­родном масштабе, он является контрольным при автоматическом подсчете соматических клеток в молоке. Он основан на свойстве ядер соматических клеток ярко окрашиваться специфическими красите­лями. После

окрашивания (по Романовкому-Гимза) и высушивания мазок молока микроскопируют под иммерсионным объективом. В каждом мазке просматривают 100 полей зрения. Подсчитывают число клеток, умножают его на коэффициент для пересчета с учетом объектива и окуляра и определяют количество клеток в 1 мл молока.

Камерный метод заключается в подсчете соматических клеток в камере Горяева. Сначала необходимо растворить жировые шари­ки этиловым спиртом или формалином, синтанолом ДС-10 и покра­сить пробу, затем под микроскопом подсчитывают количество сома­тических клеток во всей камере.

Расчет числа клеток проводят по формуле:

Х = (1000∙50а)/ V,

где Х- количество соматических клеток в 1 мл молока; 1000 – множи­тель, приводящий результат к объему 1 мл; 50 – разведение молока; а – сумма клеток в определенном объеме камеры; V– объем камеры.

Подсчет клеток с помощью прибора Культера. Данный при­бор представляет собой электронный счетчик с капиллярной трубкой диаметром 100 мкм, подсчитывающий объем молока 0,1 или 0,5 мл (модель F, FN). Сначала проводят калибровку согласно инструкции изготовителя с применением стандартной суспензии частиц. Калиб­ровку проводят по нескольким образцам молока, содержащего от 300 тыс. до 1 млн. клеток в 1 мл, что предварительно определяется под микроскопом. Модельный диаметр соматических клеток должен находиться между 5,45 и 6,25 мкм (рабочий режим счетчика). Реактив для подсчета соматических клеток, в состав которого входят вещества, способствующие растворению жировых шариков (синтанол ДС-10) и делающие раствор электролитичным (хлористый натрий), пропус­кают через стеклянный фильтр. Подсчет клеток в смеси молока с эмульгирующим электролитом проводят в пределах одного часа при температуре 15-25°С.

Во время подсчета электрод, погру­жающийся в трубку измерительного прибора, должен находиться ниже поверхности жидкости.

К 9,9 мл синтанола добавляют 0,1 мл фиксированного форма­лином молока. Образец подогревают при 80°С в течение 10 мин в водяной бане и охлаждают. После этого под трубку подводят ста­канчик с 10 мл приготовленного молока. Включают прибор, предва­рительно поставив его на соответствующий рабочий режим. Резуль­таты подсчета видны на табло (соматических клеток, тыс. на 1 мл молока).

Подсчет соматических клеток на приборе Фоссоматик. Ме­тод основан на образовании флуоресцентного комплекса при взаи­модействии люминесцентного красителя с ДНК ядра клетки, поэто­му он является специфическим, так как подсчитываются только клетки, имеющие в своей структуре ядро. Фоссоматик – электрон­ный прибор, предназначенный для подсчета соматических клеток в сыром и консервированном молоке.

Бактериологические методы диагностики мастита. Для бак­териологического анализа молока на мастит с соблюдением правил асептики отбирают пробы из четвертей вымени, подозреваемых в заболевании. Для посева применяют обычные или элективные пита­тельные среды. Чаще всего используется кровяной мясо-пептонный агар.

Для идентификации выросших культур изучают их свойства. Крупные выпуклые колонии, вне зависимости от наличия зоны ге­молиза, ориентировочно относят к стафилококкам; мелкие росинчатые – к стрептококкам; серые и круглые колонии (блестящие и пло­ские) обычно указывают на рост бактерий группы кишечных пало­чек. Появление колоний с зеленым оттенком предполагает наличие синегнойной палочки. Слизистые гладкие или матовые колонии ха­рактерны для споровой микрофлоры, что свидетельствует о механи­ческом загрязнении молока.

Для выделения и идентификации стрептококков применяют сре­ды

Эдвардса, ТКТ и Карташовой. Из серологических методов иден­тификации микроорганизмов используется иммунофлюоресценция со специфическими сыворотками.

