диметилсульфоксида, рабочим титром которого является разведение 1:100. Этот антиген мы использовали в дальнейших исследованиях.
Испытуемые сыворотки, реагирующие в разведении 1:200 – 1:800, считали как положительные.
Данные изучения специфичности фасциолового антигена отражены в таблице 18.
Из таблицы видно, что при постановке ИФА с 40 негативными пробами сывороток крови реакция была отрицательной, а 12 позитивных фасциоловых сывороток показали положительный результат. Из 10 дикроцелиозных и 10 эхинококкозных сывороток соответственно по одной также реагировали
позитивно, то есть и при ИФА не исключается возможность перекрестных реакций с фасциоловым антигеном.
Для дальнейшей очистки полученного фасциолового антигена из тотальных белковых экстрактов фасциол был применен метод ультрацентрифу гирования. Полученный в этом агрегате антигенный препарат был свободен от примесей более высокомолекулярных паразитарных антигенов и других высокомолекулярных компонентов, в том числе и белков хозяина, присутствующих в неочищенных экстрактах и проявил большую специфичность.
18. Результаты испытания специфичности фасциолового антигена (ДМСО) в ИФА
| № п/п | Сыворотка | Количество проб | Реагировали | в ИФА |
|---|---|---|---|---|
| положительно | отрицательно | |||
| 1. | Фасциолезная | 12 | 12 | – |
| 2. | Негативная | 40 | – | 40 |
| 3. | Дикроцелиозная | 10 | 1 | 9 |
| 4. | Эхинококкозная | 10 | 1 | 9 |
При исследовании сывороток крупного рогатого скота в ИФА с фасциоловым антигеном в отношении негативной сыворотки коэффициент специфичности был равен 1,5 и выше, что позволяет считать реакцию специфичной.
Для изучения диагностической эффективности ИФА в сравнении с РСК исследовали сыворотки крови крупного рогатого скота, спонтанно инвазированного фасциолезом с различной интенсивностью инвазии. Результаты исследований приведены в таблице 19.
Из таблицы видно, что при интенсинвазированности одной фасциолой из 6 животных все реагировали положительно на фасциолез. Титры антител у 2 животных составляли 1:400, а у 4-х – 1:800.
При исследовании сывороток крови крупного рогатого скота, инвазированных двумя фасциолами, 2 животных показали позитивный результат в титре 1:400, а 2 – в титре 1:1600.
При интенсинвазированности 3-мя фасциолами все три животных реагировали положительно: два – в титре 1:1600, а одно – 1:800. Аналогичные результаты получены при инвазированности 4 фасциолами. При этом 2 животных реагировали положительно в титре 1:1600, а одно – 1:800.
Четыре животных, спонтанно инвазированных фасциолами в
количестве
6 – 15 экземпляров также реагировали положительно, причем титры антител у них были выше и составляли у 3-х – 1:1600, а у одного – 1:3200.
Таким образом, из 22 сывороток крупного рогатого скота, спонтанно зараженного фасциолами в количестве 1 – 15 экземпляров, положительно в ИФА реагировали 20 (90,9 %), отрицательно – 2 (9,1 %). В РСК положительно реагировали 18 голов (81,8 %), сомнительно – 2 (9,1 %) и отрицательно – 2 (9,1%). Дальнейшее испытание полученного антигена в ИФА проводили с сыворотками крови крупного рогатого скота, взятого во время убоя животных на Казанском мясокомбинате. После убоя проводили
ветеринарно-санитарную экспертизу органов, а сыворотку крови исследовали серологически и их результаты сопоставляли с данными посмертной диагностики, после чего судили об активности и специфичности фасциолового антигена. Результаты этих исследований представлены в таблице 20.
Из таблицы видно, что как молодняк до 2-х лет (50 голов), а так же нетели и коровы (80 гол.) свободные от гельминтов, показали отрицательные результаты при серологическом исследовании. Из инвазированных фасциолами 58 животных (острая форма) в ИФА положительно реагировали 56 (96,6 %), в РСК – 53 (91,4 %). При исследовании 144 голов крупного рогатого скота, инвазированного половозрелыми фасциолами, в ИФА положительно реагировали 137, что составляет 95,1 % от числа инвазированного крупного рогатого скота. В РСК реакция была положительная у 130 (90,2 %) животных.
Таким образом, диагностическая эффективность ИФА при остром течении фасциолеза равна 96,6 %, при хроническом – 95,1 %, а показатели РСК составляют соответственно 91,4 % и 90,2 %.
При изучении специфичности нами были исследованы серологически 45 инвазированных дикроцелиозом животных. При этом положительные результаты были отмечены у 1 (2,2 %), а в РСК у 2 (4,4 %) животных.
При исследовании 33 голов крупного рогатого скота, инвазированного ларвальным эхинококкозом, в ИФА позитивные показания отметили у двух (6,1%), в РСК у трех животных (9,1 %).
Таким образом, у крупного рогатого скота, инвазированного дикроцелиозом и ларвальным эхинококкозом, при исследовании сывороток их крови в ИФА, а также в РСК с фасциоловым антигеном могут быть перекрестные реакции.
