Соединение полистироловой пипетки со шприцом
Оттаивание спермы в облицованных гранулах объемом 0,25-0,33 мл осуществляют без разбавления в 2,9%-ном растворе цитрата натрия. Техник надевает защитные очки и перчатки, открывает сосуд Дьюара, быстро подтягивает к верхней трети горловины (не более 5 с) канистру с тубой и вскрывает ее. Извлекает стерильным, предварительно охлажденным в азоте пинцетом (корнцангом) облицованную гранулу и быстро переносит ее пинцетом с широкими браншами в водяную баню температурой 38-40°С, оттаивает до появления тонкого стерженька льда (для этого желательно использовать микротермостаты МТ-1,2 или термостат биологический ТБ-010). Через 8-10 с гранулу извлекает, насухо протирает стерильной салфеткой, проверяет на герметичность путем легкого сжатия между двумя пальцами: герметичной считается спермодоза, у которой не обнаружена утечка содержимого. После этого оценивает качество спермы на подвижность.
Оттаивание спермы в соломинках, укупоренных стеклянными шариками. Техник надевает защитные очки, перчатки, подтягивает к верхней трети горловины сосуда Дьюара (не более 5 с) канистру с тубой, быстро извлекает стерильным, предварительно охлажденным в азоте, пинцетом (корнцангом) соломинку, встряхивает ее 2-3 с и погружает в воду термостата для оттаивания. Встряхивание способствует испарению жидкого азота и предупреждает возможное растрескивание соломинок и выдавливание укупорочных шариков. Канистру с семенем опускает в азот. Сосуд закрывает крышкой.
Оттаивать соломинку необходимо в течение 10 с при температуре 38°С, перемещая ее круговыми движениями в воде.
Затем соломинку извлекают из термостата и, тщательно осушая стерильной марлевой или бумажной салфеткой, проверяют запись клички и номера быка на соломинке, энергично встряхивают, чтобы воздушный пузырек переместился в конец соломинки. Поршень осеменительного шприца оттягивают примерно на 90 мм, в трубку до упора вставляют соломинку, чтобы кончик ее с воздушным пузырьком был снаружи. Конец соломинки обрезают стерильными ножницами строго перпендикулярно через воздушный пузырек на расстоянии около 7 мм от конца соломинки. Ножницы должны быть острыми и использоваться только для обрезания соломинок. Тупые ножницы деформируют соломинку, при этом может нарушиться плотность
соединения ее с внутренней частью конусного конца защитного чехла. На шприц с соломинкой надевают защитный чехол, который тщательно закрепляют фиксатором. Надежность закрепления проверяют слабым надавливанием большого пальца на поршень: чехол не должен сдвигаться. При этом удаляется воздушный пузырек и появляется капелька спермы, которую можно исследовать под микроскопом.
Оттаивание спермы в пайеттах («французская соломинка»). Техник надевает защитные очки, перчатки, подтягивает к верхней трети горловины сосуда Дьюара (не более 5 с) канистру с тубой, быстро извлекает стерильным, предварительно охлажденным в азоте, пинцетом (корнцангом) соломинку за запаянный конец, встряхивает ее 2 раза, чтобы удалить остатки азота в текстильной пробке, и быстро погружает в термостат для оттаивания. Встряхивание способствует испарению жидкого азота из текстильной пробки и предупреждает возможное выдавливание пробки из соломинки. Канистру с семенем опускает в азот. Сосуд закрывает крышкой.
Оттаивать соломинку необходимо в течение 10 с при температуре 38°С, перемещая круговыми движениями в воде.
Затем соломинку извлекают из термостата, тщательно осушают стерильной марлевой или бумажной салфеткой. Проверяют запись клички, номер быка и местонахождение пузырька воздуха (должен находиться с той стороны соломинки, которая запаяна в лаборатории). Поршень шприца оттягивают на 12 см (стержень поршня слегка искривлен, что удерживает его в одном положении). С помощью фильтровальной бумаги или стерильной марлевой салфетки необходимо согреть полость (камеру) шприца, установить соломинку со стороны текстильной пробки в полость (камеру) шприца. Конец соломинки со стороны запайки обрезают в середине воздушного пузырька стерильными ножницами строго перпендикулярно. Ножницы должны быть острыми, так как тупые ножницы деформируют соломинку, при этом может нарушиться плотность соединения ее с внутренней частью конусного конца защитного чехла. На шприц с соломинкой надевают защитный чехол, который закрепляют навинчиванием. Надежность закрепления проверяют слабым надавливанием большого пальца руки на поршень шприца: чехол не должен сдвигаться. При этом удаляется воздушный пузырек и появляется капелька спермы, которую можно исследовать под микроскопом на подвижность.
ВНИМАНИЕ! . Следует соблюдать принцип постепенного прогрева и избегать охлаждения спермы в ходе выполнения операции. А
• От момента оттаивания до введения спермы животному должно проходить не более 10 мин.
Процесс оттаивания семени в соломинках
Извлечение спермы, замороженной в соломинках, проводится стерильным корнцангом. Процесс должен происходитьв горл овинесосуда Дьюара и длиться не более 5 с. Перепады температуры во время извлечения замороженной спермы снижают ее качество
Оттаивание спермы в соломинках происходит при температуре 38-40°С в течение 8-10 с. Соломинку после оттаивания необходимо насухо вытереть марлевой салфеткой и, держа за конец, встряхивать, чтобы воздушный пузырек опустился к пробке
