Искусственное осеменение коз

h) Подготовка спермы к заморозке

Сперма может быть заморожена в соломинках в парах жидкого азота (при температуре -196ºC) или в сухих ледяных гранулах (твердый диоксид углерода при температуре -79ºC). Сперма, замороженная одним из этих двух методов, хранится в термосе с жидким азотом. Процесс замораживания в гранулах легче, чем в соломинках, но последние легче использовать индивидуально и ими легче манипулировать во время искусственного осеменения.

Важно проводить замораживание в условиях низких температур, а также обеспечивать однородные дозы спермы для получения схожего семенного качества. Особое внимание требуется при определении различных партий.

1. Замораживание спермы в гранулах

Для замораживания спермы в гранулах требуется блок сухого льда с плоской поверхностью. При помощи гвоздей, подогретых на пламени, на его поверхности формируются ячейки.

Сперму вынимают из холодильника на водяной бане при температуре 5ºC. Другой контейнер с оставшимся разбавителем, в качестве хладагента, используется для хранения стеклянных пипеток при низкой температуре.

Как только сперма аспирируется в пипетку, по 0,25 мл (± 4 капли) помещается в каждую ячейку, быстро и последовательно, стараясь не задерживаться более чем на минуту между первой и последней гранулой. Дозы спермы находятся там в течение 1-2 минут, пока их поверхность не станет непрозрачной. Затем они переносятся в термос с жидким азотом.

2. Замораживание спермы в соломинках

Соломинки, поливинильный спирт и шприц с 1,5 см иглой хранятся в холодильнике до проведения замораживания. Соломинки заполняются посредством аспирации через тройной тампон (вата – поливинильный спирт – вата); при этом конец, свободный от тампона, помещается в сперму. Соломинки держат за тампонированный конец (во избежание того, что тепло рук повлияет на качество спермы). Поливинильный спирт в тройном тампоне застудневает и герметизируется при прикосновении его с аспирированной спермой. Соломинки сушат при помощи поглощающей бумаги, и воздушное пространство длиной 1,5 см образуется на свободном от тампона конце при помощи шприца с соответствующей иглой. Этот конец затем герметично закрывается путем мягкого, вертикального постукивания по месту, содержащему поливинильный спирт. Затем соломинки немедленно погружаются в контейнер с водяной баней при температуре 5ºC.

Необходим термически изолированный ящик с крышкой, размером примерно 39 см в длину, 34 см в ширину и 25 см в высоту. Также необходимы деревянные блоки, сетка, алюминиевая рама, размером 11 см, 7 см и 2 см соответственно. Алюминиевая рама на деревянных блоках и сетка достигнут, по отношению к нижней части ящика, 20 см в высоту (1 уровень). При удалении сетки высота алюминиевой рамы на деревянных блоках достигнет 9 см (2 уровень).

Жидкий азот наливают в ящик до достижения 6 см высоты от дна. Накройте его на несколько минут до окончания «закипания» и пока не охладится внутренняя часть. После просушки соломинок их располагают горизонтально на алюминиевой раме, при этом они не должны касаться друг друга.

Соломинки на раме помещают внутри ящика на 1-м уровне на 2 минуты. Затем ящик открывают и соломинки помещают на 3 минуты на 2-й уровень (после удаления деревянных блоков).

Наконец, соломинки выливают в жидкий азот и помещают в канистры в термос с жидким азотом.

i) Размораживание и оценка партии спермы

Сперма размораживается как описано выше (см.: Обращение с замороженной спермой). После оценки 10% замороженных доз решается вопрос принятия или непринятия партии. Должны быть выполнены несколько исследований одной и той же соломинки или гранулы.

Через 5 минут после инкубации при температуре 36ºC подвижность сперматозоидов оценивается при 100-кратном увеличении с использованием разогретого предметного стекла над термической пластиной. Капля спермы помещается между нагретым предметным стеклом и крышкой для определения процента живых сперматозоидов и прогрессивной индивидуальной подвижности (скорость перемещения вперед живых сперматозоидов: минимум 0, максимум 5).

Для принятия семенной партии, соломинки или гранулы должны иметь:

• a) Масал-подвижность после размораживания. b) Долю живых сперматозоидов, превышающую 30%. c) Прогрессивную индивидуальную подвижность равную или превышающую 2,5.

• j) Размораживание спермы для искусственного осеменения

Размораживание осуществляется на водяной бане при температуре 36ºC. Содержимое каждой соломинки или гранулы выливается в гемолитическую пробирку и набирается в шприц для осеменения.

Приложение: Протокол по козам в отношении замораживания спермы

1. Номер животного

2. Объем эякулята

3. Концентрация сперматозоидов

4. Общее количество сперматозоидов: Объем эякулята х Концентрация

• сперматозоидов

5. Общее количество сперматозоидов х 0,9

6. Количество доз для осеменения:

Общее количество сперматозоидов х 0,9 / Количество сперматозоидов на дозу

7. Общий объем (эякулят + разбавитель): Количество доз для осеменения х

Объем дозы

8. Объем разбавителя: Общий объем – Объем эякулята

9. Объем раствора A: Объем разбавителя / 2

10. Объем раствора B: Объем разбавителя / 2

11. Объем раствора B / 3