бриобласта. Следовательно, они имеют большую вероятность попасть в состав тела зародыша.
Морула представляет собой шаровидное скопление бластомеров, лишенное полости, а бластоциста - пузырек, состоящий из стенки (трофобласт), полости с жидкостью (бластоцель) и скопления клеток эмбриобласта на одном из полюсов внутренней поверхности трофобласта.
Процесс образования полости, то есть образования бластоцисты, называется кавитацией . Накопление жидкости в зародыше требует затрат энергии и зависит от активного переноса ионов Nа во внутренние межклеточные пространства. В плазматических мембранах клеток трофобласта имеется калийнатриевый насос, который переносит ионы Na внутрь зародыша, при этом осмотическое давление повышается и сюда начинает поступать жидкость. Накапливаясь между бластомерами, жидкость отодвигает бластомеры к одному из полюсов трофобласта, здесь из них формируется эмбриобласт. Плотные контакты, которыми соединяются клетки трофобласта помогают удержать жидкость в полости.
Чем больше бластополость и лучше развита внутренняя клеточная масса и трофобласт – тем больше потенциал эмбриона к имплантации. Когда полость бластоцисты достигает значительного размера, источившаяся за счет растяжения зона пеллюцида разрывается и начинается процесс хэтчинга , т.е. выхода бластоцисты из зоны пеллюцида. Только после окончания этого процесса бластоциста способна имплантироваться в эндометрий матки.
1.6 ТОТИПОТЕНТНОСТЬ
Зигота содержит полный набор генов и всю генетическую информацию данного вида, породы и особи.
Тотипотентность – это сдобность клетки к формированию любой ткани, вплоть до развития из неё нормальной особи.
Клетки (бластомеры) ранних эмбрионов (вплоть до 8- клеточной стадии) идентичны и вплоть до 8-клеточной стадии зародыш обладает поразительной способностью к регуляции развития, то есть из каждого отдельного бластомера может образоваться полноценное животное. Это означает, что бластомеры способны заменять друг друга, что дает возможность возникновения эмбриона из одного бластомера. Деградированные бластомеры заменяются хорошими, на всех стадиях развития, до наступления процесса компактизации. Также, из поделенных пополам морул и бластоцист, половинки которых содержат клетки эмбрио- и трофобласта, можно получить полноценный эмбрион.
Возникновение однояйцевых близнецов – это естественное свойство тотипотентности. Использование этого свойства дает возможность получать идентичных близнецов.
1.7 ВРЕМЕННЫЕ ПАРАМЕТРЫ РАЗВИТИЯ ЭМБРИОНОВ
Овуляция у нормально циклирующих коров происходит через 30-32 ч после начала течки. Оплодотворение ооцита полноценным спермием наступает уже через 3-4 ч после овуляции. Слияние пронуклеусов происходит через 15 ч. после оплодотворения. Оплодотворенные in vitro яйцеклетки коров достигают 2, 4 и 8-клеточной фазы в период между 15-24 ч, 35-40 ч и через 45-50 ч после оплодотворения. Ранние и поздние морулы, а также ранние бластоцисты появляются через 120 часов. Через 8 суток в среде обнаруживаются поздние и экспандированные бластоцисты, через 264 часа (11 суток) – вышедшие из зоны пеллюцида.
В таблице 1 указана динамика развития эмбрионов in vitro и in vivo.
Таблица 1 – Динамика развития эмбрионов in vitro и in vivo
| Стадия развития | Время развития, ч | |
|---|---|---|
| in vitro | in vivo | |
| 2-клеточные | 15-24 | 24-72 |
| 4-клеточные | 35-40 | 48-72 |
| 8-клеточные | 45-50 | 72-120 |
| 16-клеточные | 45-50 | 96-120 |
| Мо I | 120-144 | 120-144 |
| Мо II | 120-172 | 120-168 |
| Бл I | 120-172 | 168-192 |
| Бл II | 192-216 | 168-216 |
| Бл III | 192-216 | 192-240 |
| Бл IV, V | 264 | 216-264 |
2. ОБЩИЕ ПОДХОДЫ К ОЦЕНКЕ КАЧЕСТВА КЛЕТОК
Оценка состояния зародышей служит для отбора неоплодотворенных яйцеклеток и определения стадии развития эмбрионов, а также выявления повреждений отдельных бластомеров или всего эмбриона. Морфологическая оценка является основным методом определения качества клеток. При этом учитываются основные морфологические признаки полноценности зародышей, которые могут визуально наблюдаться у эмбриона, а именно: целостность и равномерность развития бластомеров, прозрачность перивителинового пространства, целостность зоны пеллюцида, соответствии стадии развития возрасту эмбриона. Частицы на поверхности зоны пеллюцида указывают на возможность бактериального заражения. Часто при инфицировании половых органов доноров яйцеклетки остаются неоплодотворенными. Различия в величине между бластомерами в пределах
