у №.
ОАО “ГЦВ” - ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии
|
Оттаивание спермы
в пунктах искусственного осеменения
и её оценка
Для оттаивания спермы в пунктах искусственного осеменения, замороженной в открытых гранулах, необходимо иметь стерильные стеклянные флаконы объемом 10 мл, 2,9%-ный раствор лимоннокислого натрия, расфасованный в ампулы по 1 мл, водяную баню или специальные оттаиватели, спиртовый термометр до 50°С, стерильный анатомический пинцет длиной 25-30 см, стерильные марлевые салфетки, полотенце, тампонницу с тампонами, пропитанными 96°-ным спиртом-ректификатом, штатив, микроскоп с нагревательным столиком, чистые предметные и покровные стекла, защитные очки.
Перед началом работы проводят влажную уборку рабочего стола, дезинфицируют спиртовыми тампонами его поверхность. Стерильный инструмент раскладывают на рабочем столе, включают водяную баню или оттаиватель и микроскоп с нагревательным столиком. В водяную баню или оттаиватель помещают необходимое количество флаконов или ампул с 1 см’ 2,9%-ного раствора лимоннокислого натрия, а на нагревательный столик микроскопа кладут чистые предметные и покровные стекла.
После того, как температура водяной бани или оттаивателя достигнет рабочего диапазона (38-40°C), надевают защитные очки, открывают крышку сосуда Дьюара, охлаждают погружением в жидкий азот бранши пинцета, быстро подгягивают к верхней трети горловины сосуда канистру со спермой и извлекают одну гранулу и быстро переносят во флакон или ампулу с 1 cm? 2,9%-ного раствора лимоннокислого натрия.
Время от извлечения гра- [7% ужа
нулы из жидкого азота до №. №. м qi ull в
переноса в водяную баню со- | + в;
ставляет не более 5 с, авремя № 4 \ г ,
оттаивания гранулы в оттаи- | & } 7 a
таивания флакон или ампу- f OF LN 2% :
лувателеосторожно- 8-10 с. Во времяпокачивают,от- №: We) 2 „\e Хх > f ee: {_ Я\
не доставая из водяной бани, №" {®. ‘ ‘а ~~ a
до появления тонкого стер- а => ® ny, У > J
женька льла в грануле. Е 7=.а: g f
После оттаивания спермы SS Е
флакон или ампулу со спер- =.: e
мой сразу вынимают из во-
дянойпротираютбани насухоили оттаивателя,и ставят в Оттаивание спермы в открытых гранулахр
штатив. Температура в помещении пункта должна быть не ниже 18-20°С.
ИЖ
- ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии - ОАО “ГЦВ”
‘ \
Ha предметное стекло, лежащее Ha нагревательном столике микроскопа, имеющем температуру 38-40°С, стеклянной палочкой или пипеткой наносят каплю оттаянной спермы из флакона или ампулы, накрывают покровным стеклом и оценивают. Качество оттаянной спермы определяют под микроскопом по подвижности сперматозоидов. При положительной оценке ее помещают в инструмент для осеменения. Оттаянную сперму необходимо использовать в течение 10-15 мин.
Категорически запрещается оттаивать гранулы при комнатной, температуре или 6 одном флаконе более одной гранулы, а также оставлять оттаянную сперму 8 водяной бане или оттаивателе. Необлицованные гранулы замороженной спермы должны быть правильной округлой формы объемом 0,2 смз. Гранулы объемом менее 0,2 см? или имеющие сколы, а также половинки и осколки гранул должны быть выбракованы, о чем составляют соответствующий акт и высылают рекламацию 6 организацию по искусственному осеменению.
® Оттаивание спермы, замороженной всоломинках
Для оттаивания спермы в соломинках необходимо использовать водяную баню или специальный оттаиватель, термометр, анатомический пинцет длиной 25-30 см, ножницы, стерильные марлевые салфетки, полотенце, тампонницу с тампонами, пропитанными 96°-HbIM спиртом-ректификатом, микроскоп с нагревательным столиком, предметные и покровные стекла, 2,9%-ный раствор лимоннокислого натрия и защитные очки.
После очистки и дезинфекции рабочего стола раскладывают весь необходимый инструмент, включают водяную баню или оттаиватель и нагревательный столик с микроскопом, на который кладут чистые предметные и покровные стекла.
sl i | | Te
Г]
| м | Г
> Ae.
$
Te
o
- Рабочий стол оператора по искусственному осеменению
ибе
ВИЖ - OAO «ГЦВ” “<.
Как только температура водяной бани или оттаивателя достигнет рабочего диапазона (38-40°C), надевают защитные очки, открывают крышку сосуда Дьюара, охлаждают погружением в жидкий азот браниши пинцета, быстро подтягивают к верхней трети горловины сосуда канистру со спермой и извлекают одну соломинку, энергично стряхивают с нее остатки жидкого азота и быстро переносят в оттаиватель или водяную баню.
Сперму в соломинках оттаивают в водяной бане или оттаивателе при температуре 38-40°С в течение 8-10 с. Соломинку после оттаивания насухо протирают марлевой салфеткой и, держа за конец, встряхивают, чтобы воздушный пузырек опустился к пробке. Острыми ножницами или специальным приспособлением отрезают пробку с одного конца соломинки, заправляют соломинку в питриц для осеменения, надевают санитарный чехол, затем, аккуратно нажимая на поршень шприца, выдавливают каплю спермы на предметное стекло, лежащее на нагревательном столике микроскопа, стеклянной палочкой добавяют каплю 2,9%-ного раствора лимоннокислого натрия, перемеитивают, накрывают покровным стеклом и оценивают по подвижности. Оттаянную сперму необходимо использовать в течение 10-15 мин.
Процесс оттаивания семени в соломинках происходит в определенной последовательности.
., Г.
ar 5 ;
ee
“Z
_ z "
5) Я `
ay 7. | а. № 4 м Е в"
Изъятие спермы, замороженной в соломинках, проводится с применением стерильного корнцанга. Процесс должен проходить в горловине сосуда Дьюара и длиться не более5 с. Перепады температуры во время извлечения замороженной спермы для оттаивания снижают ее качество
ИИЦ Т—