Для выделения из молока и идентификации стафилококков ис­пользуют, главным образом, ДНК-новокаиновый агар, тесты Шермана, а БГКП – агары Эндо и Левина, а также жидкую элективную питательную среду Карташовой.

8. Ветеринарно-санитарная оценка молока при маститах

8. Ветеринарно-санитарная оценка молока при маститах

Ветеринарно-санитарная оценка молока при маститах зави­сит от глубины и характера болезни вымени.

Ветеринарно-санитарная оценка молока предусматривает опасность продукта и микроорга­низмов, которые могут быть в сыром молоке при разных формах мастита. Возбудителями маститов чаще всего являются Str. uberia, Е. coli, Sir. agalactiae, Str. dysgalactiae, Staph. aureus, B. proteus vulgaris, B. pyogenes, В. cereus, Cl. perfingens, микроскопические гри­бы и другие микроорганизмы. Патогенные стафилококки, клостридии и стрептококки, содержащиеся в молоке, могут стать причиной заболевания людей ангиной, скарлатиной, отитом, пневмонией, ме­нингитом и пищевых отравлений, так как применяемые режимы обеззараживания молока не инактивируют полностью микробные токсины. Гноеродные микроорганизмы обусловливают развитие гнойно-некротического воспаления в органах и тканях человека.

Распознавание и ветеринарно-санитарную экспертизу молока больных животных про­водят комплексно. При изучении ветеринарных сопроводительных документов учитывают эпизоотическое благополучие местности и результаты исследований на скрытый мастит. При клиническом осмотре коров обращают внимание на клинические признаки, харак­терные для инфекционных, инвазионных и незаразных болезней. Для выявления молока, полученного от больных животных, проводят его органолептическое, физико-химическое и микробиологическое ис­следования.

У больных маститом животных снижается секреция молока и ухудшается его качество. Молоко, полученное от больных животных, представляет опасность для человека, поскольку может содержать возбудителей инфекционных болезней животных, бактериальные токсины, лекар­ственные препараты, токсичные метаболиты.

Физико-химические и органолептические показатели молока коров, больных маститом, претерпевают значительные изменения и не отвечают требованиям стандарта.

В молоке больных маститом коров уменьшается количество казеина, лактозы, жира и обез­жиренного сухого вещества, снижаются плотность и способность к свертыванию. Увеличивается содержание хлора, аль­бумина, уменьшается диаметр жировых шариков.

При выраженной клинической картине болезни молоко часто приобретает творожистую консистенцию, синеватый или желтоватый цвет, соленый привкус, в нем могут быть хлопья, гной, слизь, кровь. Такое молоко после кипячения подлежит уничтожению. Если у коро­вы отмечается ограниченный одной-двумя долями мастит, то уничто­жают только молоко из пораженных долей. Молоко из непораженных долей используют после кипячения для кормления животных. Такое молоко сдаивается в отдельные ведра, или другие емкости, которые моют и дезинфицируют после дойки и освобождения от молока.

При субклиническом мастите отдельных долей вымени молоко в сыром виде на пищевые цели не используется, так как в нем по­вышено содержание соматических клеток и микроорганизмов. Такое молоко должно подвергаться кипячению или пастеризации по режи­мам, определяемым ветеринарной службой или Правилами ветеринарно-санитарной экспертизы молока и молочных продуктов. Пастеризация или кипяче­ние молока должны проводиться под контролем ветеринарных спе­циалистов. При сдаче пастеризованного молока проверяется эффек­тивность (соблюдение режимов) пастеризации в соответствии с нормативными документами

Для доения коров, больных маститом, используют переносные доильные ведра, которые дезинфицируют после каждой дойки. Молоко от этих коров из непораженных четвертей вымени соби­рают в отдельную емкость, пастеризуют при 85°С в течение 30 минут или кипятят и используют в хозяйстве для кормления животных. Молоко из пораженных чет­вертей вымени уничтожают после кипячения.

Для выявления животных, больных маститом, всех коров на ферме следует ежедневно подвергать клиническому ос­мотру во время доения и один раз в месяц исследовать пробы молока из каждой доли вымени.