PN
/ \&
\
Иммунобиологический метод оценки качества спермы (РИМЖ)
Данный метод оценки спермы проводится по реакции иммобилизации сперматозоидов в аутосыворотке крови.
Реакция основана на зависимом от комплемента взаимодействии вне организма циркулирующих в крови аутоантител к сперматозоидам с их поверхностными антигенами. Титр считается положительным, если произошло оседание сперматозоидов на дно лунки. Последовательность постановки* реакции представлена на фото.
И ОИ Pe =
C2e, 4 в \ р
Необходимые составляющие для постановки РИМЖ (общий вид)
ГА] р rs ?' иЕв = г
|a | Сен—\
* у т
АиБнативная сыворотка крови быка, титруется с 1%-ным раствором NaCl в титраторе;
В - сперма исследуемого быка должна быть разбавлена до концентрации 300 млн мл 1%-ным раствором NaCl;
Г - комплемент - нативная сыворотка морской свинки, применяется в разбавлении 1:9 1%-ным раствором NaCl.
В каждой лунке титратора должно быть 0,1 мл титрованной сыворотки крови, 0,1 мл разбавленного комплемента, 0,1 мл спермы, доведенной до концентрации 300 млнв1 мл
\ \ ОАО “TUB ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии \
®
, es | , ’ р
а ® ра ` y ] —. — 9 =
\ he G, я
. a . A р vs * №. -
| Ts ee ae | Fe TA >
Разбавление спермы быка для РИМЖ 300 млн/мл
Разбавление комплемента (1:9)
a ae “TF
1
2
3
|
4 ii гы |
,
5 а 4 3 Bs $ Е. х
* - 4 8 16 32
_ aie асе о Soot alt eel Ems
Раститровка аутосыворотки исследуемого быка (от 2 до 32)
|
}le *
$ |
| < ОРЧЕНЕИИЕНИ erat ia зав. Ч
ee
Подготовленный титратор, закрытый стеклянной крышкой, размещается в водяной бане
Инкубация образцов происходит в термостате при +37°С (титратор должен быть до половины погруженным в водяную баню при +37°С)
==>: ПтОАО “ГЦВ”о~ ВИЖ ИЕ
ИИА
ИН тт Neca “105
=
4 \
Через 2 ч после инкубации образцов в биологическом термостате при температуре +37°C титратор вынимается из термостата, осторожно обсуптивается с наружной стороны с помощью фильтровальной бумаги, затем проводится читка реакции.
Алекс Дон Криг Магистр Рам @ ( ry@
К | (224)=, 7(Se =.=.) =.(2% ~oF ®* _ @
= = {
2 (ae) (3) (№) (39 ‚2 &
4 (eee\ ( Be) \ (Sor (Sor > <>< )<
SBF AAG2. oF + ©
16 (8)3)ge) (52)9 (42) (2EB(3 Cres)(FACA EB(92 И) хо +(
Z> И (> в (
СЯ Я 9 9 ©
Условная схема читки реакции: Общий вид титратора `
1-положительная реакция; при читке реакции
2-отрицательная реакция B реальном режиме
К - контроль (0,1 мл 1%-ного NaCl + 0,1 мл разбавленной спермы+ 0,1 мл разбавленного комплемента).
Титры 2-32 (0,1 мл разбавленной сыворотки крови разной титровки+ 0,1 мл разбавленной спермы+ 0,1 мл разбавленного комплемента):
бык Алекс - аутоиммунность (титр 16);
бык Дон - аутоиммунность (титр 8);
бык Криг - аутоиммунность (титр 4);
бык Магистр - аутоиммунность (титр 2);
бык Рэм - аутоиммунность отсутствует
Аутоиммунностьу быков-производителей в основном носит (85%) обратимый характер. Причиной появления аутоантител являются вторичный иммунодефицит алиментарного происхождения и нарушения технологического режима.
Для устранения аутоиммунности у быков-производителей и вторичного иммунодефицита применяются естественные иммуностимуляторы растительного происхождения, витамины, белки, каротин, а также различные неспецифические синтетические иммуностимуляторы.
Установлено, что аутоиммунность 6 высоких титрах способствует снижению peзультативности осеменения на 10-15%.
ииВИЖ - ОАО “TLIB”— Sac|
ВИЖ - ОАО
