Длина амплифицированного фрагмента – 430 п.о.

При расщеплении продуктов амплификации рестриктазой MhII при 37 °С идентифицированы следующие генотипы (рисунок 2):

1 2 3 4 5 6

генотип LALBA^AA – фрагмент 328 и 102 п.о. (3, 4)

генотип LALBA^AВ - фрагменты 328, 211, 117 и 102 п.о. (5, 6) генотип LALBA^ВВ – фрагменты 211, 117 и 102 п.о. (1, 2)

Рисунок 2 – Рестрикция амплификатов (№ 1-6) с использованием

рестриктазы MhII

Оценка полиморфизма гена бета-лактоглобулина

Для амплификации фрагмента гена BLG использованы праймеры: LG 1: 5´- TGT GCT GGA CAC CGA CTA CAA AAA G - 3´

LG 2: 5´- GCT CCC GGT ATA TGA CCA CCC TCT - 3´

ПЦР-программа: «горячий старт» - 5 мин при 94 °С; 35 циклов: де-

натурация – 1 мин при 94 °С, отжиг – 1 мин при 55 °С, синтез – 1 мин при 72 °С; элонгация – 7 мин при 72 °С.

Длина амплифицированного фрагмента – 247 п.о.

При расщеплении продуктов амплификации рестриктазой HaeIII при 37 °С идентифицированы следующие генотипы (рисунок 3):

генотип BLG^AA – фрагмент 148 и 99 п.о. (1, 2)

генотип BLG^AВ - фрагменты 148, 99 и 74 п.о. (3, 5)

генотип BLG^ВВ – фрагменты 99 и 74 п.о. (4)

Рисунок 3 – Рестрикция амплификатов (№ 1-5) с использованием рестриктазы HaeIII

Детекцию результатов трех этапов работы – выделения ДНК, амплификации фрагмента гена CD18 и рестрикции продуктов амплификации – осуществляют электрофоретическим методом с последующей визуализацией на трансиллюминаторе в проходящем УФ-свете с длиной волны 260 нм при помощи компьютерной видеосистемы и программы VITran. В качестве маркера используют ДНК плазмиды pBR322, расщепленную рестриктазой AluI, либо рестриктазой BsuRI.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ МЕТОДА ДНК-ДИАГНОСТИКИ ГЕНОТИПОВ МОЛОЧНЫХ БЕЛКОВ

Проведен анализ генетической структуры белорусской чернопестрой породы по локусам данных генов и взаимосвязи их аллельных вариантов с воспроизводительными качествами быковпроизводителей, молочной продуктивностью коров, физикохимическими и технологическими свойствами молока. В различных половозрастных группах выявлена низкая (1,9-2,4 %) частота встречаемости аллеля CSN3^В . Распределение генотипов по генам сывороточных белков следующее: BLG^AA – 20,7-27,1 %, BLG^AB – 46,7-49,4 %, BLG^BB – 23,5-32,6 %, LALBA^AA – 43,3-46,5 %, LALBA^AB – 40,6-44,0 %, LALBA^BB – 12,7-12,9 %.

Выявлено, что появление в генотипе животных аллеля CSN3^В , также как и аллеля BLG^B , положительно влияет на уровень белка в молоке. Установлено, что содержание белка в молоке коров с наличием в генотипе аллелей CSN3^В и BLG^В на 0,03-0,14 % выше, чем у коров генотипа CSN3^АА . Наблюдаемое в ряде случаев незначительное снижение удоя у коров генотипов CSN3^АВ и CSN3^ВВ по сравнению с животными генотипа CSN3^АА не имело достоверных различий.

Противоположные данные получены при изучении влияния полиморфных вариантов гена LALBA. С появлением в генотипе животных аллеля LALBA^B в гомо- или гетерозиготной форме, показатели удоя повышались на 0,6-2,5 %, соответственно. В то же время выявлена тенденция незначительного снижения белка в молоке коров генотипа LALBA^BB (на 0,02-0,06 %). Результаты, полученные в среднем по стаду, были характерны и для отдельных возрастных групп (первотелок, второй лактации и полновозрастных).

Молоко коров генотипов CSN3^BB и BLG^BB характеризовалось повышенным содержанием белка в молоке (на 0,14 и 0,18 %) и лактозы (на 0,21 и 0,13 %) по сравнению с молоком коров генотипа CSN3^AA и BLG^AA , соответственно.

Образцы сыра, полученные из молока коров генотипов CSN3^ВB , BLG^BB и LALBA^AВ отличались наиболее высоким уровнем выхода сырного полуфабриката (до 15,0 %) и лучшей степенью использования сухих веществ (до 57,34 %). Полученные результаты свидетельствуют о взаимосвязи аллельных вариантов генов молочных белков (каппа-казеина, беталактоглобулина и альфа-лактальбумина) с показателями белковомолочности крупного рогатого скота белорусской черно-пестрой породы, что позволяет использовать их в селекционной практике в качестве маркеров молочной продуктивности.

Разработанный метод ДНК-тестирования животных по локусам генов молочных белков предлагается к применению для:

• прогнозирования молочной продуктивности племенных коров;

• проведения маркерсопутствующей селекции, направленной на отбор животных-носителей желательных аллелей с целью получения от них молока с повышенным содержанием белка и лучшими технологическими свойствами, наиболее пригодного для выработки твердых сыров и других белковомолочных продуктов;

• повышения частоты встречаемости тех или иных аллелей в генофонде отечественного поголовья крупного рогатого скота путем закрепления за маточными стадами быков-производителей с учетом их генотипов по локусам генов CSN3, BLG и LALBA;

• разработки программ племенной работы с белорусской чернопестрой породой.