LALBA играет функциональную роль в изменении объема синтезируемого молока.
Согласно результатам российских исследователей, частота встречаемости различных генотипов среди черно-пестрой породы составляет: LALBAAA и LALBAAB – 35-55 %, LALBABB – около 20 %.
Данные о взаимосвязи полиморфных вариантов этого гена с показателями молочной продуктивности, вследствие недостаточного количества исследований, противоречивы, однако в ряде работ указывается, что наибольший удой отмечается у коров с генотипами LALBAAB и LALBABB .
Таким образом, изучение полиморфизма генов белков молока и их использование в качестве генетических маркеров является актуальным и перспективным направлением, однако требует дифференцированного подхода в зависимости от породной принадлежности, генетической структуры популяции и конкретной селекционной задачи.
С учетом полигенного характера детерминации признаков молочной продуктивности, актуальной является задача изучения комплексных генотипов белорусской черно-пестрой породы по генам молочных белков. Это не только даст возможность оценить генетические особенности племенных стад, но и может стать дополнительным средством, позволяющим повысить эффективность отбора по признакам молочной продуктивности с целью дальнейшего совершенствования отечественной породы крупного рогатого скота.
Кроме того, проведение дальнейших исследований в области ДНКполиморфизма позволит расширить спектр генов-маркеров хозяйственно-ценных признаков для комплексной оценки генофонда отечественных пород крупного рогатого скота животных по локусам данных генов. Это позволит проводить в республике маркерсопутствующую селекцию, направленную на повышение генетического потенциала племенных животных, ускорение темпов селекционного процесса и увеличение конкурентоспособности отечественных пород.
В большинстве зарубежных стран с развитым животноводством созданы и выполняются широкомасштабные программы по разработке и использованию методов ДНК-технологии в селекционном процессе. В ряде стран СНГ активные исследования в этом направлении начали проводиться в последние годы. В нашей республике подобные работы находятся лишь на начальном этапе, однако потребность селекционной практики в эффективном ДНК-маркировании продуктивных качеств животных возрастает с каждым годом.
МЕТОД ОЦЕНКИ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ МОЛОЧНЫХ БЕЛКОВ
Оценка полиморфизма гена каппа-казеина
Для амплификации фрагмента гена CSN3 использованы праймеры: CAS1 5´ - ATA GCC AAA TAT ATC CCA ATT CAG T - 3´ CAS2 5´ - TTT ATT AAT AAG TCC ATG AAT CTT G - 3´
ПЦР-программа: «горячий старт» - 5 мин при 95 °С; 35 циклов: денатурация – 1 мин при 94 °С, отжиг – 1 мин при 58 °С, синтез – 1 мин при 72 °С; элонгация – 5 мин при 72 °С.
Длина амплифицированного фрагмента – 530 п.о.
При расщеплении продуктов амплификации рестриктазой HindIII при 37 °С идентифицированы следующие генотипы (рисунок 1):
1 2 3 4 5 6 генотип CSN3АА – фрагмент 530 п.о. (4, 6)
генотип CSN3АВ - фрагменты 530,400 и 130 п.о. (1, 2, 3) генотип CSN3ВВ – фрагменты 400 и 132 п.о. (5)
Рисунок 1 – Рестрикция амплификатов (№ 1-6) с использованием
рестриктазы HindIII
Оценка полиморфизма гена альфа-лактальбумина
Для амплификации фрагмента гена LALBA использованы праймеры: LAC 1: 5´- AAG AGT TGG ATG GAA TCA CC - 3´;
LAC 2: 5´- TTC AAA TTG CTG GCA TCA AGC - 3´
ПЦР-программа: «горячий старт» - 5 мин при 94 °С; 35 циклов: денатурация – 1 мин при 94 °С, отжиг – 1 мин при 63 °С, синтез – 1 мин при 72 °С; элонгация – 10 мин при 72 °С.
Длина амплифицированного фрагмента – 430 п.о.
При расщеплении продуктов амплификации рестриктазой MhII при 37 °С идентифицированы следующие генотипы (рисунок 2):
1 2 3 4 5 6
генотип LALBAAA – фрагмент 328 и 102 п.о. (3, 4)
генотип LALBAAВ - фрагменты 328, 211, 117 и 102 п.о. (5, 6) генотип LALBAВВ – фрагменты 211, 117 и 102 п.о. (1, 2)
Рисунок 2 – Рестрикция амплификатов (№ 1-6) с использованием
рестриктазы MhII
Оценка полиморфизма гена бета-лактоглобулина
Для амплификации фрагмента гена BLG использованы праймеры: LG 1: 5´- TGT GCT GGA CAC CGA CTA CAA AAA G - 3´
LG 2: 5´- GCT CCC GGT ATA TGA CCA CCC TCT - 3´
ПЦР-программа: «горячий старт» - 5 мин при 94 °С; 35 циклов: де-
натурация – 1 мин при 94 °С, отжиг – 1 мин при 55 °С, синтез – 1 мин при 72 °С; элонгация – 7 мин при 72 °С.
Длина амплифицированного фрагмента – 247 п.о.
При расщеплении продуктов амплификации рестриктазой HaeIII при 37 °С идентифицированы следующие генотипы (рисунок 3):
генотип BLGAA – фрагмент 148 и 99 п.о. (1, 2)
генотип BLGAВ - фрагменты 148, 99 и 74 п.о. (3, 5)
генотип BLGВВ – фрагменты 99 и 74 п.о. (4)
