2:1 оцениваются как нормальные, так как к исследованию попадают эмбрионы при различной последовательности циклов деления. Более сильные различия величины (4:1 и больше) возникают, если отдельные бластомеры прекращают деление. Сжатие бластомеров - это в большинстве случаев последствие гипертонических нагрузок. Деформация возникает при измененном внутреннем давлении клеток, или в результате дефектов в клеточных мембранах.
По результатам оценки делается заключение о качестве эмбриона и принимается решение о его дальнейшем использовании.
3. ООЦИТЫ И ЯЙЦЕКЛЕТКИ
3.1 МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА КАЧЕСТВА ООЦИТОВ IN VITRO
Использование технологии in vitro с достаточной эффективностью невозможно без определения способности половых клеток к полноценному созреванию и оплодотворению. Одним из классических способов определения жизнеспособности ооцитов считается оценка их морфологического состояния с использованием прижизненной микроскопии.
Популяция выделенных фолликулярных ооцитов является весьма неоднородной как по морфологии, так и по функциональному состоянию. У 30% всех яйцеклеток выявляются видимые признаки дегенерации: сжатие или фрагментация ооплазмы, увеличение перивителинового пространства, отслоение или полное отсутствие кумулюса; деформированная, неравномерная по толщине прозрачная оболочка и др. Остальные клетки можно считать пригодными для культивирования, однако при цитогенетическом анализе ооцитов после 24 часов культивирования обнаруживается около 80% зрелых, пригодных к оплодотворению яйцеклеток.
В организме самки ооциты созревают в фолликуле. Тесная связь ооцита и окружающих его кумулюсных клеток обеспечивает его нормальное развитие и созревание.
По состоянию кумулюса яйцеклетки можно подразделить на следующие группы:
-
Ооциты с компактным, многослойным, плотно прилегающим к ооциту, кумулюсом.
-
Ооциты с разрыхленным многослойным кумулюсом.
-
Ооциты с разрыхленным, частично отслоившимся кумулюсом или в виде разрозненных участков, покрывающих ооцит.
Ооплазму у ооцита можно охарактеризовать по следующим признакам:
-
Мелкозернистая, равномерно заполняющая пространство под прозрачной оболочкой.
-
Ооплазма с участками гранулярной конденсации, равномерно заполняющая пространство под прозрачной оболочкой.
Прозрачная оболочка, обеспечивающая связь внутренних структур ооцита с внешней средой, характеризуется следующими данными: опалесцирующая, равномерная по ширине, округлой формы.
Из морфологической оценки качества вышеперечисленных структур слагается общая оценка качества ооциткумулюсного комплекса и его способности к дальнейшему развитию и созреванию (таблица 2). Популяцию полученных ооциткумулюсных комплексов рекомендуется разделять на группы по следующим морфологическим признакам:
1 группа - компактный, многослойный, плотно прилегающий к ооциту кумулюс; ооплазма мелкозернистая, равномерно заполняющая пространство под прозрачной оболочкой;
2 группа - компактный, многослойный, плотно прилегающий к ооциту кумулюс; ооплазма имеет участки гранулярной конденсации;
3 группа - разрыхленный многослойный кумулюс; ооплазма имеет участки гранулярной конденсации;
4 группа - частично отслоившийся рыхлый кумулюс; ооплазма с гранулярной конденсацией;
5 группа - ооциты без кумулюса с мелкозернистой ооплазмой, равномерно заполняющей пространство под прозрачной оболочкой.
Таблица 2 - Классификация ооцит-кумулюсных комплексов
| № п/п | Морфологические признаки | Оценка |
|---|---|---|
| 1 | Многослойный компактный кумулюс (не менее 3-х слоев) плотно прилегающий к зоне пеллюци- да, ооплазма мелкозернистая, равномерно запол- няет пространство под прозрачной оболочкой, которая равномерная по толщине, опалесцирует, не имеет никаких нарушений, округлая по форме | 5 |
| 2 | Многослойный компактный или разрыхленный кумулюс, плотно прилегающий к зоне пеллюци- да, ооплазма имеет участки гранулярной конден- сации, прозрачная оболочка округлая, опалесци- рует, не имеет дефектов, равномерная по толщи- не | 4 |
| 3 | Частично отслоившийся кумулюс, ооплазма име- ет участки гранулярной конденсации, прозрачная оболочка равномерная по толщине, округлая по форме | 3 |
| 4 | Ооцит без кумулюса, ооплазма мелкозернистая, равномерно заполняет зону пеллюцида, прозрач- ная оболочка округлая, равномерная по толщине | 2 |
3.2 МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА КАЧЕСТВА ООЦИТОВ И ЯЙЦЕКЛЕТОК ПОЛУЧЕННЫХ IN VIVO
Оценка ооцитов заканчивается, если они были идентифицированы как “неоплодотворенные яйцеклетки”. Все неоплодотворенные яйцеклетки, которые вымываются из матки между 6- 9 днем являются дегенерированными. Частым явление неоплодотворенных ооцитов является их сморщивание, смещение гранулярных составных частей цитоплазмы, а также их полное растворение. Фрагментативное разрушение ооплазмы ведет к образованию псевдобластомеров. Хорошо сохранившиеся ооциты могут встречаться даже на 7-14 день. Также нужно обращать внимание на то, что при некоторых формах дегенерации, и при
