ВВЕДЕНИЕ
Трансплантация эмбрионов – это один из комплексных биотехнологических методов ускоренного размножения животных с высокой генетической ценностью. Одним из важнейших технологических процессов данного метода является оценка качества эмбрионов и их жизнеспособности. Связано это с тем, что полиовуляция вызывается экзогенными гонадотропинами, инъекция которых способна вызвать в организме животного кратковременные отклонения в секреции эндогенных гормонов, что в свою очередь может привести к нарушению процессов фолликуло- и оогенеза, а следовательно влиять на оплодотворяемость яйцеклеток и развитие ранних зародышей. Кроме этого на жизнеспособность эмбрионов могут оказывать действенное влияние различного рода манипуляции: извлечение, кратковременное хранение in vitro , криоконсервация, микрохирургия и др.
Оценка качества проводится в промежутке между получением эмбрионов и их последующим использованием, и включает морфологическую диагностику и заключение об их пригодности к трансплантации или криоконсервации.
Морфологическая оценка безвредна и технически стоит недорого. Она проводится под микроскопическим контролем во время манипуляций, которые и без того необходимы. Кроме морфологической оценки качества, иногда определяется жизнеспособность ооцитов и зародышей, для чего применяют кратковременное их культивирование in vitro .
В данном пособии отражены все основные правила по оценке качества ооцитов и эмбрионов в системах in vivo и in vitro . И, тем не менее, данное издание не может заменить личный опыт, который накапливается при непосредственной работе с эмбриональным материалом.
Настоящее учебно-методическое пособие предназначено для научных работников, аспирантов, специалистов центров, пунктов трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота, а также может служить в качестве учебного пособия для студен-
тов и учащихся учреждений, обеспечивающих получение высшего и среднего образования по специальностям 1-74 03 01 «Зоотехния» и 1-74 03 02 «Ветеринария».
1. ОСНОВЫ КАЧЕСТВЕННОГО РОСТА И РАЗВИТИЯ ЭМБРИОНОВ
1.1 ФОЛЛИКУЛОГЕНЕЗ
Фолликул яичника (лат. folliculus ovaricus ) - структурный компонент яичника, состоящий из яйцеклетки, окружённой слоем эпителиальных клеток и двумя слоями соединительной ткани.
В соответствии со стадией развития различают четыре типа присутствующих в яичнике фолликулов (рис. 1.1): примордиальные, первичные, вторичные и антральные. Антральные фолликулы в свою очередь подразделяются на растущие и доминантные, или предовуляторные.
Примордиальные - самые незрелые и самые маленькие (диаметр около 50 мкм ) из фолликулов, присутствующих в корковом слое яичника. Они закладываются в яичниках еще до рождения. Ооциты, находящиеся внутри такого фолликула окружены одним слоем чешуйчатых клеток. Образуются они в процессе митотической пролиферации первичных зародышевых клеток – оогоний. Количество таких фолликулов в яичнике составляет 1-2 миллиона. Далее оогонии проходят Профазу I мейотического деления и становятся первичными ооцитами. Часть из этих ооцитов окружается монослоем кубических эпителиальных клеток, и образуется зародышевый или первичный фолликул. Остальные дегенерируют.
На этом этапе развитие фолликулов приостанавливается вплоть до рождения. К этому времени в яичнике остается примерно 300 тыс. фолликулов. При наступлении половой зрелости гипофиз начинает вырабатывать ФСГ и к созреванию стимулируется от 5 до 15 первичных фолликулов, которые переходят на следующую стадию своего развития, стадию вторичного, или преантрального фолликула, размер которого достигает 150-200 мкм .
Начинает расти ооцит. Его внешняя поверхность покрывается гликопротеином и гликозаминогликанами, формирующими относительно толстую, полупрозрачную оболочку, называемую зоной пеллюцида. Теперь ооцит покрыт 2-4 слоями фолликулярных клеток. По мере дальнейшего развития вокруг ооцита формируется полость и заполняется фолликулярной жидкостью. Такой фолликул называется растущим антральным, или полостным фолликулом. Иногда такой фолликул называется третичным. В этот период такие фолликулы можно различить на поверхности яичника невооруженным глазом. Их размер колеблется от менее чем 1 мм до 1,5-2 см.
В антральном фолликуле формируются три различных слоя эпителиальных клеток: наружный слой ( theca externa ), внутренний слой ( theсa interna ) и слой клеток гранулезы. Тека экстерна состоит из свободной соединительной ткани, которая плотно окружает и поддерживает фолликул. Тека интерна отвечает за секрецию андрогенов, которые в дальнейшем являются предшественниками биосинтеза эстрогенов в гранулезных клетках фолликула. Слой гранулезных клеток отделен от теки интерны тонкой базальной мембраной. Клетки гранулезы вырабатывают целый ряд веществ и имеют рецепторы к фолликулостимулирующему гормону (ФСГ). Наиболее важными компонентами, секретирующимися этими клетками являются эстрогены, ингибины и фолликулярная жидкость. Кроме этого предполагается, что грунулеза регулирует созревание ооцита. Таким образом, третичный фолликул становится органом эндокринной системы.
Дальнейший рост антрального фолликула приводит к образованию доминантного или предовуляторного фолликула. Большую часть его часть занимает полость. Количество фолликулярной жидкости в 100 раз больше чем в антральном растущем фолликуле. Примерно за 24 часа до овуляции клетки теки интерны начинают вырабатывать большое количество эстрогенов. Повышение содержания эстрогенов стимулирует выброс ЛГ, который инициирует овуляцию. В стенке фолликула образуется выпячивание (стигма), которое разрывается и яйцеклетка выходит из фолликула. Если по каким-то причинам овуляция не произошла фолликул превращается в кисту.
