Следует хорошо перемешать образец аккуратным покачиванием, отобрать пробу - 50 мкл (без воздушных пузырей). При удачном заполнении камеры раздастся характерный звук. Через 2,5 мин в диалоговом окне появится результат проведенного измерения, одновременно автоматически производится новая запись с результатами в реестре проведенных исследований.
Фото- и видеодокументирование исследуемых образцов производится после измерения в анализаторе и снимается в цифровом микроскопе с использованием камеры глубиной 20 мкм.
® Пробоподготовка
Нативная сперма для подготовки образца разбавляется в 50 раз. Замороженную сперму следует оттаивать согласно общепринятой методике, довести объем до 1 мл 2,9%-ным цитратом натрия. Если результаты двух повторов резко отличаются друг от друга, то необходимо повторить исследования.
Акроскопический метод оценки качества
спермы
Метод основан на эффекте отраженного света, позволяющего отчетливо различать контуры неповрежденных и поврежденных сперматозоидов. Для данного исследования используют микроскопы МБИ-10, МБИ-6, МИК-1 и другие, укомплектованные темнопольным конденсором - ОИ-10. Для замедления движения сперматозоидов испо;: тъъзуется желатин (10%), применяемый в медицинской практике.
Метод применяется для определения полноценности сперматозоидов и оценки состояния их акросом, сохраняющих ферменты акрозин и гиалуронидазу, которые активно участвуют в процессе оплодотворения.
Г, а
в темном поле:
i cz a - полноценныи©
Wo}af oe сперматозоидТЕс сохранен-
ной акросомой;
- о - сперматозоид
г” и = 4 акросомой;с разрушенной
5109 сперматозоидов после
у‘4 6 id 0 ‚Se„ }_узнотинацпотери электр и ческогоя
HY заряда
- ei ,>)4 aesiaОАО “ГЦВ” - ВИЖ
PN
/ \&
\
Иммунобиологический метод оценки качества спермы (РИМЖ)
Данный метод оценки спермы проводится по реакции иммобилизации сперматозоидов в аутосыворотке крови.
Реакция основана на зависимом от комплемента взаимодействии вне организма циркулирующих в крови аутоантител к сперматозоидам с их поверхностными антигенами. Титр считается положительным, если произошло оседание сперматозоидов на дно лунки. Последовательность постановки* реакции представлена на фото.
И ОИ Pe =
C2e, 4 в \ р
Необходимые составляющие для постановки РИМЖ (общий вид)
ГА] р rs ?' иЕв = г
|a | Сен—\
* у т
АиБнативная сыворотка крови быка, титруется с 1%-ным раствором NaCl в титраторе;
В - сперма исследуемого быка должна быть разбавлена до концентрации 300 млн мл 1%-ным раствором NaCl;
Г - комплемент - нативная сыворотка морской свинки, применяется в разбавлении 1:9 1%-ным раствором NaCl.
В каждой лунке титратора должно быть 0,1 мл титрованной сыворотки крови, 0,1 мл разбавленного комплемента, 0,1 мл спермы, доведенной до концентрации 300 млнв1 мл
\ \ ОАО “TUB ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии \
®
, es | , ’ р
а ® ра ` y ] —. — 9 =
\ he G, я
. a . A р vs * №. -
| Ts ee ae | Fe TA >
Разбавление спермы быка для РИМЖ 300 млн/мл
Разбавление комплемента (1:9)
a ae “TF
1
2
3
|
4 ii гы |
,
5 а 4 3 Bs $ Е. х
* - 4 8 16 32
_ aie асе о Soot alt eel Ems
Раститровка аутосыворотки исследуемого быка (от 2 до 32)
|
}le *
$ |
| < ОРЧЕНЕИИЕНИ erat ia зав. Ч
ee
Подготовленный титратор, закрытый стеклянной крышкой, размещается в водяной бане
Инкубация образцов происходит в термостате при +37°С (титратор должен быть до половины погруженным в водяную баню при +37°С)
==>: ПтОАО “ГЦВ”о~ ВИЖ ИЕ
ИИА
ИН тт Neca “105
