ный белковый компонент молока, на который действует сычужный фермент.

Однако из-за довольно низкой частоты встречаемости аллеля CSN3^В у черно-пестрой породы крупного рогатого скота (до 10 %), что затрудняет отбор животных с желательными генотипами, возникла необходимость поиска других маркерных генов, ассоциированных с признаками молочной продуктивности и имеющих более высокий уровень полиморфизма.

Было установлено, что такими маркерами могут служить гены сывороточных белков – альфа-лактальбумина (LALBA) и беталактоглобулина (BLG). Эти белки при пастеризации молока денатурируются, при этом бета-лактоглобулин легко взаимодействует с мицеллами казеина, в составе которых переходит в сгусток при коагуляции белков молока.

Бета-лактоглобулин – серосодержащий белок, не осаждающийся сычужным ферментом, биологическая функция которого состоит, предположительно, в транспортной функции – переносе в кишечник железа и витаминов, а также способствовании переваривания жира у новорожденных. К важнейшим технологическим свойствам относится реакция с казеином, в результате которой изменяется тепловая стабильность молока и, кроме того, задерживается процесс сычужного свертывания.

Ген BLG расположен на 11 хромосоме и имеет 4662 п.о. К настоящему времени известны 12 аллельных вариантов. Наиболее распространенными среди черно-пестрой и голштинской пород крупного рогатого скота являются аллели BLG^A и BLG^B . При этом аллель BLG^A отличается от аллеля BLG^B аминокислотными заменами в позициях: Gly⁶⁴ → Asp и Ala¹¹⁸ →Val, соответственно.

В популяциях черно-пестрой и голштинской пород частоты встречаемости гомозиготных генотипов BLG^AA и BLG^BB составляют около 20 %. Аллель BLG^B связывают с высоким содержанием в молоке казеиновых белков, большим процентом жира и лучшими параметрами казеинового коагулята, аллель BLG^A – с повышением общего удоя.

Альфа-лактальбумин является металлопротеином, содержащимся в молоке, и, главным образом, в молозиве крупного рогатого скота. Главная роль LALBA – участие в процессе синтеза лактозы (удерживает молекулу глюкозы при формировании лактозы). Ген LALBA расположен на 5 хромосоме и имеет размер 2 т.п.о. В настоящее время известно 3 аллельных варианта гена LALBA^А , LALBA^В , LALBA^С . Наиболее встречающиеся аллели – LALBA^A и LALBA^B . Вариант LALBA^B отличается от LALBA^A аминокислотной заменой в позиции Arg¹⁰ → Gln⁸ , вызванной точковой мутацией (А→G) в позиции 1689.

LALBA играет функциональную роль в изменении объема синтезируемого молока.

Согласно результатам российских исследователей, частота встречаемости различных генотипов среди черно-пестрой породы составляет: LALBA^AA и LALBA^AB – 35-55 %, LALBA^BB – около 20 %.

Данные о взаимосвязи полиморфных вариантов этого гена с показателями молочной продуктивности, вследствие недостаточного количества исследований, противоречивы, однако в ряде работ указывается, что наибольший удой отмечается у коров с генотипами LALBA^AB и LALBA^BB .

Таким образом, изучение полиморфизма генов белков молока и их использование в качестве генетических маркеров является актуальным и перспективным направлением, однако требует дифференцированного подхода в зависимости от породной принадлежности, генетической структуры популяции и конкретной селекционной задачи.

С учетом полигенного характера детерминации признаков молочной продуктивности, актуальной является задача изучения комплексных генотипов белорусской черно-пестрой породы по генам молочных белков. Это не только даст возможность оценить генетические особенности племенных стад, но и может стать дополнительным средством, позволяющим повысить эффективность отбора по признакам молочной продуктивности с целью дальнейшего совершенствования отечественной породы крупного рогатого скота.

Кроме того, проведение дальнейших исследований в области ДНКполиморфизма позволит расширить спектр генов-маркеров хозяйственно-ценных признаков для комплексной оценки генофонда отечественных пород крупного рогатого скота животных по локусам данных генов. Это позволит проводить в республике маркерсопутствующую селекцию, направленную на повышение генетического потенциала племенных животных, ускорение темпов селекционного процесса и увеличение конкурентоспособности отечественных пород.

В большинстве зарубежных стран с развитым животноводством созданы и выполняются широкомасштабные программы по разработке и использованию методов ДНК-технологии в селекционном процессе. В ряде стран СНГ активные исследования в этом направлении начали проводиться в последние годы. В нашей республике подобные работы находятся лишь на начальном этапе, однако потребность селекционной практики в эффективном ДНК-маркировании продуктивных качеств животных возрастает с каждым годом.

МЕТОД ОЦЕНКИ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ МОЛОЧНЫХ БЕЛКОВ

Оценка полиморфизма гена каппа-казеина

Для амплификации фрагмента гена CSN3 использованы праймеры: CAS1 5´ - ATA GCC AAA TAT ATC CCA ATT CAG T - 3´ CAS2 5´ - TTT ATT AAT AAG TCC ATG AAT CTT G - 3´

ПЦР-программа: «горячий старт» - 5 мин при 95 °С; 35 циклов: денатурация – 1 мин при 94 °С, отжиг – 1 мин при 58 °С, синтез – 1 мин при 72 °С; элонгация – 5 мин при 72 °С.

Длина амплифицированного фрагмента – 530 п.о.

При расщеплении продуктов амплификации рестриктазой HindIII при 37 °С идентифицированы следующие генотипы (рисунок 1):

1 2 3 4 5 6 генотип CSN3^АА – фрагмент 530 п.о. (4, 6)

генотип CSN3^АВ - фрагменты 530,400 и 130 п.о. (1, 2, 3) генотип CSN3^ВВ – фрагменты 400 и 132 п.о. (5)

Рисунок 1 – Рестрикция амплификатов (№ 1-6) с использованием

рестриктазы HindIII

Оценка полиморфизма гена альфа-лактальбумина

Для амплификации фрагмента гена LALBA использованы праймеры: LAC 1: 5´- AAG AGT TGG ATG GAA TCA CC - 3´;

LAC 2: 5´- TTC AAA TTG CTG GCA TCA AGC - 3´

ПЦР-программа: «горячий старт» - 5 мин при 94 °С; 35 циклов: денатурация – 1 мин при 94 °С, отжиг – 1 мин при 63 °С, синтез – 1 мин при 72 °С; элонгация – 10 мин при 72 °С.