1.6 ТОТИПОТЕНТНОСТЬ
Зигота содержит полный набор генов и всю генетическую информацию данного вида, породы и особи.
Тотипотентность – это сдобность клетки к формированию любой ткани, вплоть до развития из неё нормальной особи.
Клетки (бластомеры) ранних эмбрионов (вплоть до 8- клеточной стадии) идентичны и вплоть до 8-клеточной стадии зародыш обладает поразительной способностью к регуляции развития, то есть из каждого отдельного бластомера может образоваться полноценное животное. Это означает, что бластомеры способны заменять друг друга, что дает возможность возникновения эмбриона из одного бластомера. Деградированные бластомеры заменяются хорошими, на всех стадиях развития, до наступления процесса компактизации. Также, из поделенных пополам морул и бластоцист, половинки которых содержат клетки эмбрио- и трофобласта, можно получить полноценный эмбрион.
Возникновение однояйцевых близнецов – это естественное свойство тотипотентности. Использование этого свойства дает возможность получать идентичных близнецов.
1.7 ВРЕМЕННЫЕ ПАРАМЕТРЫ РАЗВИТИЯ ЭМБРИОНОВ
Овуляция у нормально циклирующих коров происходит через 30-32 ч после начала течки. Оплодотворение ооцита полноценным спермием наступает уже через 3-4 ч после овуляции. Слияние пронуклеусов происходит через 15 ч. после оплодотворения. Оплодотворенные in vitro яйцеклетки коров достигают 2, 4 и 8-клеточной фазы в период между 15-24 ч, 35-40 ч и через 45-50 ч после оплодотворения. Ранние и поздние морулы, а также ранние бластоцисты появляются через 120 часов. Через 8 суток в среде обнаруживаются поздние и экспандированные бластоцисты, через 264 часа (11 суток) – вышедшие из зоны пеллюцида.
В таблице 1 указана динамика развития эмбрионов in vitro и in vivo.
Таблица 1 – Динамика развития эмбрионов in vitro и in vivo
| Стадия развития | Время развития, ч | |
|---|---|---|
| in vitro | in vivo | |
| 2-клеточные | 15-24 | 24-72 |
| 4-клеточные | 35-40 | 48-72 |
| 8-клеточные | 45-50 | 72-120 |
| 16-клеточные | 45-50 | 96-120 |
| Мо I | 120-144 | 120-144 |
| Мо II | 120-172 | 120-168 |
| Бл I | 120-172 | 168-192 |
| Бл II | 192-216 | 168-216 |
| Бл III | 192-216 | 192-240 |
| Бл IV, V | 264 | 216-264 |
2. ОБЩИЕ ПОДХОДЫ К ОЦЕНКЕ КАЧЕСТВА КЛЕТОК
Оценка состояния зародышей служит для отбора неоплодотворенных яйцеклеток и определения стадии развития эмбрионов, а также выявления повреждений отдельных бластомеров или всего эмбриона. Морфологическая оценка является основным методом определения качества клеток. При этом учитываются основные морфологические признаки полноценности зародышей, которые могут визуально наблюдаться у эмбриона, а именно: целостность и равномерность развития бластомеров, прозрачность перивителинового пространства, целостность зоны пеллюцида, соответствии стадии развития возрасту эмбриона. Частицы на поверхности зоны пеллюцида указывают на возможность бактериального заражения. Часто при инфицировании половых органов доноров яйцеклетки остаются неоплодотворенными. Различия в величине между бластомерами в пределах
2:1 оцениваются как нормальные, так как к исследованию попадают эмбрионы при различной последовательности циклов деления. Более сильные различия величины (4:1 и больше) возникают, если отдельные бластомеры прекращают деление. Сжатие бластомеров - это в большинстве случаев последствие гипертонических нагрузок. Деформация возникает при измененном внутреннем давлении клеток, или в результате дефектов в клеточных мембранах.
По результатам оценки делается заключение о качестве эмбриона и принимается решение о его дальнейшем использовании.
3. ООЦИТЫ И ЯЙЦЕКЛЕТКИ
3.1 МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА КАЧЕСТВА ООЦИТОВ IN VITRO
Использование технологии in vitro с достаточной эффективностью невозможно без определения способности половых клеток к полноценному созреванию и оплодотворению. Одним из классических способов определения жизнеспособности ооцитов считается оценка их морфологического состояния с использованием прижизненной микроскопии.
Популяция выделенных фолликулярных ооцитов является весьма неоднородной как по морфологии, так и по функциональному состоянию. У 30% всех яйцеклеток выявляются видимые признаки дегенерации: сжатие или фрагментация ооплазмы, увеличение перивителинового пространства, отслоение или полное отсутствие кумулюса; деформированная, неравномерная по толщине прозрачная оболочка и др. Остальные клетки можно считать пригодными для культивирования, однако при цитогенетическом анализе ооцитов после 24 часов культивирования обнаруживается около 80% зрелых, пригодных к оплодотворению яйцеклеток.
В организме самки ооциты созревают в фолликуле. Тесная связь ооцита и окружающих его кумулюсных клеток обеспечивает его нормальное развитие и созревание.
