ларвоцист показало положительный результат в РСК с фасциоловым антигеном (1:20 +++).
В дальнейшем испытание фасциолового антигена в РСК проводили с сыворотками крови крупного рогатого скота из 10 хозяйств неблагополучных по фасциолезу. Одновременно животных исследовали гельминтоовоскопическими методами, а также учитывали данные Арской ветеринарной лаборатории и Казанского мясокомбината. Результаты исследований представлены в таблице 16.
По данным копроскопических исследований ветеринарной лаборатории за 1998 – 1999 годы КП «Кунгер» Атнинского района считалось благополучным. Однако при вскрытии печени крупного рогатого скота на Казанском мясокомбинате были выявлены фасциолы.
При копрологическом исследовании в 1998 году 100 проб фекалий от коров из данного хозяйства были получены отрицательные результаты, а по данным Казанского мясокомбината при ветеринарно-санитарной экспертизе печени у 9 из 19 голов крупного рогатого скота были обнаружены фасциолы. Процент заражения при этом составил 47,3.
В 1999 году при исследовании 100 проб фекалий коров методом последовательного промывания яйца фасциол также не были обнаружены. По данным Казанского мясокомбината за 1999 год при убое 18 коров из КП «Кунгер» Атнинского района у 5 (27,7 %) животных были обнаружены фасциолы.
На основании копрологических исследований, проведенных в ветеринарной лаборатории, это хозяйство считалось благополучным по фасциолезу и в 1998 – 1999 годах дегельминтизация животных не проводилась. В феврале 2000 года в целях выявления объективной эпизоотической ситуации по фасциолезу в данном хозяйстве от 200 коров комиссионно были взяты фекалии и одновременно пробы крови для постановки РСК с фасциоловым антигеном.
При комиссионном исследовании в Арской ветеринарной лаборатории 200 проб фекалий методом последовательного промывания снова были получены отрицательные результаты у всех животных. В РСК с фасциоловым антигеном в разведении сыворотки 1:5 реагировали 9 проб сывороток в разведении 1:10 – 14 и в разведении 1:20 – 15 проб. Всего положительно реагировали 38 животных, что составляет 19 % к числу исследованных.
У 17 коров, положительно реагировавших в РСК с фасциоловым антигеном, были взяты пробы фекалий для копрологического исследования.
При исследовании методом последовательного промывания яйца фасциол не обнаружены. В конце опыта из 17 коров, реагирующих в РСК на фасциолез, 3 – были подвергнуты убою. При неполном гельминтологическом вскрытии в желчных протоках печени обнаружены фасциолы. Количество фасциол в печени у одной коровы составило 46, у второй – 26 и третьей – 37.
Данные исследований 6 хозяйств Арского и Высокогорского районов, проведенные в ветеринарных лабораториях показали, что при применении метода последовательного промывания в 4 хозяйствах (КП «Игенче», учхоз КГАВМ, агрофирма «Нокса» Высокогорского и КП «Пошалым» Арского районов) яйца фасциол также не выявляются. Однако при неполном гельминтологическом вскрытии печени на Казанском мясокомбинате у некоторых животных были обнаружены фасциолы.
В дальнейшем было проведено исследование фекалий крупного рогатого скота из этих же хозяйств модифицированным нами методом. Исследовано 1200 голов крупного рогатого скота из 9 хозяйств Арского, и Высокогорского Кукморского районов. Модифицированным гельминтоовоскопическим методом выявлено 156 инвазированных фасциолезом животных (13 %), в то время как методом последовательного смыва обнаружено 23 (1,9 %) инвазированных животных. В РСК выявлено 194 инвазированных животных, что составляет 16,1%.
Таким образом, проведенные нами исследования показали, что комбинированный метод экстрагирования позволяет получить активный и специфичный фасциоловый антиген для постановки реакции связывания комплемента.
В неблагополучном по фасциолезу хозяйстве РСК с фасциоловым антигеном намного превосходит по выявлению инвазированных животных гельминтоовоскопические методы. При этом отмечено очень низкая разрешающая способность метода последовательного промывания, который в основном принят в ветеринарных лабораториях Республики Татарстан. Для реальной оценки гельминтологической ситуации нужно проводить комплексные исследования, в том числе серологические и копрологические по усовершенствованной методике.
Следующим этапом наших исследований являлось совершенствование серологической диагностики фасциолеза путем изготовления активного и специфического антигена для реакции иммуноферментного анализа.
Материалом для получения антигена служили фасциолы из желчных ходов печени крупного рогатого скота, полученные при убое животных на мясокомбинате. Живых гельминтов многократно промывали физиологическим раствором до полного удаления желчи и кровяных сгустков и до отсутствия опалесценции в промывочной жидкости.
При убое путем неполного гельминтологического вскрытия и исследования крови определяли здоровых животных, а также инвазированных фасциолезом, дикроцелиозом и эхинококкозом. Сыворотки крови от здоровых животных служили как позитивные, а от больных дикроцелиозом и эхинококкозом для контроля специфичности полученных фасциоловых диагностикумов.
Антигены из фасциол готовили разными методами. Первая технологическая модификация заключалась в следующем. После последнего промывания фасциол физиологическим раствором их помещали в ацетон –
90
